포스트 - 나탈 마우스 소뇌 과립 신경 세포의 전구 세포 뉴런의 분리 및 문화
Summary
여기서 우리는 분리 방법 및 출생 후의 마우스 문화 소뇌 과립 신경 세포의 전구 세포와 소뇌 과립 신경을 제시.
Abstract
소뇌 피질의 연결 속성과 개발 1,2를 공부에 대해 고유한 기회를 제공하는 잘 설명하는 구조입니다. 소뇌의 연결 유형 (과립 세포, Purkinje 세포와 억제 interneurons)의 과립 뉴런은 지금까지 가장 많은 있으며, 포유류의 두뇌에 신경 가장 풍부한 타입입니다. 설치류 동물에서 소뇌 과립 신경이 소뇌 피질, 외부 과립 층 (EGL)의 바깥쪽 레이어의 전구 세포에서 처음 두 포스트 나탈 주 동안 생성됩니다. 여기에 제시 프로토콜은 풍부 기술과 문화 과립 신경 및 사후 나탈 마우스 소뇌에서 자신의 전구 세포를 설명합니다. 우리는 과립 신경 5,6에 전구 세포를 proliferating의 차별을 연구하는 데 사용할 수있는 순수 증가 3,4의 문화를 구하는 절차를 설명합니다. 일단 전구 세포는 문화가 또한 synaptogenesis, 글루 탐 산염 수용체 기능 7, 기타 정화 소뇌 세포 8,9 또는 세포 사망 7 상호 작용과 같은 현상의 실험적 조작 및 특성에 대한 과립 뉴런의 동질적인 인구를 제공, 차별.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 과거 3,7,11에서 설명했습니다 절차의 변경에 따라 달라집니다. 아래의 논의로 참고하기 위해 몇 가지 중요한 포인트가 있습니다.
과립 신경 및 전구 세포는 도금 2 시간 이내에 준수. 건강한 세포의 위상 대비 현미경 4 아래 둥근 형태 있습니다. 도금 후 24 시간 이내에, 건강한 세포는 coverslips 또는 플라스틱 잘 주위에 균일하게 확산하고, 프로세스를 형성합니다. 최초의 매체 ?…
Acknowledgements
우리는 소중한 제안 바바라 Carletti과 안나 마리 케니 감사합니다. , DK07328 : HYL는 교육 부여 "생화학 및 분자 생물학 호르몬"에 의해 지원됩니다. NIH 교부금 5R01 NS16951 (CAM)에 의해 부분적으로 지원.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer with 70μm mesh pore | BD Biosciences | 352350 | ||
| Spinal Needle | BD | 405182 | 20G x 3-1/2 inches | |
| Poly-D-Lysine mol wt>300,000 | Sigma | P1024 | Each new batch of Poly-D-Lysine must be tested. | |
| Percoll | Sigma | P-1644 | ||
| Penicillin-Streptomycin (100X) | Sigma | P4333 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-103 | Must be calcium and magnesium free. | |
| Neurobasal A-Medium | Invitrogen | 10888-022 | ||
| Glutamax I supplement | Invitrogen | 35050-061 | ||
| B-27 Serum Free Supplement (50x) | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 12-mm circle coverslips | Carolina Biological Supply | 63-3029 | These are made in Germany by Deckgluder. | |
| 25-mm circle coverslips | Carolina Biological Supply | 63-3037 | These are made in Germany by Deckgluder. | |
| Papain Dissociation System | Worthington Biochemical Corporation | LK 003150 | Kit is good for five isolations. | |
| Permaset scissors | Roboz | RS6782 | ||
| Dumont #5 (Dumostar) | Roboz | RS4978 | ||
| 4-well culture dish | Nunc | 176740 | ||
| 6-well culture dish | Nunc | 140685 |
References
- Altman, J., Bayer, S. A. . Development of the cerebellar system: in relation to its evolution, structure, and functions. , (1997).
- Hatten, M. E., Heintz, N. . Annual Review of Neuroscience. 18, 385-285 (1995).
- Hatten, M. E., Gao, W. -. Q., Morrison, M. E., Banker, G., Goslin, K. . in Culturing Nerve Cells. , 419-419 (1998).
- Hatten, M. E. . The Journal of Cell Biology. 100 (2), 384-384 (1985).
- Carletti, B., Rossi, F. . Neuroscientist. 14 (1), 91-91 (2008).
- Knoepfler, P. S., Kenney, A. M. . Cell Cycle. 5 (1), 47-47 (2006).
- Manzini, M. C., Joseph, D. J., MacDermott, A. B. . Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (2), 328-328 (2007).
- Manzini, M. C., Ward, M. S., Zhang, Q. . Journal of Neuroscience. 26 (22), 6040-6040 (2006).
- Baptista, C. A., Hatten, M. E., Blazeski, R. . Neuron. 12 (2), 243-243 (1994).
- Palay, S. L., Chan-Palay, V. . Cerebellar Cortex: Cytology and Organization. , (1974).
- Messer, A. . Brain Research. 130 (1), 1-1 (1977).
- Ruiz I Altaba, A. . Development. 126, 3205-3205 (1999).
- Wallace, V. A. . Current Biology. 9 (8), 445-445 (1999).
- Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. P. . Neuron. 22 (1), 103-103 (1999).
- Solecki, D. J., Liu, X. L., Tomoda, T. . Neuron. 31 (4), 557-557 (2001).
- Powell, S. K., Williams, C. C., Nomizu, M. . Journal of Neuroscience Research. 54 (2), 233-233 (1998).
- Lander, A. D., Fujii, D. K., Reichardt, L. F. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82 (7), 2183-2183 (1985).
- Kenney, A. M., Rowitch, D. H. . Molecular and Cellular Biology. 20 (23), 9055-9055 (2000).
- Kenney, A. M., Cole, M. D., Rowitch, D. H. . Development. 130 (1), 15-15 (2003).
- Pons, S., Trejo, J. L., Martinez-Morales, J. R. . Development. 128, 1481-1481 (2001).
