Preparación y mantenimiento de las neuronas dorsales ganglios de raíz en las culturas con compartimientos
Summary
A continuación se describe la técnica de preparación y mantenimiento de cámaras de compartimentos de las neuronas sensoriales de cultivo de los ganglios de la raíz dorsal.
Abstract
Las neuronas se extienden axones que están muy lejos del cuerpo celular para inervar los tejidos diana, donde objetivo de factores de crecimiento derivados son necesarios para la supervivencia neuronal y la función. Las neurotrofinas son especialmente necesarias para mantener la supervivencia y la diferenciación de las neuronas sensoriales que inervan pero la pregunta de cómo estas neurotrofinas derivadas de objetivos comunicar al cuerpo celular de las neuronas que inervan ha sido un área de investigación activa por más de 30 años. El modelo más comúnmente aceptada de cómo las señales de neurotrofinas llegar al cuerpo de la célula se propone que la señalización endosomas llevar a esta señal de forma retrógrada a lo largo del axón. A fin de estudiar el transporte retrógrado, un sistema de cultivo fue concebido originalmente por Robert Campenot, en el que los cuerpos celulares están aislados de sus axones. La técnica de preparación de estas cámaras de compartimentos para el cultivo de neuronas sensoriales recapitula la estimulación selectiva de terminales de las neuronas que se produce la liberación in vivo de los siguientes derivados de objetivos neurotrofinas. Retrógrada eventos de señalización que requieren transporte a larga distancia microtúbulos retrógrada dependientes tienen importantes implicaciones para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
Protocol
Discussion
En este video, nos han demostrado cómo preparar y mantener cámaras de compartimentos para su uso en el cultivo de neuronas DRG. Hecho correctamente, este sistema permite la separación del cuerpo celular del axón con el fin de estudiar los mecanismos por los cuales las neurotrofinas señal a través de los axones largos. Dado que no es el aislamiento de fluidos entre los compartimientos, permite la estimulación selectiva o el tratamiento de un compartimiento sin los otros compartimientos se vean afectados. Culturas compartimentados cám…
Acknowledgements
Nos gustaría dar las gracias a Katharina Cosker Courchesne y Stephanie útil para los debates.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| collagen | Reagent | BD Biosciences | 354249 | |
| N2-methylcellulose 400CPS | Reagent | Sel-Win Chemicals | ||
| Teflon divider | Other | Tyler Research | CAMP10 | many other types of dividers are available |
| Pin rake | Tool | Tyler Research | Camp-PR | |
| Grease loader | Tool | Tyler Research | Camp-GLSS | |
| DMEM | Reagent | Fisher | MT10017CV | |
| NGF | Reagent | Peprotech | 450-01 | |
| BDNF | Reagent | Peprotech | 450-02 | |
| High vacuum grease | Reagent | Fisher | 14-635-5D | |
| AraC | Reagent | Sigma | C-1768 | |
| 23 gauge luer stub adapter | Tool | Fisher | 427565 | |
| 90° angle hemostats | Tool | Roboz | RS-7035 |
References
- Campenot, R. B. Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites. Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).
- Watson, F. L., et al. Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response. Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).
- Heerssen, H. M., et al. Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons. Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).
- Taylor, A. M., et al. A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport. Nature Methods. 2, 599-605 (2006).
- Park, J. W., et al. Microfluidic culture platform for neuroscience research. Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).
- Ure, D. R., et al. Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures. J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).
