자기 공명 영상을위한 인간 배아 줄기 세포의 체외 라벨에
Summary
이 비디오에서는, 우리는 망간 염화와 인간의 배아 줄기 세포를 (hESC) (MnCl 라벨하는 방법을 보여주는데<sub> 2</sub>) 세포 생물학적으로 활성화된 경우 전압 – 문이 칼슘 채널을 통해 세포를 입력할 수있는. 또한, 우리는 MnCl의 사용을 보여<sub> 2</sub> 셀룰러 MRI 대비 에이전트로 hESC의에서 체외의 생존을 결정합니다.
Abstract
인간 배아 줄기 세포는 (hESC) 부상 myocardium를 복원하는 능력을 증명하고있다. 자기 공명 영상 (MRI)는 부상 myocardium의 복원을 평가하는 주된 이미징 modalities 중 하나로 떠오르고있다. 또한, 이러한 철 – 산화 nanoparticles으로 전 생체내 라벨 에이전트는, 추적하기 위해 고용 및 이식 줄기 세포를 집중하고 있습니다. 그러나,이 방법은 이식 세포의 생존에 관한 근본적인 세포 생물학 속성을 모니터하지 않습니다. 그것은 망간 염화 (MnCl 2) 전압 – 문이 칼슘 (칼슘 2 +) 세포 생물학적으로 활성화되어 채널을 통해 세포를 입력하고, T 1 단축 효과를 생성하는 intracellularly 축적되는 것으로 알려져있다. 따라서, 우리는 망간 – 안내 MRI는 myocardium에 hESC의 이식 후 세포 생존을 모니터하는 데 유용할 수 있습니다하는 것이 좋습니다.
이 비디오에서는, 우리는 MnCl 2 어떻게 이들 세포는 명확하게 체외에서 MRI를 사용하여 볼 수와 hESC 레이블을하는 방법을 보여줍니다. 동시에, CA 2 생물 학적 활동 + – 채널 수반하는 신호 변경을 평가하기 위해 칼슘 2 + 채널 작용제 및 길항제를 모두 활용 변조된 것이다.
Protocol
Discussion
이러한 결과는 망간도 세포 생존을 보여줄 수 전압 – 게이 티드 칼슘 채널 및 망간은 MRI 대비 에이전트로 사용할 수를 통해 입력 않는다는 것을 나타냅니다. 따라서, 우리는 망간 – 안내 MRI는 myocardium로 인간 배아 줄기 세포의 이식 후 세포 생존을 모니터하는 데 유용할 수 있습니다하는 것이 좋습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Manganese chloride tetrahydrate | Reagent | Sigma | M8054 | |
| (S)-(-)-Bay K8644 | Reagent | Sigma | B133 | |
| (+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration | Reagent | Sigma | V4629 | |
| Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V | Reagent | VWR | VW 3257-1 | |
| Feridex I.V. | Reagent | Berlex Laboratories | NDC 59338-7035-5 | ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL |
| Protamine sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners | NDC 63323-229-05 | 50 mg (10 mg/mL) |
| Knockout SR (Serum replacement for ES cells) | Reagent | Gibco | 10828 | |
| DMEM/F12 (1:1) | Reagent | Gibco | 11330 | |
| 2- mercaptoethanol 98+% | Reagent | Sigma | M 3148 | |
| L-Glutamine 200mM 100x | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution | Reagent | Gibco | 11140 | |
| Signa HDx 3T MRI | Tool | GE Medical Systems | ||
| clinical Knee coil | Tool | GE Medical Systems | ||
| DPBS | Reagent | Gibco | 14190 |
References
- Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
- Aoki, I., et al. Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride. NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).
- Arbab, A. S., et al. Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI. Blood. 104, 1217-1223 (2004).
- Arbab, A. S., Frank, J. A. Cellular MRI and its role in stem cell therapy. Regen Med. 3, 199-215 (2008).
