L'instillation trachéale directe des solutés dans les poumons de souris

Dans cette procédure, les solutés peuvent être directement administrés dans les poumons. Tirez d’abord sur la trachée. Retirez la fourrure du petit rongeur et faites une petite incision près de la face antérieure du cou.

Exposez la trachée. À l’aide d’une aiguille sous-cutanée d’un millilitre, instillez trois microlitres de solution par gramme de poids corporel par trachée. Retirez la seringue et suturez la plaie.

Bonjour, je suis Dr.Ma Helms du Département de physiologie de l’Université Emory. Bonjour, je suis le Dr Mauricio Rojas du Département de médecine de l’Université Emory. Aujourd’hui, nous allons vous montrer une procédure pour instiller directement des solutés dans les parties distales du poumon.

Nous utilisons régulièrement cette procédure dans mon laboratoire pour étudier la clairance du liquide pulmonaire en réponse à plusieurs composés différents instillés, et nous utilisons cette technique dans mon laboratoire pour administrer le bli. Création d’une souris mâle de lésion pulmonaire. L’installation directe de solutés dans les poumons de petits rongeurs peut être utile dans vos études.

Alors commençons. En préparation à la chirurgie, la souris est d’abord anesthésiée avec du fluor, puis sous sédation avec une injection intrapéritonéale d’un mélange de xylazine et de kétamine. Effectuez un pincement des orteils pour confirmer que l’animal est complètement anesthésié.

Utilisez ensuite un rasoir électrique pour raser la fourrure de la zone chirurgicale. Pour enlever les poils restants, appliquez une couche épaisse de crème dépilatoire sur la zone chirurgicale. Laissez agir la crème dépilatoire pendant trois minutes, puis essuyez la fourrure et la crème avec une serviette humide.

Essuyez la zone chirurgicale avec de l’alcool à 70 %, puis appliquez un gommage chirurgical à la bétadine. Pour préparer l’animal de manière aseptique. L’animal est maintenant prêt pour l’opération.

Pour commencer la procédure d’installation intratrachéale, placez l’animal anesthésié sur une planche chirurgicale inclinée. Faites une petite incision près de la face antérieure du cou ou de la région de la gorge. Utilisez une pince pour repousser le platysma, puis faites une incision sur les muscles trachéaux antérieurs.

Cela vous permettra de visualiser et d’accéder aux anneaux trachéaux. Une fois la trachée exposée, administrez la quantité appropriée d’installation à l’aide d’une aiguille sous-cutanée d’un millilitre et d’une seringue. Tenez la seringue côté biseau vers le haut et parallèlement à la trachée et injectez tout le volume d’installation dans la trachée.

Un volume typique d’injection intratrachéale est de trois microlitres par gramme de poids corporel. Retirez la seringue de la trachée. L’animal peut réagir par le halètement, suite à l’installation du solu dans les poumons.

L’introduction d’air à travers la seringue et l’observation si les poumons se dilatent confirmeront également que l’intubation a réussi. Fermez l’incision avec quatre sutures en nylon. Saisissez l’aiguille, sertissez la partie la plus épaisse de l’aiguille où le matériau de suture est fixé avec un porte-aiguille, pénétrez la peau avec la pointe de l’aiguille à un angle de 90 degrés, à environ un à trois millimètres du bord de la plaie.

En fonction de l’épaisseur de la peau, saisissez l’aiguille sortante après un passage à travers le tissu. De simples points de suture, hochés individuellement, fermeront efficacement la plaie montrée ici sont quelques résultats représentatifs des installations intra-trachéales. Cette première image montre l’installation réussie d’un composé fluorescent de science-fiction 0,5 conjugué à la dextrine dans un poumon noir de six souris.

Le co-enregistrement du signal SCI 5.5 avec l’image radiographique confirme que le colorant fluorescent est principalement ciblé sur les poumons et qu’il est uniformément réparti immédiatement après l’installation. En revanche, cette deuxième image montre le résultat chez une souris mal instillée. Le signal fluorescent dans le tractus gastro-intestinal immédiatement après l’intervention indique que l’œsophage a été intubé par inadvertance pendant l’intervention.

Nous venons de vous montrer comment instiller directement des solutés dans les parties distales du poumon. Lorsque vous effectuez cette procédure ou toute autre procédure, il est important de suivre les directives de votre propre institution pour l’utilisation d’animaux dans la recherche. Donc c’est tout.

Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.