ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית
Summary
בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) מנגן עם כלוריד (MnCl<sub> 2</sub>) אשר יכול להיכנס לתאים באמצעות מתח מגודרת ערוצי סידן כאשר התאים הם פעילים ביולוגית. בנוסף, אנו מציגים את השימוש MnCl<sub> 2</sub> כסוכן הסלולר לעומת MRI כדי לקבוע את הכדאיות במבחנה של hESC.
Abstract
בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) הדגימו את היכולת לשקם את שריר הלב הפגוע. דימות תהודה מגנטית (MRI) התפתחה כאחד שיטות הדמיה משתלט על מנת להעריך את שיקום שריר הלב הפגוע. יתר על כן, לשעבר vivo סוכנים תיוג, כגון תחמוצת ברזל חלקיקים, להיות מועסק לעקוב בתרגום בתאי גזע המושתלים. עם זאת, שיטה זו אינה לפקח על נכס מהותי ביולוגיה תאית לגבי הכדאיות של התאים המושתלים. זה כבר ידוע כי כלוריד ומגנזיום (MnCl 2) נכנס לתאים באמצעות סידן מתח מגודרת (Ca 2 +) תעלות כאשר התאים הם פעילים ביולוגית, ומצטברים intracellularly לייצר T 1 אפקט התקצרות. לכן, אנו ממליצים מנגן מונחה MRI יכול להיות שימושי כדי לפקח על כדאיות התא לאחר ההשתלה של hESC לתוך שריר הלב.
בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית hESC עם MnCl 2 ואיך תאים אלה ניתן לראות בבירור באמצעות MRI במבחנה. במקביל, הפעילות הביולוגית של Ca 2 + ערוצים תהיה מווסתת ניצול הן Ca 2 + ערוץ אגוניסט אנטגוניסט וגם כדי להעריך את השינויים אותות במקביל.
Protocol
Discussion
תוצאות אלו מצביעות כי אינו מנגן להיכנס דרך ערוץ מתח מגודרת סידן, מנגן יכול לשמש חומר ניגוד MRI, אשר יכול גם להציג את כדאיות התא. לכן, אנו ממליצים מנגן מונחה MRI יכול להיות שימושי כדי לפקח על כדאיות התא לאחר ההשתלה של בתאי גזע עובריים אנושיים לתוך שריר הלב.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Manganese chloride tetrahydrate | Reagent | Sigma | M8054 | |
| (S)-(-)-Bay K8644 | Reagent | Sigma | B133 | |
| (+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration | Reagent | Sigma | V4629 | |
| Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V | Reagent | VWR | VW 3257-1 | |
| Feridex I.V. | Reagent | Berlex Laboratories | NDC 59338-7035-5 | ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL |
| Protamine sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners | NDC 63323-229-05 | 50 mg (10 mg/mL) |
| Knockout SR (Serum replacement for ES cells) | Reagent | Gibco | 10828 | |
| DMEM/F12 (1:1) | Reagent | Gibco | 11330 | |
| 2- mercaptoethanol 98+% | Reagent | Sigma | M 3148 | |
| L-Glutamine 200mM 100x | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution | Reagent | Gibco | 11140 | |
| Signa HDx 3T MRI | Tool | GE Medical Systems | ||
| clinical Knee coil | Tool | GE Medical Systems | ||
| DPBS | Reagent | Gibco | 14190 |
References
- Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
- Aoki, I., et al. Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride. NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).
- Arbab, A. S., et al. Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI. Blood. 104, 1217-1223 (2004).
- Arbab, A. S., Frank, J. A. Cellular MRI and its role in stem cell therapy. Regen Med. 3, 199-215 (2008).
