הכנה ותחזוקה של הגב הגרעינים נוירונים רוט בתרבויות מחולקים
Summary
כאן אנו מתארים את הטכניקה של הכנת ושמירה לתאי מחולקים עבור נוירונים culturing חושית של הגרעינים השורש הגבי.
Abstract
נוירונים להאריך תהליכים axonal כי הם רחוקים בגוף התא innervate רקמות היעד, שם היעד הנגזרות גורמי גדילה נדרשים להישרדות תפקוד עצבי ו. Neurotrophins נדרשים במיוחד כדי לשמור על בידול של הישרדות innervating עצב סנסורי אבל השאלה כיצד אלה יעד הנגזרות neurotrophins לתקשר אל גוף התא של הנוירונים innervating כבר על שטח של מחקר פעיל במשך 30 שנים. המודל המקובל בדרך כלל של כמה אותות neurotrophin להגיע לגוף התא מציעה כי איתות endosomes לשאת אות retrogradely לאורך האקסון. כדי ללמוד התחבורה מדרדר, מערכת התרבות פותחה במקור על ידי רוברט Campenot, שבו גופי התא מבודדים האקסונים שלהם. הטכניקה של הכנת אלה מחולקים לתאי עבור culturing נוירונים משחזר את הגירוי החושי סלקטיבית של מסופי נוירון המתרחשת בעקבות שחרור vivo של יעד הנגזרות neurotrophins. אירועים איתות מדרדר הדורשים ארוכי טווח תחבורה תלויה microtubule מדרדר להיות השלכות חשובות בטיפול בהפרעות ניוון עצבי.
Protocol
Discussion
בסרטון הזה, אנחנו הוכיחו כיצד להכין ולתחזק לתאי מחולקים לשימוש נוירונים DRG culturing. בוצע כהלכה, מערכת זו מאפשרת הפרדה בין גוף התא של האקסון כדי ללמוד על המנגנונים שבאמצעותם neurotrophins אותות מעבר אקסונים ארוכים. מאז יש בידוד fluidic בין התאים, היא מאפשרת גירוי טיפול סלקטיבי או של תא אחד ללא…
Acknowledgements
ברצוננו להודות קתרינה Cosker וסטפני Courchesne לדיונים מועילים.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
