Introduction
Zebrafisk (Danio rerio) är en liten teleost arter med ursprung i Indien som är en användbar modellorganism för beteende 1 och medicinsk forskning 2,3. Zebrafisk är också vanligt förekommande i testning av olika farmakologiska substanser för att karakterisera deras inverkan på beteendet. Olika doser och scheman för administrering av läkemedel har använts för att undersöka beteendet hos zebrafisk efter administrering av föreningar såsom stimulantia 4, anxiolytika 5 och etanol 8/6.
Vårt laboratorium har undersökt effekterna av olika scheman etanol förvaltningen på zebrafisk ångest och locomotion i väldokumenterade ljus / mörker analys 9, 20, också vanligen kallad scototaxic analysen. En ny metod för etanoladministration har utvecklats för att öka effektiviteten vid upprepad, daglig administrering under en lång tidsperiod (21 dagar) 6 10-12. Även om denna metod är allmänt accepterad, kan nät zebrafisk öka variationen i den tid det tar att införa och ta bort fisk från läkemedelslösningen. Därför kan den exakta exponering för föreningen av intresse att variera under loppet av ett experiment som involverar upprepad dosering. En metod som minskar felkällor härrör från variationer i transporttider är därför önskvärt. Med vår metod kan vi flytta all fisk samtidigt, vilket resulterar i samma doseringstiden i varje fisk. Efter etanol exponering (beskrivs här), kan zebrafisk testas i någon number beteendeanalyser, även de som bedömer ångest. Doserings grupper av fisk med hjälp av den nya metoden har praktiska användningsområden utöver förmågan att exakt replikera och standardisera dosering mellan individer och mellan grupper av fisk. Tillkomsten av en ny mjukvara som gör det möjligt att spåra flera fiskar på en gång kan se forskarna använda våra metoder för att säkerställa reproducerbarhet och noggrannhet i sina experiment. Med tanke på den utbredda användningen av zebrafisk som en modellorganism för Behavioral Neuroscience, kommer denna metod att öka effektiviteten och användbarheten i framtida farmakologiska studier.
I det aktuella paradigmet, fick en upprepad dosering schema anställd att ungefär speglar mänskliga dricka scheman. Fish randomiserades till en av tre grupper: kontroll, daglig måttlig eller veckovis-binge. Doseringsschemat var 21 dagar i längd, valdes eftersom det överskred betydligt exponeringstider i tidigare studier 7. Kontroll fisk fått noll alcohol, fick daglig måttlig fisk 0,2% alkohol en gång per dag, och varje vecka-binge fisk erhöll 1,4% alkohol en gång per vecka. Det ljus / mörker uppgift användes för att bedöma ångest efter 2 dagars ångerrätt. Detta är ett relativt enkelt test för att administrera, som använder en rektangulär arena där väggarna på en sida är vita och på den andra sidan är mörk 9. Vuxna zebrafisk robust föredrar den mörka sidan av arenan under kontrollbetingelser 6,9,13. Ökad ångest är operativt definierad som betydligt mer tid i den mörka zonen och minskad ångest kan antas när fisken spenderar relativt sett mer tid i ljuset zonen. Med motion-mjukvara, kan andra informativa variabler också kvantifieras, även medelhastigheten, orörlighet, slingrande, och zon övergångar 14.
Doserings metod som utvecklats i vårt laboratorium kan gälla varje forskning i vilken vattenlösliga föreningar administreras till ett eller flera zebrafish. Många andra farmakologiska medel som kan dra nytta av denna metod är för närvarande testas i zebrafisk. Vanligen testade föreningar inkluderar nikotin, klordiazepoxid, buspiron, och skopolamin, vilka är lösta i ett liknande sätt som i etanol; genom blandning av den lämpliga mängden av kemikalien i vatten. Därför är mycket bredare och inte begränsat till etanol den allmänna omfattningen av detta förfarande. Dessutom efter dosering av läkemedel för flera dagar, är den ljus / mörker uppgift bara en av många beteendetester som kan användas. Efter administrering av läkemedel eller vid uttag, andra populära analyser som kan användas bland annat den nya tank dykning prov 15 och tester av socialt beteende, t.ex. stim 16. Följande procedur kommer att beskriva en effektiv metod för att vid upprepade tillfällen överföra grupper av fisk eller enskilda fiskar i lösningar innehållande en farmakologisk förening av intresse. Dessutom, processen att testa ångest med ljus / mörker-testi grupper av fisk som är i tillbakadragande efter att ha utsatts för långa Tidtabellerna alkoholförvaltningen kommer att beskrivas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla rutiner och beteendetester godkändes av MacEwan universitets Animal Research Ethics Styrelsen enligt protokoll nummer 06-11-12, vilket är i överensstämmelse med den kanadensiska rådet för Animal Cares riktlinjer för vård och användning av försöksdjur.
1. Förbered Doserings Tankar, Lösningar och Administration Schedule
- Förbered en administrationsschema så att djuren doseras i samma miljö och under samma tid på dagen för att undvika eventuella blandar ihop tid eller förspänning på visuella stimuli.
- Få så många identiska, 1,5 L, tydliga polypropylen romläggningsbehållare som är nödvändiga för antalet gruppstorlekar. Använd grupper om 8 fiskar per tank, vilket gör det möjligt för 2 grupper av fisk som ska provas per dag senare i förfarandet (se steg 3). Använd en hålltank och en doseringstank per grupp (2x totalt antal grupper).
- Placera 400 um lekplatser skär i alla tankar. Fsjuka tankarna med livsmiljö vatten eller omvänd osmos vatten vid rätt temperatur (för zebrafisk, 25-28 ° C) som är förenlig med temperaturen fisken normalt inrymt på.
OBS: Det kan vara oönskade kemiska interaktioner mellan vissa läkemedel och kemiska komponenter i buffrat habitat vatten. I denna situation, använder omvänd osmos vatten buffrat med minimala eller inga akvarium salter för läkemedelsadministrering, samt för kontrollgrupperna. - Se till att tankarna är i en neutral miljö för att undvika konditione fisk till externa visuella stimuli under dosering.
- Placera 400 um lekplatser skär i alla tankar. Fsjuka tankarna med livsmiljö vatten eller omvänd osmos vatten vid rätt temperatur (för zebrafisk, 25-28 ° C) som är förenlig med temperaturen fisken normalt inrymt på.
- Bereda läkemedelslösningen. Blanda en lämplig mängd av läkemedlet med livsmiljö vatten i romläggningsbehållare. Förbered etanollösning 0,2% genom att kombinera 3 ml av en höggradig etanol (95% icke-denaturerade etanol) med 1497 ml vatten. Förbered etanollösning 1,4% genom att kombinera 21 ml etanol med 1479 ml vatten.
2. Nettning Fish and Ethanol Administration Tillvägagångssätt
- Försiktigt netto fisk från deras livsmiljö tankar och överföring till lämplig uppsamlingstank innehållande lek insatsen. Helst hus fisken i leken insatsen för att eliminera nät helt och hållet.
- Med all fisk i sina respektive förvaringskärlen, försiktigt lyfta leken sätter av innehavet tanken och placera den i rätt läkemedelslösningstanken (Figur 1A).
- Anteckna doseringstiden som erfordras. Använd 30 min i etanollösning för det förfarande som beskrivs här.
- Om möjligt, har assistenter hjälper till med överföring av alla försöksgrupper till läkemedelslösningen samtidigt för att säkerställa exakt dosering tid. Alternativt, för över en grupp i taget och hålla koll på enskilda grupper "doseringstider (Figur 1A).
- I slutet av den nödvändiga doseringsperioden, ta bort fisken från etanollösningen genom att försiktigt lyfta den lekande insatsenut av läkemedelslösningen och placera försiktigt tillbaka in i tank.
- Försiktigt netto fisken i förvaringskärlen och placera dem tillbaka till deras livsmiljöer tills nästa schemalagda doseringstiden, eller placera leken sätter tillbaka in i uppsamlingstanken för att eliminera burgaveln.
- Som nämnts tidigare, om möjligt inom parametrarna för djurstallar utrustning, hus djuren i samma tank och lek insats som används som uppsamlingstanken. Detta kommer att eliminera nät helt och hållet under det administrativa förfarandet.
3. Behavioral Test
- Skaffa en ljus / mörker arenan 9,5 cm bred och 55 cm lång och 9,5 cm djup med ett vitt vattentätt golv (Figur 1B). Montera vit och svart vattentät icke-reflekterande papper på insidan väggarna i arenan med hjälp av kardborreband, med hälften av arenan täckt i vitt och hälften täckt i svart. Fyll arenan till ett djup av 5 cm med livsmiljö vatten vid en temperatur av 25-28 ° C. Maintain denna temperatur under hela testningen.
- Minimalize yttre visuella stimuli genom att konstruera en vit tresidig inneslutning för arenan för att ligga i. Se till att testa området har diffus storbildsprojektor som inte orsakar reflektioner på vattenytan, men ändå är tillräckligt ljust för att spåra rörelsen programvara eller tjänst -hoc manuell kvantifiering av videobilder.
- Placera arenan i inneslutningen och ställa inspelningen och rörelseanalysparametrarna beteendet spårningsprogram. Ställ in längden rättegången till 5-15 minuter, beroende på frågeställningen.
OBS: Här använde vi 5 min. - Transportera den grupp av fisken som ska testas till forskningsområdet i habitat tanken och placera dem utanför arenan inneslutningen. Acklimatisera fisken i 10 min.
- Försiktigt net en fisk från lämplig grupp och placera i mitten av ljus / mörker arena, var noga med att släppa fisken när den är placerad parallellt med den långa axeln av arenan att AVHid polarisering fisken till ljus eller mörk zon.
- Börja spela in handlingar efter det att djuret släpps. Se upp för eventuella programvaruproblem med att spåra fisk eller för fisk hoppa eller frysning. Vrid arenan 180 ° efter hälften av patienterna har testats för att förhindra blandar ihop på grund av fördomar som härrör från vilken ände av arenan är orienterad mot den öppna änden av inneslutningen.
- Efter rättegången har avslutats, mjukt nät och ta bort fisken från arenan till en uppsamlingstank eller livsmiljö tank.
4. Analys
- Undersök tid i ljus kontra mörker zoner. För varje grupp och varje fisk, få den relativa tiden i de ljusa och mörka zoner och analysera med hjälp av en en sampel t-test (eller Wilcoxon signed rank test för nonparametric data; skillnad från (hälften av den totala försökstiden) 150 sek) för att avgöra om grupper föredrar ett område över den andra betydligt.
- Att jämföra preferenser, beräkna en preferensindex genom att subtrahera tiden i ljuszonen från tiden i den mörka zonen och jämföra skillnader mellan grupper. t- tester kan användas för att jämföra två grupper. Jämför flera grupper med en en-vägs variansanalys med användning av Tukeys HSD post hoc-test där så är nödvändigt (eller Kruskal-Wallis test med Dunns multipla jämförelse post hoc-test för icke-parametriska data).
- Jämför hastighet, antal zonövergångar, slingrande, och orörlighet mellan grupperna. Använd en-vägs variansanalys med användning av Tukeys HSD post hoc-test där så är nödvändigt (eller Kruskal-Wallis test med Dunns multipla jämförelse post hoc-test för icke-parametriska data).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att bibehålla noggrannhet och kontroll i farmakologiska studier med zebrafisk är det viktigt att tidsvaraktigheten för etanoladministration konsekvent och noggrant sätt som beskrivits ovan. Vårt tillvägagångssätt kan öka den lätthet och genomströmning av doseringsförfarandet. Administrationen av etanol på antingen en gång i veckan-binge eller daglig måttlig schema resulterade i förändrade ångestnivåer, mätt med ljus / mörker-test, jämfört med kontroller. Vid test två dagar efter den sista dosen, zebrafisk i kontrollgruppen (som fick ingen alkohol, men var fortfarande flyttas till doseringstankar) visade det förväntade beteendemönster, med kontrollfisk spendera betydligt mer tid på den mörka sidan av arenan ( Figur 2A) liknande naiv zebrafisk i andra studier 6,9,13. Fisk i vecko omåttlig gruppen visade ingen preferens för antingen ljusa eller mörka zoner i uppgiften när den testades två dagar efter sin sista etanol administration (Figur 2B (figur 2C); i motsats till kontrollgruppen. Preferens index visade en signifikant skillnad mellan kontroll och daglig-moderata grupper (figur 2D). Det fanns inga signifikanta skillnader i simning hastighet, eller orörlighet över grupper (Tabell 1), och var därför inte på en motor underskott i fisken denna effekt.
Figur 1:. Transfer Förfarande och Ljus / Mörk arena Dessa bilder illustrerar överföringsförfarandet (A) Först fisken ligger i överföringsbehållaren (vänster).. Doserings tank som innehåller etanol bilden (till höger). (BC) Flytta fisken från överföringstanken till etanollösningen kräver researcher att lyfta lekande insatsen vid överlåtelse tanken och in i etanollösning tanken. (D) I ljus / mörker arena som illustreras mätt 9,5 cm bred och 9,5 cm djup och 55 cm lång. Vitt golv används, tillsammans med svarta väggar på halva arenan (vänster) och vita väggar på den andra halvan, vilket skapar en ljus och mörk zon.
Figur 2: Representativa resultat och trackplots etanol doseringsförfarande på tre grupper av zebrafisk efter 2 dagar tillbakadragande. (A) En representant trackplot i en enda kontrollenhet zebrafisk rörelsebana genom hela 5 min ljus / mörker rättegång. Nedan är samma zebrafisk trackplot representeras som en heatmap, vilket är en färgad återgivning av zebrafisk rörelse under hela försöket, baserat på den tid fisken tillbringade i den plats som representeras av varje bildpunkt. (B) en Represdare trackplot av en enda zebrafisk från vecko-binge gruppen hela 5 min ljus / mörker uppgift. Nedan är heatmap från samma zebrafisk. (C) är en representant trackplot av en enda daglig måttlig zebrafisk rörelse hela 5 min ljus / mörker rättegång. Nedan är heatmap från samma zebrafisk. (D) Preferens index beräknades för alla grupper genom att subtrahera tid i ljuset zon från tiden i den mörka zonen. Negativa siffror indikerar preferens för den mörka zonen. Positiva siffror indikerar preferens för ljus zonen. Resultaten tyder på en signifikant skillnad i preferens mellan kontroll och daglig-moderata grupper vid 2 dagar indragning * p <0,05 (en-vägs ANOVA). Observera att det finns också en signifikant preferens för mörk i kontrollgruppen, p <0,05 (ett prov t-test, tidsskillnad från 0), och en signifikant preferens för ljus i det dagliga måttliga gruppen, p <0,05 (ett prov <em> t-test, tidsskillnad från 0). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Hastighet | Orörlighet | |
| (Cm / sek) | (Sek) | |
| 2-dagars Wd | 2-dagars Wd | |
| Kontroll (n = 13) | 9,1 ± 0,6 | 1,9 ± 0,6 |
| Binge (n = 14) | 9,8 ± 0,5 | 0,8 ± 0,2 |
| Kronisk (n = 15) | 10,3 ± 0,5 | 2,5 ± 1,0 |
Tabell 1: Genomsnittlig hastighet och orörlighet under ljus / mörker-testet. Medel simma hastighet (cm / sek) och orörlighet (sek) för en representativ grupp av zebrafisk efter två dagars utsättning (medelvärde ± SEM). Här sågs inga signifikanta skillnader i vare sig hastighet eller orörlighet hittas. Används med tillstånd från Holcombe et al., (2013).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tidigare studier med läkemedelsadministrering i zebrafisk har helt enkelt förlitat sig på nät fisk att transportera dem från deras hem tank i läkemedelslösningen 12,16. Nettning är inte alltid konsekvent och ofta tar längre tid än väntat på grund av flyktsvar zebrafisk, som har betydande individuell variation. Traditionella överföringsmetoder, användbara men kan förbättras genom att minska mängden av total tid fisken bringar utanför vatten samt minska mängden variationen i överföringstiden mellan djur. Förutom att förbättra praktiskhet, ger denna metod forskare förmågan att dosera stora grupper av fisk samtidigt i en lösning för en exakt tid. Tidigare metoder kräver antingen dosering en enda fisk, eller försöker netto hela grupper av fiskar samtidigt. Den förstnämnda är långsam och minskar genomströmningen, medan den senare är en besvärlig och svår uppgift. Vidare rörelsespårande system att cen bedömning av beteendet hos flera fiskar på en gång kan dra nytta av precisionen i denna metod. Fiskar kan överföras direkt från leken insatsen i shoaling arenan, vilket skulle säkerställa nära samtidig exponering för arenan för all fisk.
Med användning av denna nya metod producerade signifikanta resultat när den genomförs på tre grupper av zebrafisk under en 21 dagars period. Kontroll fisk fick ingen alkohol, daglig måttlig fisk fick en liten mängd alkohol en gång per dag, och varje vecka-binge fisk fick en stor dos av alkohol en gång per vecka under 21-dagarsperioden. I ljus / mörker uppgift, lämnade doseringsförfarandet inte ändrar den normala inställningen av zebrafisk för den mörka zonen under kontrollbetingelser. Men efter 2 dagar av etanoltillbakadragande, zebrafisk i den dagliga måttlig grupp drog ljus zonen av arenan, en återföring av preferens. Statistisk analys bekräftar en betydande förändring i zon preferens. Det är möjligt att doserings procedure resulterade i etanol sökande beteende på grund av en betingad preferens (CPP), med fisken söker etanol (en aptitskapande stimulus), och föredrar den vita zonen på grund av dess relativa likheten till den ljusa doseringsområdet. Ny forskning visar att CPP kan förekomma i zebrafisk och i områden där zebrafisk doseras med etanol 17,18. Veckoberusnings fisk visade ingen preferens 2 dagar efter etanol, och även om bevis om neurala mekanismer som svarar för detta fynd saknas, är det möjligt att ovanliga men stora doser av alkohol kan skada hjärnan, möjligen lämnar fisk inte skilja mellan zonerna.
En annan fördel som detta doserings procedur ger forskarna är dess generaliserbarhet. Som beskrivits, ger tydliga och användbara resultat i zebrafisk proceduren. Emellertid är förfarandet inte begränsat enbart till zebrafisk. Begränsningarna om förfarandet är relaterade till storlek och gränserna för de doserings tankar, djur och Testing apparater, samt förmåga att analysera data. Med användningen av rörelsespårningsprogram har senare studier undersökt många ytterligare variabler över ett prov. Vit undvikande tillvänjning, torg korsade, locomotion tillvänjning, latens för den vita zonen, oberäkneligt simning, thigmotaxis (tid nära arenan väggar), och riskbedömning kan också kvantifieras 14. Det är tänkbart att använda detta förfarande i andra modellorganismer, såsom guldfisk, som har använts tidigare för att undersöka rollen av tolerans och tillbakadragande 19. Forskare hoppas att undersöka effekterna av andra farmakologiska medel eller miljögifter, användningen av andra beteendemässiga analyser eller andra marina organismer eller sötvattensdjur, skulle också kunna utnyttja denna grundläggande metodik.
Med användning av detta protokoll är enkel och effektiv. Men om resultaten inte är som förväntat, anser felsökning av motion-tracking system för att säkerställa korrekt datainsamling. Tracking bör vara släta och korrekt över försöken. Spårningssystemet bör registrering av rörelse av kroppen i mitten på fisken vid alla tidpunkter. Varje hoppning eller oregelbunden rörelse av spårnings prick på grund av visuella artefakter, såsom ljusreflektioner på vatten skvalpar, eller felaktiga spårningsinställningar kan omintetgöra resultatet. Vissa skillnader i resultat kan uppstå på grund av små skillnader i arenan konstruktion eller doseringsmiljöer. För att vara säker på replikering ska arenan vara som beskrivits, särskilt med avseende på att använda ett vitt golv för att maximera spåra effektivitet i zebrafisk. Med andra fiskar som är ljusare i färgen, bör ett mörkt golv användas för att underlätta rörelsespårning. På liknande sätt är extremt viktigt att dosera fisken i en miljö som är fri från eventuella visuella stimuli som möjligen skulle kunna förspänna fisk. Någon distinkt färg, mönster eller nyans som är synlig för fisken kunde förväxla resultat. En neutral, ljust färgad bakgrund liknande den i bostadssystemet rekommenderas. </ P>
Även om det är möjligt att ändra denna metod som är nödvändigt för andra fiskarter, kan resultaten variera i form av medfödd ljus / mörker preferens 20-21. Det är också viktigt att notera även det förfarande som beskrivs här fortfarande orsakar viss stress. Även nät minskar avsevärt, fortfarande innebär förfarandet en mycket kort tid där fisken måste vara ur vattnet, möjligen inducera en stressreaktion. Ramsay och kollegor 22 tyckte att nettas zebrafisk hade minst dubbelt nivåer av kortisol i kroppen jämfört med dem som inte nettas. Eftersom kortisol är ett hormon kopplat till stress 11 detta kan förändra beteendesvaret som mäts. Medan vår metod minskar burgaveln, inte eliminera den. Emellertid ger forskare möjlighet att eliminera förekomsten av burgaveln, om de vill ha genom att bostadszebrafisk i lek skär. Framtida studier bör undersöka om användningen av lekande INSERt för överföring av fisk kan minska stress i förhållande till nät. Dessutom är det ytterst viktigt att upprätthålla exakta doseringstider och överföra tider mellan grupper. Förändringar i doseringstider eller stora skillnader i tid ur vattnet kunde ändra resultatet. För att minska eventuella dygnsrytm effekter är det också viktigt att dosera fisken under samma tid på dygnet. I det aktuella experimentet fisken doserades och testades från 10:00 till 14:00. Noggrann och tillförlitlig replikering av detta förfarande bygger på att upprepa protokoll med precision.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna erkänner Joshua Gallup för användning av hans fotografi utrustning för figur 1. Rades Detta arbete stöds av en naturvetenskaplig och teknisk forskning Council (NSERC) Canada Discovery bidrag (till TJH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Three shelf benchtop housing system |  Aquatic Habitats |
N/A | |
| 1.5 L Spawning tank w/400 μm baffle | Aquatic Habitats |
N/A | |
| Pure Grain Ethanol | Luxco, INC |
N/A | |
| Ethovision XT Motion tracking software | Noldus Information Technology |
||
| Pipette | Eppendorf Canada |
||
| Light/Dark Arena | Custom | Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long. |
References
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
- Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
- Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling. Behavioural brain research. , (2012).
- Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).
- Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish. PLoS ONE. 8 (5), (2013).
- Mathur, P., Guo, S. Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish. Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).
- Dlugos, C., Rabin, R. Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).
- Maximino, C., et al. Scototaxis as anxiety-like behavior in fish. Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).
- Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio). Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).
- Egan, R. J., et al. Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish. Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).
- Gebauer, D. L., et al. Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).
- Serra, M. C., Mattioli, R. Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment. Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).
- Maximino, C., et al. Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain. Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).
- Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T.
- Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).
- Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure. Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).
- Renninger, S. L., et al. Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish. Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).
- Crawshaw, L. I., et al. Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol. Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).
- Hamilton, T. J., Holcombe, A. Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning. Proceedings of the Royal Society B. , (2014).
- Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress. Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).
- Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour. Conservation Physiology. 2 (1), (2014).
