Introduction
Zebrafisken (Danio rerio) er en lille teleost arter med oprindelse i Indien, som er en nyttig model organisme for adfærdsændringer 1 og medicinsk forskning 2,3. Zebrafisk er også almindeligt anvendt til testning af forskellige farmakologiske stoffer for at karakterisere deres indvirkning på adfærd. Forskellige doser og administration af lægemidlet er blevet anvendt til at undersøge opførslen af zebrafisk efter indgivelse af forbindelser såsom stimulanser 4, anxiolytika 5 og ethanol 6-8.
Vores laboratorium har undersøgt virkningerne af forskellige tidsplaner ethanol administration på zebrafisk angst og bevægelse i velvalideret lys / mørke-assay 9, 20, også almindeligvis omtalt som scototaxic assay. En ny metode ethanol administration blev udviklet for at øge effektiviteten for gentagen daglig indgivelse over en længere periode (21 dage) 6 10-12. Selv om denne fremgangsmåde er almindeligt accepteret, kan netting zebrafisk øge variationen i den tid, det tager at indføre og fjerne fisk fra medikamentopløsningen. Derfor kan den nøjagtige eksponering for forbindelsen af interesse variere i løbet af et eksperiment, der involverer gentagen dosering. En fremgangsmåde, der reducerer fejlkilder stammer fra variabilitet i transporttider er således ønskeligt. Med vores metode, vi er i stand til at flytte alle fisk samtidig, hvilket resulterer i samme dosering tid i hver fisk. Efter ethanol eksponering (beskrevet her), kan zebrafisk testes i enhver number af adfærdsmæssige analyser, herunder dem, der vurderer angst. Dosering grupper af fisk ved hjælp af den nye metode har praktiske anvendelser ud over evnen til præcist at efterligne og standardisere dosering mellem fag og på tværs af grupper af fisk. Fremkomsten af ny software, der giver mulighed for at spore flere fisk på en gang kan se forskerne udnytte vores metoder til at sikre replikabilitet og præcision i deres eksperimenter. I betragtning af den udbredte brug af zebrafisk som en model organisme for Biologisk psykologi, vil denne metode øge effektiviteten og praktisk i fremtidige farmakologiske undersøgelser.
I den foreliggende paradigme, blev en gentagen doseringsplan anvendes der ca. spejle humane drikke tidsplaner. Fisk blev randomiseret til en af tre grupper: kontrol, daglig moderat eller ugentligt-binge. Doseringsplanen var på 21 dage i varighed, valgt, fordi det i væsentlig grad oversteg eksponeringstider i tidligere undersøgelser 7. Kontrol fisk modtaget nul alcohol modtog daglig moderat fisk 0,2% alkohol en gang om dagen, og ugentlige-binge fisk modtog 1,4% alkohol en gang om ugen. Lys / mørke opgave blev brugt til at vurdere angst efter 2 dages tilbagetrækning. Dette er en relativt simpel test at administrere, som anvender en rektangulær arena, hvor væggene på den ene side er hvide og på den anden side er mørke 9. Voksen zebrafisk håndfast foretrækker den mørke side af arenaen under kontrol betingelser 6,9,13. Øget angst er operationelt defineret som betydeligt mere tid i den mørke zone og nedsat angst kan antages når fisken bruger relativt mere tid i lyset zone. Med motion-tracking software, kan andre informative variabler også kvantificeres, herunder gennemsnitlig hastighed, immobilitet, bugtende og zone overgange 14.
Doseringen metode udviklet i vores laboratorium kan finde anvendelse på en hvilken som helst forskning, hvor vandopløselige forbindelser indgives til et eller flere zebrafish. Mange andre farmakologiske midler, som kan drage fordel af denne metode bliver i øjeblikket testet i zebrafisk. Almindeligt testede forbindelser indbefatter nikotin, chlordiazepoxid, buspiron, og scopolamin, som opløses i en måde svarende til ethanol; ved at blande den passende mængde af kemikaliet i vand. Derfor er den generelle rækkevidde af denne procedure er meget bredere og ikke begrænset til ethanol. Desuden efter dosering med lægemidler til flere dage, lys / mørke opgave er kun en af mange adfærdsmæssige forsøg, der kunne anvendes. Efter Drug Administration eller under tilbagetrækning, andre populære analyser, der kan anvendes, omfatter den nye akvarium dykning test 15 og tests af social adfærd såsom shoaling 16. Følgende procedure vil skitsere en effektiv metode til gentagne gange at overføre grupper af fisk eller fisk i opløsninger, der indeholder en farmakologisk forbindelse af interesse. Derudover processen test angst med lys / mørke-testi grupper af fisk, der er i tilbagetrækning efter at være blevet udsat for lange tidsplaner alkohol administration vil blive beskrevet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer og adfærdsmæssige test blev godkendt af MacEwan Universitets Animal Research Ethics Board under protokol nummer 06-11-12, hvilket er i overensstemmelse med den canadiske Rådet for Animal Care retningslinjer for pasning og anvendelse af forsøgsdyr.
1. Forbered Dosering Tanke, løsninger og Administration Schedule
- Forbered en administration tidsplan sådan, at dyrene doseres i det samme miljø, og i samme tid af dagen for at undgå confounds af tid eller forspænding på visuelle stimuli.
- Anskaf så mange identiske, 1,5 L, klare gyde- polypropylen tanke, som er nødvendige for antallet af gruppe størrelser. Brug grupper på 8 fisk pr tank, som giver mulighed for 2 grupper af fisk, der skal prøves pr dag senere i proceduren (se trin 3). Brug en opbevaringstank og én doseringstanken per gruppe (2x samlet antal grupper).
- Placer 400 um gydende skær i alle spildevandstanke. Fsyg tankene med vand levested eller omvendt osmose vand ved den korrekte temperatur (for zebrafisk, 25-28 ° C), der er i overensstemmelse med temperaturen fisk normalt til huse på.
BEMÆRK: Der kan være uønskede kemiske interaktioner mellem visse lægemidler og kemiske komponenter buffered habitat vand. I denne situation anvender omvendt osmose vand bufret med minimale eller ingen akvarium salte til lægemiddelindgivelse, såvel som for kontrolgrupperne. - Sørg for, at tankene er i et neutralt miljø for at undgå conditioning fisk til eksterne visuelle stimuli i løbet af dosering.
- Placer 400 um gydende skær i alle spildevandstanke. Fsyg tankene med vand levested eller omvendt osmose vand ved den korrekte temperatur (for zebrafisk, 25-28 ° C), der er i overensstemmelse med temperaturen fisk normalt til huse på.
- Forbered lægemiddelopløsningen. Bland en passende mængde af lægemidlet med habitat vand i æglægningsakvarium. Forbered 0,2% ethanol-opløsning ved at kombinere 3 ml af en høj kvalitet, ethanol (95% ikke-denatureret ethanol) med 1.497 ml vand. Forbered 1,4% ethanol-opløsning ved at kombinere 21 ml ethanol med 1.479 ml vand.
2. Netting Fish og Ethanol Administration Procedure
- Omhyggeligt netto fisk fra deres levesteder kampvogne og overførsel til passende holdingtank indeholdende gydende insert. Ideelt hus fiskene i gydningen indsatsen for at fjerne helt netting.
- Med alle fisk i deres respektive spildevandstanke forsigtigt løfte gyde- indsætte ud af holdingtank og læg det i passende stof rentvandstanken (figur 1A).
- Optag doseringen tid efter behov. Brug 30 minutter i ethanolopløsningen for den procedure, der beskrives her.
- Hvis det er muligt, have assistenter hjælpe med overførsel af alle forsøgsgrupper til lægemidlet løsning samtidigt for at sikre nøjagtig dosering tid. Alternativt overføre én gruppe ad gangen og holde styr på de enkelte gruppers dosering gange (figur 1A).
- Ved afslutningen af den nødvendige dosering periode, skal du fjerne fisk fra ethanolopløsningen ved forsigtigt at løfte gydning insertud af lægemiddelopløsningen og placere forsigtigt tilbage i opbevaringstanken.
- Netto forsigtigt fisken i spildevandstanke og læg dem tilbage i deres levesteder, indtil næste planlagte dosering gang, eller placere gydning indsætte tilbage i holdingtank at eliminere netting.
- Som tidligere, hvis det er muligt nævnt inden for parametrene for stalde udstyr, hus dyrene i samme tank og gydning insert, der bruges som holdingtank. Dette vil fjerne netting helt under administrationen procedure.
3. Behavioral Testing
- Opnåelse af en lys / mørk arena 9,5 cm bredt og 55 cm lange og 9,5 cm dybe med en hvid vandtæt gulv (figur 1B). Anbringe hvid og sort vandtæt ikke-reflekterende papir til de indvendige vægge i arenaen ved hjælp velcro, med halvdelen af arenaen er dækket i hvidt og halvt dækket i sort. Fyld arena til en dybde på 5 cm og med habitat vand ved en temperatur på 25-28 ° C. Maintain denne temperatur under hele testen.
- Minimalize eksterne visuelle stimuli ved at konstruere en hvid tre-sidet kabinet til arenaen for at være beliggende i. Sørg for testområdet har diffus ovenlys, der ikke forårsager refleksioner på vandoverfladen, og alligevel er tilstrækkeligt med lys for bevægelsen tracking software, eller post -hoc manual kvantificering fra videobilleder.
- Placer arena i kabinettet og sætte optagelsen og bevægelse analyseparametre for adfærd tracking software. Indstil forsøget varighed på 5-15 minutter, afhængigt af den problemstilling.
BEMÆRK: Her har vi brugt 5 min. - Transport gruppen af fisk, der skal testes til forskningsområdet i tanken habitat og placere dem udenfor arenaen kabinet. Akklimatisere fisken i 10 min.
- Forsigtigt netto en fisk fra den relevante gruppe og plads i midten af lys / mørke arena, og sørg for at frigive fisk, når den er placeret parallelt med den lange akse af arenaen til AVOid forspænding af fisk til lys eller mørk zone.
- Begynd optagelsen adfærd umiddelbart efter at dyret er frigivet. Se eventuelle software problemer med at spore fisk eller for fisk springe eller frysning. Drej arena 180 ° efter halvdelen af de emner, er blevet testet for at forhindre eventuelle confounds pga skævheder, der stammer fra hvilken ende af arenaen er orienteret mod den åbne ende af indkapslingen.
- Når forsøget er afsluttet, forsigtigt net og fjerne fisk fra arena til en opbevaringstank eller naturtype tank.
4. Analyse
- Undersøg tid i lyset versus mørke zoner. For hver gruppe og hver fisk, opnå den relative tidsforbrug i de lyse og mørke zoner og analysere ved hjælp af en en sample t-test (eller Wilcoxon signed rank test for ikke-parametrisk data forskel fra (halvdelen af den samlede prøve tid) 150 sek) at afgøre, om grupper signifikant foretrækker et område over den anden.
- At sammenligne præferencer, beregne en preference indeks ved at trække den tid i lyset zone fra den tid i den mørke zone og at sammenligne forskellene mellem grupperne. t- test kan anvendes til at sammenligne to grupper. Sammenligne flere grupper med en envejs-variansanalyse udnytte Tukeys HSD post hoc test, hvor nødvendigt (eller Kruskal-Wallis test med Dunn multiple sammenligning post hoc test for parametriske data).
- Sammenlign hastighed, antal zone overgange, bugtende og immobilitet tværs grupper. Brug en-vejs variansanalyse udnytte Tukeys HSD post hoc test, hvor nødvendigt (eller Kruskal-Wallis test med Dunn multiple sammenligning post hoc test for parametriske data).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
At opretholde nøjagtighed og kontrol i farmakologiske undersøgelser med zebrafisk er det vigtigt at tid varigheden af ethanol administration konsekvent og præcist som beskrevet ovenfor. Vores procedure kan øge den lethed og gennemløb af dosering procedure. Administrationen af ethanol på enten en ugentlig-binge eller daglig moderat tidsplan resulterede i ændrede angst niveauer, målt med lys / mørke test, sammenlignet med kontrolgruppen. Når de blev testet to dage efter sidste dosering, zebrafisk i kontrolgruppen (som modtog ingen alkohol, men var stadig flyttet til dosering tanke) viste det forventede adfærdsmønster, med kontrol fisk udgifter betydeligt mere tid på den mørke side af arenaen ( figur 2A) svarende til naive zebrafisk i andre undersøgelser 6,9,13. Fisk i den ugentlige binge gruppen viste ingen præference for enten lyse eller mørke zoner i opgaven, når de testes to dage efter deres sidste ethanol administration (figur 2B (figur 2C); i modsætning til kontrolgruppen. Den præference indeks viste en signifikant forskel mellem kontrol og daglig moderate grupper (figur 2D). Der var ingen signifikante forskelle i svømning hastighed, eller immobilitet tværs grupper (tabel 1), og derfor er denne effekt ikke skyldtes en motor underskud i fisken.
Figur 1:. Transfer Procedure og Light / Dark arena Disse billeder viser proceduren for overførsel (A) Først fiskene beliggende i overførslen tank (til venstre).. Dosering tank, der indeholder ethanol er afbilledet (højre). (BC) Flytning af fisk fra overførslen tanken til ethanolopløsningen kræver researcher at løfte gydende indsatsen ud af tanken overførsel og ind ethanolopløsningen tanken. (D) Det lys / mørke arena som illustreret målt 9,5 cm bredt og 9,5 cm dybe og 55 cm lang. Hvid gulve bruges sammen med sorte vægge på halvdelen af arenaen (til venstre) og hvide vægge på den anden halvdel, hvilket skaber en lys og mørk zone.
Figur 2: Repræsentative resultater og trackplots ethanol dosering procedure på tre grupper af zebrafisk efter 2 dage tilbagetrækning. (A) En repræsentant trackplot af en enkelt kontrol zebrafisk bevægelse sti hele 5 min lys / mørke retssag. Nedenfor er den samme zebrafisk trackplot repræsenteret som en Heatmap, som er en farvet repræsentation af zebrafisk bevægelse i hele forsøgsperioden, baseret på den tid fisken tilbragt i placeringen ved hver pixel. (B) en repræsentativt trackplot af en enkelt zebrafisk fra den ugentlige-binge gruppe i hele 5 min lys / mørke opgave. Nedenfor er Heatmap fra samme zebrafisk. (C) En repræsentant trackplot af en enkelt daglig moderat zebrafisk bevægelighed i hele 5 min lys / mørke retssag. Nedenfor er Heatmap fra samme zebrafisk. (D) Den præference indeks blev beregnet for alle grupper ved at fratrække tid tilbragt i lyset zone fra tid tilbragt i den mørke zone. Negative tal angiver præference for mørke zone. Positive tal angiver præference for lys zone. Resultaterne indikerer en signifikant forskel i præference mellem kontrol og daglig moderate grupper ved 2 dage tilbagetrækning * p <0,05 (én-vejs ANOVA). Bemærk der er også en signifikant præference for mørke i kontrolgruppen, p <0,05 (én prøve t-test, forskel fra 0), og en signifikant præference for lys i det daglige moderat gruppe, p <0,05 (én prøve <em> t-test, forskel fra 0). Klik her for at se en større udgave af dette tal.
| Velocity | Immobilitet | |
| (Cm / sek) | (Sec) | |
| 2-dages WD | 2-dages WD | |
| Kontrol (n = 13) | 9,1 ± 0,6 | 1,9 ± 0,6 |
| Binge (n = 14) | 9,8 ± 0,5 | 0,8 ± 0,2 |
| Kronisk (n = 15) | 10,3 ± 0,5 | 2,5 ± 1,0 |
Tabel 1: Gennemsnitlig hastighed og immobilitet i lys / mørke-test. Den gennemsnitlige svømmetur hastighed (cm / sek) og immobilitet (sek) af en repræsentativ gruppe af zebrafisk efter 2 dages tilbagetrækning (gennemsnit ± SEM). Her blev ikke fundet nogen signifikante forskelle i hverken hastighed eller immobilitet. Anvendes med tilladelse fra Holcombe et al., (2013).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tidligere undersøgelser med Drug Administration i zebrafisk har simpelthen påberåbt netting fisk at transportere dem fra deres hjem akvarium i lægemiddelopløsningen 12,16. Netting er ikke altid konsekvent og ofte tager længere tid end forventet på grund af flugt respons zebrafisk, som har en betydelig individuel variation. Traditionelle overførselsmetoder, nyttige, kan forbedres ved at reducere mængden af samlet tid fiskene bruger uden vand, samt at reducere mængden af variabilitet i overførselstid mellem dyr. Ud over at forbedre praktiske, denne metode giver forskere mulighed for at dosere store grupper af fisk samtidigt i en opløsning til en præcis mængde tid. Tidligere metoder kræver enten dosering af en enkelt fisk, eller forsøge at nette hele grupper af fisk samtidigt. Førstnævnte er langsom og nedsætter throughput, mens sidstnævnte er en akavet og vanskelig opgave. Endvidere motion-tracking systemer, cen vurdering af opførslen af multiple fisk på en gang kan drage fordel af præcision af denne metode. Fisk kunne overføres direkte fra gydende indsatsen ind i shoaling arena, hvilket ville sikre nær samtidig eksponering til arenaen for alle fisk.
Ved hjælp af denne nye metode givet betydelige resultater, når den gennemføres på tre grupper af zebrafisk i løbet af en periode på 21 dage. Fik kontrol fisk ingen alkohol, daglig moderat fisk fik en lille mængde alkohol en gang om dagen, og ugentlige-binge fisk fik en stor dosis alkohol en gang om ugen i de første 21 dage. I lys / mørke opgave, har doseringsproceduren ikke ændre normal præference zebrafisk den mørke zone under kontrolbetingelser. Men efter 2 dages ethanol tilbagetrækning, zebrafisk i det daglige moderat gruppe foretrækkes lys zone af arenaen, en tilbageførsel af præference. Statistisk analyse bekræfter en betydelig ændring i zone præference. Det er muligt, at doseringen Procedure resulterede i ethanol søger adfærd skyldes en betinget sted præference (CPP), med fisk søger ethanol (en appetitforstyrrelser stimulus) og foretrækker den hvide zone på grund af sin relative lighed med den lyse dosering område. Nyere forskning viser, at CPP kan forekomme i zebrafisk og i områder, hvor zebrafisk doseres med ethanol 17,18. Ugentlig binge-fisk viste ingen præference 2 dage efter ethanol, og selvom beviser om neurale mekanismer tegner sig for dette fund er til stede, er det muligt, at sjældne, men store doser af alkohol kan skade hjernen, eventuelt forlader fisk ude af stand til at skelne mellem zoner.
En anden fordel, at denne dosering procedure giver forskere er dens generaliserbarhed. Som beskrevet procedure giver klare og nyttige resultater i zebrafisk. Imidlertid er proceduren ikke begrænset til zebrafisk. De begrænsninger, om proceduren er relateret til størrelsen af og grænserne for de dosering tanke, dyr og testing apparat, samt evne til at analysere data. Med brugen af motion tracking software har nylige studier undersøgte mange ekstra variabler gennem en retssag. White undgåelse tilvænning, kvadrater krydses, locomotion tilvænning, latency til den hvide zone, uberegnelig svømning, thigmotaxis (tidsforbrug nær arenaen vægge), og risikovurderingen også kan kvantificeres 14. Det er tænkeligt at anvende denne procedure på andre modelorganismer, såsom guldfisk, som er blevet anvendt tidligere til at undersøge den rolle, tolerance og tilbagetrækning 19. Forskere i håb om at undersøge virkningerne af andre farmakologiske midler eller miljømæssige toksiner, brug af andre adfærdsmæssige assays, eller andre dyr marine eller ferskvand, kunne også udnytte denne grundlæggende metode.
Anvendelse af denne protokol er enkel og effektiv. Men hvis resultaterne ikke er som forventet, overveje fejlfinding af motion-tracking system for at sikre korrekt dataindsamling. Tracking skal være glat og præcis på tværs af forsøgene. Sporingssystemet skal optage bevægelsen af kroppen centrum af fisken på alle tidspunkter. Enhver hoppe eller uregelmæssig bevægelse af sporing dot skyldes visuelle artefakter, såsom lysreflekser på vand krusninger eller forkert sporing indstillinger kan forvirre resultater. Nogle uoverensstemmelser i resultater kan opstå fra små forskelle i arena design eller dosering miljøer. At være sikker på replikation, bør arena være som beskrevet, især med hensyn til anvendelse af et hvidt gulv for at maksimere sporing effektivitet i zebrafisk. Med andre fisk, som er lysere i farven, bør et mørkt gulv anvendes til at hjælpe i motion tracking. Tilsvarende dosering af fisk i et miljø, der er fri for eventuelle visuelle stimuli, der eventuelt kunne Bias fisk er yderst vigtig. Enhver tydelig farve, mønster eller nuance, der er opfattelig for fiskene kunne forvirre resultater. Der anbefales en neutral, lys farvet baggrund svarende til den i huset systemet. </ P>
Selv om det er muligt at ændre denne metode som nødvendigt for andre arter af fisk, kan resultaterne variere med hensyn til medfødte lys / mørke præference 20-21. Det er også vigtigt at bemærke, selv her beskrevne procedure stadig forårsager nogen stress. Selvom netting er reduceret betydeligt, er proceduren stadig indebærer en meget kort periode, hvor fiskene skal være ude af vand og eventuelt tilskynde en stress respons. Ramsay og kolleger 22 syntes, at nettes zebrafisk havde mindst dobbelt niveauet af cortisol i kroppen i forhold til dem, der ikke blev modregnet. Da cortisol er et hormon forbundet med stress 11 kan ændre det adfærdsmæssige respons, der måles. Mens vores metode reducerer netting, betyder det ikke fjerne det. Men det giver forskere mulighed for at eliminere forekomsten af netting, hvis de ønsker af boliger zebrafisk i gydende skær. Fremtidige studier bør undersøge, om brugen af gydende INSERt for overførsel af fisk kan formindske stress respons i forhold til netting. Derudover er det afgørende vigtigt at bevare præcis dosering gange og overføre gange mellem grupperne. Ændringer i dosering gange eller store forskelle i tidsforbrug ud af vandet kunne ændre resultaterne. For at reducere eventuelle døgnrytmen virkninger, er det også vigtigt at dosere fisken under lignende tidspunkter af dagen. I den aktuelle eksperiment fisk blev doseret og testet fra 10:00 til 14:00. Præcis og pålidelig replikation af denne procedure er afhængig gentage protokol med præcision.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne anerkender Joshua Gallup for brug af hans fotografering udstyr, der anvendes til figur 1. Dette arbejde blev støttet af en naturvidenskab og teknik Research Council (NSERC) Canada Discovery tilskud (til TJH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Three shelf benchtop housing system |  Aquatic Habitats |
N/A | |
| 1.5 L Spawning tank w/400 μm baffle | Aquatic Habitats |
N/A | |
| Pure Grain Ethanol | Luxco, INC |
N/A | |
| Ethovision XT Motion tracking software | Noldus Information Technology |
||
| Pipette | Eppendorf Canada |
||
| Light/Dark Arena | Custom | Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long. |
References
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
- Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Santoriello, C., Zon, L. I. Hooked! Modeling human disease in zebrafish. Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).
- Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling. Behavioural brain research. , (2012).
- Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).
- Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish. PLoS ONE. 8 (5), (2013).
- Mathur, P., Guo, S. Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish. Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).
- Dlugos, C., Rabin, R. Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).
- Maximino, C., et al. Scototaxis as anxiety-like behavior in fish. Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).
- Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio). Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).
- Egan, R. J., et al. Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish. Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).
- Gebauer, D. L., et al. Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).
- Serra, M. C., Mattioli, R. Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment. Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).
- Maximino, C., et al. Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain. Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).
- Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T.
- Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish. Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).
- Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure. Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).
- Renninger, S. L., et al. Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish. Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).
- Crawshaw, L. I., et al. Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol. Physiology & Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).
- Hamilton, T. J., Holcombe, A. Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning. Proceedings of the Royal Society B. , (2014).
- Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress. Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).
- Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour. Conservation Physiology. 2 (1), (2014).
