I denna video visar vi hur etiketten mänskliga embryonala stamceller (hESC) med manganklorid (MnCl<sub> 2</sub>) Som kan komma in i celler via spänningskänsliga kalciumkanaler när cellerna är biologiskt aktiva. Dessutom visar vi att använda MnCl<sub> 2</sub> Som cellulära MRT kontrastmedel för att fastställa in vitro livskraft hESC.
Abstract
Mänskliga embryonala stamceller (hESC) ha visat förmåga att återställa den skadade hjärtmuskeln. Magnetisk resonanstomografi (MRT) har utvecklats till en av de dominerande avbildningsmetoder för att bedöma återställandet av den skadade hjärtmuskeln. Dessutom har ex vivo märkning medel, såsom järn-oxid nanopartiklar, använts för att spåra och lokalisera de transplanterade stamcellerna. Däremot övervakar denna metod inte en grundläggande cellbiologi egendom avseende lönsamheten hos transplanterade cellerna. Det har varit känt att manganklorid (MnCl 2) kommer in i cellerna via spänningskänsliga kalcium (Ca 2 +) kanaler när cellerna är biologiskt aktiva, och ackumuleras intracellulärt att generera T 1 kortare effekt. Därför föreslår vi att mangan-styrda MRT kan vara bra att kontrollera cellviabiliteten efter transplantation av hESC i hjärtmuskeln.
I denna video visar vi hur etiketten hESC med MnCl 2 och hur dessa celler kan tydligt ses genom att använda MRT in vitro. Samtidigt, biologisk aktivitet av Ca2 +-kanaler kommer att moduleras använda både Ca2 +-kanaler agonist och antagonist att utvärdera samtidig signal förändringar.
Protocol
Mangan Märkning av mänskliga embryonala stamcellslinjer Trypsinize den mänskliga embryonala stammar som har odlas i feeder-fri villkor i 5 minuter. Neutralisera trypsin genom att lägga till kulturen medier. Snurra ned cellerna genom att centrifugera vid 800 rpm i 5 minuter vid 20 ° Celsius. Efter att åter avbryta cellpelleten, räkna antalet celler genom trypan blå färgning. Baserat på cellen fått räkna, dela upp cellerna i fyra portioner på 3 miljoner celler i koniska rör. Pellets celle…
Discussion
Dessa resultat tyder på att mangan kommer in via spänningsstyrda kalciumantagonister, och mangan kan användas som MRT kontrastmedel, som också kan visa cellviabiliteten. Därför föreslår vi att mangan-styrda MRT kan vara bra att kontrollera cellviabiliteten efter transplantation av mänskliga embryonala stamceller i hjärtmuskeln.