In vitro Labeling van menselijke embryonale stamcellen voor Magnetic Resonance Imaging

Summary

In deze video laten we zien hoe de menselijke embryonale stamcellen (hESC) met mangaan chloride (MnCl label₂) Die cellen via voltage-gated calciumkanalen in te voeren wanneer de cellen zijn biologisch actief. Daarnaast tonen we het gebruik van MnCl₂ Als cellulaire MRI-contrastmiddel aan de in vitro levensvatbaarheid van hESC te bepalen.

Abstract

Menselijke embryonale stamcellen (hESC) hebben aangetoond over het vermogen om de gewonde myocard te herstellen. Magnetic resonance imaging (MRI) heeft ontpopt als een van de belangrijkste beeldvormende modaliteiten aan het herstel van de geblesseerde myocard te beoordelen. Verder zijn ex-vivo labeling middelen, zoals ijzer-oxide nanodeeltjes, in dienst op te sporen en te lokaliseren de getransplanteerde stamcellen. Echter, deze methode niet volgen van een fundamentele celbiologie eigendom met betrekking tot de levensvatbaarheid van de getransplanteerde cellen. Het is bekend dat mangaan chloride (MnCl ₂₎ van de cellen via de voltage-gated calcium (Ca ^{2 +)} kanalen wanneer de cellen zijn biologisch actief binnenkomt, en accumuleert intracellulair voor het genereren van T ^een verkorting effect. Daarom stellen wij voor dat mangaan-geleide MRI kan nuttig zijn om levensvatbaarheid van de cellen te controleren na de transplantatie van hESC in het myocard.

In deze video laten we zien hoe de hESC label met MnCl ₂ en hoe deze cellen is duidelijk te zien door gebruik te maken MRI in vitro. Op hetzelfde moment, biologische activiteit van Ca ^{2 +-kanalen} worden gemoduleerd gebruik te maken van zowel Ca ^{2 +-kanaals} agonist en antagonist co-signaal veranderingen te evalueren.

Protocol

Mangaan Labeling van menselijke embryonale stamcellen Trypsinize de menselijke embryonale stengels die zijn gekweekt in feeder-vrije omstandigheden gedurende 5 minuten. Neutraliseer de trypsine door het toevoegen van cultuur media. Spin down de cellen door centrifugeren bij 800 rpm gedurende 5 minuten bij 20 ° Celsius. Na opnieuw de opschorting van de celpellet, tel het aantal cellen door trypan blauwe vlekken. Op basis van de verkregen cellen, delen de cellen in vier porties van 3 miljoen cellen in…

Discussion

Deze resultaten geven aan dat mangaan heeft betreden via de voltage-gated calcium kanalen, en mangaan kan worden gebruikt als MRI contrastmiddel, dat ook kunnen laten zien van de levensvatbaarheid van de cellen. Daarom stellen wij voor dat mangaan-geleide MRI kan nuttig zijn om levensvatbaarheid van de cellen te controleren na de transplantatie van menselijke embryonale stamcellen in de hartspier.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Manganese chloride tetrahydrate	Reagent	Sigma	M8054
(S)-(-)-Bay K8644	Reagent	Sigma	B133
(+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration	Reagent	Sigma	V4629
Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V	Reagent	VWR	VW 3257-1
Feridex I.V.	Reagent	Berlex Laboratories	NDC 59338-7035-5	ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL
Protamine sulfate	Reagent	American Pharmaceutical Partners	NDC 63323-229-05	50 mg (10 mg/mL)
Knockout SR (Serum replacement for ES cells)	Reagent	Gibco	10828
DMEM/F12 (1:1)	Reagent	Gibco	11330
2- mercaptoethanol 98+%	Reagent	Sigma	M 3148
L-Glutamine 200mM 100x	Reagent	Gibco	25030
Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml	Reagent	Gibco	15140-122
MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution	Reagent	Gibco	11140
Signa HDx 3T MRI	Tool	GE Medical Systems
clinical Knee coil	Tool	GE Medical Systems
DPBS	Reagent	Gibco	14190