चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के लिए मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की इन विट्रो लेबल में
Summary
इस वीडियो में, हम दिखा रहे हैं कैसे मैंगनीज क्लोराइड के साथ मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESC) (MnCl लेबल<sub2></sub>) जो वोल्टेज gated कैल्शियम चैनल के माध्यम से कोशिकाओं में प्रवेश जब कोशिकाओं biologically सक्रिय कर सकते हैं. इसके अतिरिक्त, हम MnCl का उपयोग दिखाने<sub2></sub> सेलुलर एमआरआई इसके विपरीत एजेंट के रूप में इन विट्रो व्यवहार्यता hESC के निर्धारित करने के लिए.
Abstract
मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESC) घायल मायोकार्डियम बहाल करने की क्षमता का प्रदर्शन किया है. चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) के एक प्रमुख इमेजिंग रूपात्मकता के रूप में उभरा है घायल मायोकार्डियम की बहाली का आकलन. इसके अलावा, पूर्व vivo लेबलिंग एजेंट, जैसे लोहे के आक्साइड नैनोकणों ट्रैक करने के लिए नियोजित किया गया है और प्रतिरोपित स्टेम कोशिकाओं स्थानीयकरण. हालांकि, इस पद्धति एक मौलिक सेलुलर जीव विज्ञान प्रतिरोपित कोशिकाओं की व्यवहार्यता के बारे में संपत्ति की निगरानी नहीं करता है. यह ज्ञात किया गया है कि मैंगनीज क्लोराइड (2 MnCl) वोल्टेज gated कैल्शियम चैनल (सीए + 2) जब कोशिकाओं biologically सक्रिय कर रहे हैं के माध्यम से कोशिकाओं में प्रवेश करती है, और intracellularly जम टी 1 छोटा प्रभाव उत्पन्न है. इसलिए, हम बताते हैं कि एमआरआई मैंगनीज निर्देशित मायोकार्डियम में hESC के प्रत्यारोपण के बाद सेल व्यवहार्यता की निगरानी के लिए उपयोगी हो सकता है.
इस वीडियो में, हम दिखा देंगे कि कैसे 2 MnCl और कैसे उन कोशिकाओं को स्पष्ट रूप से इन विट्रो में एमआरआई का उपयोग करके देखा जा सकता है है के साथ hESC लेबल करने के लिए. एक ही समय में, 2 Ca की जैविक गतिविधि + चैनलों modulated किया जा दोनों agonist 2 + चैनल Ca और विरोधी का उपयोग करने के लिए सहवर्ती संकेत परिवर्तन का मूल्यांकन होगा .
Protocol
Discussion
इन परिणामों से संकेत मिलता है कि मैंगनीज वोल्टेज gated कैल्शियम चैनल, और मैंगनीज एमआरआई इसके विपरीत एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, जो भी सेल व्यवहार्यता दिखा सकते हैं के माध्यम से प्रवेश करता है. इसलिए,…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Manganese chloride tetrahydrate | Reagent | Sigma | M8054 | |
| (S)-(-)-Bay K8644 | Reagent | Sigma | B133 | |
| (+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration | Reagent | Sigma | V4629 | |
| Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V | Reagent | VWR | VW 3257-1 | |
| Feridex I.V. | Reagent | Berlex Laboratories | NDC 59338-7035-5 | ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL |
| Protamine sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners | NDC 63323-229-05 | 50 mg (10 mg/mL) |
| Knockout SR (Serum replacement for ES cells) | Reagent | Gibco | 10828 | |
| DMEM/F12 (1:1) | Reagent | Gibco | 11330 | |
| 2- mercaptoethanol 98+% | Reagent | Sigma | M 3148 | |
| L-Glutamine 200mM 100x | Reagent | Gibco | 25030 | |
| Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution | Reagent | Gibco | 11140 | |
| Signa HDx 3T MRI | Tool | GE Medical Systems | ||
| clinical Knee coil | Tool | GE Medical Systems | ||
| DPBS | Reagent | Gibco | 14190 |
References
- Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
- Aoki, I., et al. Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride. NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).
- Arbab, A. S., et al. Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI. Blood. 104, 1217-1223 (2004).
- Arbab, A. S., Frank, J. A. Cellular MRI and its role in stem cell therapy. Regen Med. 3, 199-215 (2008).
