Journal
/
Biology
/
Levering af Cas9/sgRNA Ribonukleoproteinkomplekset i udødeliggjorte og primære celler via viruslignende partikler ("nanoblade")
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Delivery of the Cas9/sgRNA Ribonucleoprotein Complex in Immortalized and Primary Cells via Virus-like Particles (“Nanoblades”)

Levering af Cas9/sgRNA Ribonukleoproteinkomplekset i udødeliggjorte og primære celler via viruslignende partikler ("nanoblade")

DOI:
10.3791/62245-v

•

09:23 min

•

March 31, 2021

•

, , ,
1LBMC, Laboratoire de Biologie et Modélisation de la Cellule Univ Lyon, ENS de Lyon, Université Claude Bernard Lyon 1, CNRS, UMR 5239, INSERM, U1210, Lyon, 69007, France, 2CIRI, Centre International de Recherche en Infectiologie Univ Lyon, Inserm, U1111, Université Claude Bernard Lyon 1, CNRS, UMR5308, ENS de Lyon, F-69007, Lyon, France

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:56Nanoblade Preparation
  • 02:45Concentration of Nanoblades on a Sucrose-Cushion
  • 04:16Monitoring Cas9 Loading Within Nanoblades and Transduction of Cells
  • 06:24Results: Characterization of Nanoblades
  • 08:29Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Vi har udviklet en enkel og billig protokol til at indlæse Cas9 / single-guide RNA (sgRNA) ribonukleoproteinkomplekser i viruslignende partikler. Disse partikler, kaldet "Nanoblades", muliggør effektiv levering af Cas9 / sgRNA-komplekset i udødeliggjorte og primære celler såvel som in vivo.

Tags

Keywords: Cas9SgRNARibonucleoproteinVirus-like ParticlesNanobladesGenome EditingHEK 293T CellsTransfectionUltracentrifugationSucrose Gradient

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/62245?article_type=v

Purification and Visualization of Influenza A Viral Ribonucleoprotein Complexes
check_url/62245?article_type=v

Gross Dissection of the Stomach of the Lobster, Homarus Americanus
check_url/62245?article_type=v

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti.

check_url/62245?article_type=v

Isolering og Primær kultur Rotte levercellerne
check_url/62245?article_type=v

Isolering og primær kultur af muse aortaendotelceller
check_url/62245?article_type=v

High Yield Ekspression af rekombinant human Proteiner med transient transfektion af HEK293-celler i suspension
check_url/62245?article_type=v

Ekspression og oprensning af viruslignende partikler til vaccination
check_url/62245?article_type=v

Et grafisk brugergrænseflade til softwareassisteret sporing af proteinkoncentration i dynamiske cellulære protrusioner
check_url/62245?article_type=v

Metode for mærkning udskrifter i individuelle Escherichia coli celler for enkelt-molekyle fluorescens In Situ hybridisering eksperimenter
check_url/62245?article_type=v

Isolering af primære ventilceller til in vitro-sygdomsmodellering

Read Article