Introduction
В офтальмологии, генная терапия возникла как метода лечения в моногенных наследственных ретинопатии. Есть унаследованные ретинопатии, связанные с генами в пигментный эпителий сетчатки (ПЭС), включая Leber врожденной amurosis 1,2, пигментный ретинит 3 и 4 choroideremia. Полевые исследования генной терапии расширяется в обоих доклинических исследований и клинических испытаний с использованием вирусных векторов, таких как адено -associated вируса (AAV), лентивирус (LV) и аденовируса (Ad) 5. Различные вирусные векторы имеют разные тропизм в сетчатке. Для безопасной и эффективной генной терапии, вирусные векторы должны быть тщательно подобраны в соответствии с клетками-мишенями и генов-мишеней.
Маршрут доставки генов также важна для эффективного доставки генов в клетки-мишени, таким образом, она должна быть тщательно подобраны так. Два наиболее распространенных методов внутриглазного доставки вирусных векторов subretИнал впрыска и инъекция 6. Последнее, инъекция, широко используется для доставки наркотиков для лечения сосудистой оболочки глаза неоваскуляризации в мокрой возрастной макулярной дегенерации (AMD) и отека макулы в диабетической ретинопатии 7. Интравитреальная маршрут обеспечивает экспозицию вирусных векторов в стекловидного тела и внутренней сетчатки, но диффузия векторов внешней сетчатки ограничено. С другой стороны, субретинальная маршрут обеспечивает прямой доставки вирусных векторов для потенциального пространства между сетчатки и ПЭС, вызывая локализованное волдырь. Таким образом, субретинальной инъекции в настоящее время считается более эффективный маршрут для ориентации клетки фоторецепторов и РПЭ. С точки зрения хирургического подхода, пп Плана выбран в качестве безопасной зоне для инъекции в стекловидное тело, чтобы избежать повреждения сетчатки у больных людей. Просто изменяя этот подход к мышей, мы могли бы придать вирусных векторов subretinally или intravireally помощью лимбальных подхода.
В этом видеоСтатья, мы демонстрируем простое и удобный способ субретинальной инъекции вирусных векторов мышам ПЭС. После одного прокола в кзади от лимба с 30 г 1/2 иглы, 33 г тупой иглы оборудован мкл шприца вставлен в субретинальном пространства через лимбальных месте прокола. Вирусные векторы 1,5 - 2 мкл объем вводят в пространство между потенциальной сетчатки и РПЭ индукции субретинальной волдыри. Эта процедура может быть выполнена в соответствии с прямой визуализации с помощью операционного микроскопа. Повторное практика будет гарантировать воспроизводимые результаты даже без прямой визуализации образования пузырька. Это поможет исследователям для выполнения точных и экономии времени эксперименты по субретинальной доставки генов у мышей ПЭС.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с Ассоциацией по исследованиям в видении и офтальмологии Заявление для использования животных в офтальмологических и Vision Research, и руководящие принципы и правила изложены в Сеульском национальном университете Care Институциональная животных и использование комитета и Сеульский национальный по Комитет Университетская больница биобезопасности.
1. Подготовка комплекта впрыска и вирусные векторы
- Подготовка мкл шприца, снабженного 33 г тупой иглой стерилизованной с помощью газообразной окиси этилена. Развести вирусных векторов в PBS для адекватного титра в микро трубки (т.е., 1 х 10 6 ТУ / мкл). Промойте шприц несколько раз вирусных векторов для удаления мертвого пространства в шприце.
2. субретинальной впрыска вирусных векторов
- Обезболить взрослых мышей (т.е., 6 - 8 недель) путем внутрибрюшинной инъекции смеси tiletamiпе и zolazepam (1: 1, 2,25 мг / кг массы тела) и ксилазина гидрохлорид (0,7 мг / кг массы тела) или альтернативный режим подходит анестезии.
- Разбавить учеников с глазные капли фенилэфрина 0,5% и 0,5% Tropicamide.
- Подготовка мкл шприц загрузкой 1,5 - 2 мкл вирусных векторов.
- Откройте веко и выступают в глаза, чтобы разоблачить экватор для удобного введения и сосредоточиться на под операционным микроскопом. Поддерживать в выступающем положении глаз до окончания инъекции, или смещение иглы может произойти во время инъекции. Чтобы удержать глазное яблоко плотно, поставить пальцы за пределами орбитального края.
- Нанесите каплю глазной раствор вязкоупругого к поверхности роговицы.
- Поместите небольшую круглую крышку скользить по верхней части роговицы, чтобы визуализировать сетчатку.
- Прокол небольшое отверстие в задней небольшим, чтобы лимба с помощью стерильного 30 G 1/2 иглы для дальнейшего субретинальной инъекции. Сделайте отверстие уступает FOг правый глаз, и превосходный для левого глаза для удобства.
ПРИМЕЧАНИЕ: Если отверстие сделано в височной или носовой, трудно быть охвачены века после инъекции. Первоначальный прокол должен быть немного кзади от лимба, чтобы избежать суда лимбальных которые работают по кайме и может быть легко распознать. Будьте осторожны, чтобы избежать удара объектив с иглой, делая первоначальный прокол. Не вставляйте весь скос иглы, чтобы избежать объектива прокол. - Поместите 33 G тупым иглу шприца через микролитровых предварительно проколотого отверстия и не подходить иглу в субретинальной пространстве до момента, когда мягкий ощущается сопротивление.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для субретинальной инъекции, лучший угол подход иглы составляет около 45 градусов против диафрагмы плоскости, и тупой иглы должны быть толкнул сзади к околососковой области. Пунктирная квадрат указано предложенную иглы путь через полость стекловидного тела для субретинальной injectioн на рисунке 1.
ПРИМЕЧАНИЕ: Там будет никакого сопротивления не ощущается, когда пирсинг (или прохождения) слоев сетчатки, как они очень мягкие. Таким образом, первый ощущение легкой сопротивления указывает, что игла уже коснулись НПП слой и введение иглы должен быть остановлен. Будьте осторожны, чтобы не проникнуть склеры ткани с чрезмерным давлением, потому что игла должна быть помещена в потенциальной субретинальной пространстве. Если игла прокалывает ткань склеры чрезмерной власти, он входит в экстраокулярных орбитальных пространств без сопротивления. (Этот шаг является критическим)
Рисунок 1. Принципиальная схема субретинальной инъекций. Н & Е окрашенных сечение глаза мыши с изображением структуры с иглы пути для субретинальной инъекции отмечены (пунктирная квадрат). Увеличение: 40х, шкала бар: 500 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
- Вводите вирусные векторы (например, 1 × 10 6 ТУ / мкл) аккуратно в субретинальной пространстве без дрожи, чтобы избежать нежелательного повреждения тканей и вывести иглу осторожно. Держите глазное яблоко плотно во время инъекции, как описано в 2.4.
- Соблюдайте образование субретинальной пузырька после инъекции под операционным микроскопом, чтобы убедиться, что нет кровотечения сетчатки.
Рисунок 2. субретинальной Belb Формирование без кровоизлияние в сетчатку глаза. Микроскопическое вид субретинальной belb после субретинальной инъекции под операционным микроскопом показывает успешное формирование пузырька без сетчатки кровоизлияния.м / файлы / ftp_upload / 53030 / 53030fig2large.jpg "цель =" _ пустое "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
- Аккуратно закройте веко, чтобы покрыть участок инъекции для самоуплотнением. Возврат мышей клетку и держать в живых, пока оценки.
ПРИМЕЧАНИЕ: После того, как исследователи привыкнуть к процедурам, они могут получить воспроизводимые результаты с быстрыми процедурами, пропуская эти шаги (2,5, 6 и 10)
3. Оценка эффективности доставки генов в пигментный эпителий сетчатки
- Жертвоприношение мышей в CO 2 камеры. Выяснять глаза с помощью ножниц.
- Закрепите глаза в 4% -ном растворе параформальдегида при 4 ° С в течение минимум 1 часа до нескольких дней.
- Возьмите роговицы с тонкими щипцами и прокол роговицы с микро-ножниц. Удалить роговицы после ножницами вдоль лимба. Снимите объектив с щипцами.
- Обрезать цилиарного тела с мМОИК-ножницы, позволяющие отслоение сетчатки. Осторожно потяните весь сетчатку от НПП / сосудистое / склеры комплекса. Вырезать НПП / сосудистое / склеры комплекс в радиальном направлении от периферии к центру возле зрительного нерва несколько раз, чтобы сделать от 4 до 8 листьев для плоской монтажа.
- Переверните НПП / сосудистое / склеры комплекс, чтобы сделать НПП стороной вниз, и обрезать все оставшиеся ткани на склеры стороны, включая мышцы, конъюнктивы и зрительного нерва. Этот шаг важен, чтобы сделать плоскую НПП / сосудистое / склеры комплекс, потому что все оставшиеся ткани делает комплекс неравномерно.
- Выдержите комплекс с первичного и вторичного антитела для ваших конкретных научно-исследовательских целей (опционально, см ссылки на подробные методы). Мини-установки ПЭС / сосудистое / склеры комплексы на стекло и поглощать PBS с абсорбирующим губка.
- Добавить 30 мкл решение для монтажа и поместите крышку слайд. Соблюдайте образец для эффективности вектора поставки по флуоресцеина микроскопом. Держите образцыхолодильник для дальнейшего наблюдения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Чтобы оценить эффективность субретинальной инъекции на вирусных генов трансдукции этим протоколом, мы использовали коммерчески доступные векторы LV с промотора цитомегаловируса, экспрессирующих GFP как и RFP для индикатора. Глаза удаляли ядра после соответствующего периода времени в соответствии с научно-исследовательских целей. Для представительных результатов, глаза энуклеировали 10 недель и 20 недель после инъекции субретинальной. После полного удаления сетчатки, используя метод, описанный выше, с плоским гора НПП / сосудистое / склеры комплекса была оценена в флуоресцентным микроскопом. Представительные результаты были показаны на рис 3А (хороший пример с полного удаления сетчатки) и 3В (плохой пример с неповрежденной сетчаткой). Хотя существование остатка нервной сетчатки (особенно фоторецепторов наружного сегмента) в течение НПП слоя не мешает проанализировать область доставки генов в ПЭС, то их флуоресценцию GFP / RFP и заторможенной прямой visuaлизация НПП слоя для дальнейших анализов. Таким образом, полное удаление нервной сетчатки от НПП / сосудистое / склеры комплекса обеспечит лучшие результаты.
Рисунок 3. Пример НПП / сосудистой оболочки / склеры комплекс Мини-крепление в соответствии с полным удалением Retina. Двадцать недель после инъекций субретинальной лентивирусом с GFP / RFP Gene. () Хорошо пример ПЭС плоским крепление с полного удаления сетчатки показывает четкую и дискретный выражение GFP / RFP в клетках ПЭС. (Б) Плохо пример ПЭС плоским смонтировать из-за отсутствия удаления сетчатки показана область доставки генов с RFP сигналов, которые являются недостаточными для анализа НПП патологии. Увеличение: 40х, шкала бар:. 500 мкм Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
(то есть 2 мкл). Это помогает регулировать соответствующий титр вируса в эксперименте.
Представительные результаты НПП / сосудистой оболочки / склеры комплекс с плоским смонтировать 10 недель после инъекции субретинальной были показаны в различных увеличениях на рисунке 4 (40х) и рис (5 400x). Изображения с небольшим увеличением достаточно, чтобы оценить площадь GFP экспрессии / RFP. С другой стороны, изображение с большим увеличением необходимы для другой патологии НПП в отношении к конкретным целей исследователей. Эти изображения остроумиеH различных увеличениях помочь понять вирусную паттерн экспрессии в НПП (рисунок 4 и 5). Мы также проверили на экспрессию GFP / RFP до 36 недель после инъекции. Выражение GFP / RFP все еще наблюдалась после 36 недель после инъекции (данные не показаны).
Рисунок 4. Пример ПЭС / Хориоидея / склеры комплекс Мини-крепление через 10 недель после инъекций субретинальной лентивирусом с GFP / RFP Джин (увеличение: 40х). () Зеленый канал для GFP (B) красного канала для ППП. Масштабная линейка:. 500 мкм Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5. Пример НПП / сосудистой оболочки / склеры комплекс плоским-mount 10 недель после инъекций субретинальной лентивирусом с GFP / RFP Джин (увеличение в 400 раз). (A) зеленый канал для GFP (B) красного канала для ППП. Масштабная линейка:. 50 мкм Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этом видео статье мы описали лимбальных-подход субретинальной технику впрыска подробно с представительными результатами НПП / сосудистой оболочки / склеры плоским горе. Это простой и удобный метод для субретинальной инъекции вирусных векторов в ПЭС. Прямая визуализация образования пузырька во время инъекции, является важным шагом для точной доставки для начинающих. Есть некоторые методы субретинальной впрыска, введенные в журнале визуализированных экспериментов 8-10. Субретинальной пространство потенциальное пространство между сетчаткой и ПЭС, поэтому есть два возможных пути, чтобы приблизиться к субретинальной пространство. Одним из них является внутри подход к субретинальном пространства с помощью стекловидного тела и сетчатки, а другой снаружи с помощью подход ПЭС и склеры. Это лимбальных-подход техника субретинальной инъекции прежний помощью интравитреального пространства и сетчатки. Этот метод имеет преимущество, чтобы обеспечить более формирование задней пузырька по сравнению с последним, поскольку в последнем Аpproach делает волдырь от периферии через склеры туннелирования или разреза, которые должны быть сделаны в течение периферии сетчатки. Кроме того, простой лимбальных прокол легче, чем склеры туннелирования без сетчатки проникновения. Для новорожденных мышей, однако, было бы более целесообразно использовать внешний подход 9. Потому что глазное яблоко неонатальной мыши очень маленький и полный линзы, техника лимбальных-подход может привести к нежелательным формирование катаракты или даже чахотки бульбусы.
Есть некоторые важные шаги в этом протоколе. Прежде всего, начальное прокола должно быть место немного позади от лимба, потому что слишком передней пункции в роговице делает диафрагмы тюремное заключение, или слишком задней прокола оказывает непосредственное отверстие на периферии сетчатки. Во-вторых, рекомендуется быть осторожными, чтобы избежать удара объектив с иглой, делая первоначальный прокол. Лучше не вставить весь скос иглы, чтобы избежать объектива прокол. В-третьих, бТекущая подход угол иглы составляет около 45 градусов против диафрагмы плоскости, и тупой иглы должны быть толкнул сзади к околососковой области. Наконец, игла должна быть помещена в субретинальном пространства во время инъекции, что приводит к равномерному пузырька образований, в противном случае смещены иглы вызывает инъекции в стекловидное тело.
Глаз маленький орган с уникальными особенностями, которые делают его привлекательным объектом для генной терапии 11. В частности, это небольшой корпусе отсек с иммунной-привилегии, которая позволяет генной терапии с относительно низкой токсичностью и иммунных реакций в глаза и побочных системных эффектов. Легко визуализации и готов доступность хирургических подходов и другие преимущества глаза для генной терапии. Сетчатка имеет очень организованной слоистую структуру с 10 различных слоев. Таким образом, точное пространственное доставки генов может быть достигнуто только с помощью соответствующих методов внутриглазного введения. Два наиболее распространенных методов INTRaocular доставка вирусных векторов инъекция и субретинальной инъекции 6. В общем, инъекции в стекловидное тело является предпочтительным способом для внутренней сетчатки ориентации ганглиозных клеток сетчатки и клетки Мюллера. Субретинальной инъекции предпочтительным маршрутом для внешней сетчатки таргетирования фоторецепторов и ПЭС клетки. Для эффективного трансдукции в ПЭС, необходимо, чтобы доставить вирусные векторы subretinally несмотря на потенциал для повреждения сетчатки.
В этом исследовании мы использовали векторы LV с GFP и RFP для визуализации. Потому что вирусные векторы имеют тропность к конкретным типов клеток сетчатки, вирусные векторы должны быть выбраны в соответствии с тропизмом AAV, LV, и объявление в клетки-мишени 5. Например, AAV2 / 2, AAV2 / 6 и AAV2 / 8 являются высокая эффективность трансдукции в РГК и Мюллер клеток. AAV2 / 5, 2/7, 2/8 и 2/9 эффективно преобразовывать клетки фоторецепторов и РПЭ с AAV2 / 8 будучи наиболее эффективным серотипа мышей 5,12 5. Для векторов Л.В., есть высокого уровня экспрессии в клетках ПЭС после субретинальных инъекций, но мало или нет выражении после интравитреальных инъекций 13.
Для эффективной доставки генов в ПЭС, вирусные промоторы должны быть также рассмотрены. Вирусные промоторы, такие как цитомегаловирус (CMV) промотора и химерный куриного бета-актина / промотор CMV энхансер сильные промоторы и повсеместно, таким образом, они используются в большинстве исследований генной терапии. В ПЭС, ЦМВ промотор оценкам, чтобы выразить в десять раз больше белка, по сравнению с RPE65 промоутер 14. Важно, что оптимальное сочетание промотора и вирусных векторов, включая серотипа должны быть достигнуты для достижения лучших результатов, как показано на превосходной экспрессии RPE65, когда промотор человеческого RPE65 упакованы в серотипа rAAV2 / 4, чем rAAV2 / 2 15. Ориентируясь на поставки гена к ПЭС клеток, РПЭ-SPecific промоторы, такие как RPE65 или промотора VMD2 уменьшает выдает проходит мимо безопасности 16.
AMD является сложным заболеванием, которое состоит из двух фаз с дегенеративной фазы называют сухой AMD и фазы характеризуется хориоидеи неоваскуляризации называют мокрой AMD. Кроме того, AMD является заболеванием, при котором многочисленные генетические восприимчивости в том числе фактора комплемента H (CFH), дополняют C3, дополняют фактор I (CFI), возраст макулопатии восприимчивость 2 (ARMS2) и АроЕ в сочетании с экологической факторов риска 17. Из-за сложного характера генетических факторов риска в AMD, нет ни одного гена кандидатом на его генной терапии. Таким образом, ток генной терапии в AMD сосредоточена на передаче генов, чтобы выразить антиангиогенные белки, направленные сосудистой оболочки глаза неоваскуляризации в мокрой 18 драмов. Там нет кандидата ген еще для лечения сухой драмов с генной терапии. Недавно мы предположили, что накопление амилоида бета внутриклеточный могбыть связано с сухой функции AMD у трансгенных мышей 19. Кроме того, subretinally вводят бета-амилоида была подхвачена ПЭС у мышей (данные не опубликованы). Мы можем расщеплять внутриклеточный амилоида бета вирусной протеазы 20. Таким образом, мы дополнительно изучали генную терапию в сухом AMD с потенциальными целями.
В заключение, генная терапия в глазной болезни более перспективным, чем в любом другом органе. Кроме того, субретинальная впрыска является основным методом для генной терапии заболеваний сетчатки в, особенно в отношении фоторецепторных клеток и RPE. Таким образом, мы надеемся, что этот метод становится все более широко используются и могут внести свой вклад в продвижение генной терапии не только в моногенная унаследованной ретинопатии, но и в возрастной макулярной дегенерации.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Это исследование было поддержано Сеульского национального университета научно-исследовательского гранта (800-20140542), Программа исследований Пионер NRF / МОНТ (2012-0009544), и анализ технологии Программа Био-сигнала Инновация NRF / МОНТ (2009-0090895), и Грант NRF / МОНТ (2015M3A9E6028949).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| TWEEZERS DUMONT #5 11cm DUMOSTAR 0.1 x 0.06 mm TIPS | WPI | 500233 | |
| VANNAS Scissors S/S, 105 mm | WPI | 555583S | |
| 33 G Blunt needle | WPI | NF33BL-2 | |
| NanoFil Syringe, 10 microliter | WPI | NANOFIL | |
| RPE-KIT | WPI | RPE-KIT | For easy one hand injection |
| 30 G x 1/2 (0.3 mm x 13 mm) BD PrecisionGlideTM Needle | BD | 305107 | Initial puncture for subretinal injection |
| Microscope Cover Glasses (No. 1 3 mm diameter) | Warner Instruments | 64-0720 (CS-3R) | |
| Leica operating microscope | Leica | LM M80 | |
| Fluoresecein microscope | Nikon | Eclipse 80i | |
| Lentivirus | Thermo scientific | TMO.LV-Ctr | Used to dilute vectors |
| PBS | Gibco | 10010-015 | Used to dilute vectors |
| Troperin (Phenylephrin 0.5% - Tropicamide 0.5%) | Hanmi | For dilation | |
| Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution USP, 0.5% (Sterile) | Bausch&Lomb | For topical anesthesia | |
| Healon GV OVD | Abbott Medical Optics Inc. | ||
| Zoletil 50 (tiletamine hypochloride and zolazepam hypochloride) | Virbac | For general anesthesia | |
| Rompun injection (Xylazine HCl) | Bayer | For general anesthesia |
References
- Maguire, A. M., et al. Safety and efficacy of gene transfer for Leber's congenital amaurosis. N Engl J Med. 358 (21), 2240-2248 (2008).
- Jacobson, S. G., et al. Gene therapy for leber congenital amaurosis caused by RPE65 mutations: safety and efficacy in 15 children and adults followed up to 3 years. Arch Ophthalmol. 130 (1), 9-24 (2012).
- Conlon, T. J., et al. Preclinical potency and safety studies of an AAV2-mediated gene therapy vector for the treatment of MERTK associated retinitis pigmentosa. Hum Gene Ther Clin Dev. 24 (1), 23-28 (2013).
- MacLaren, R. E., et al. Retinal gene therapy in patients with choroideremia: initial findings from a phase 1/2 clinical trial. Lancet. 383 (9923), 1129-1137 (2014).
- Trapani, I., Puppo, A., Auricchio, A. Vector platforms for gene therapy of inherited retinopathies. Prog Retin Eye Res. 43, 108-128 (2014).
- Liang, F. Q., Anand, V., Maguire, A. M., Bennett, J.
- Peyman, G. A., Lad, E. M., Moshfeghi, D. M.
- Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate. J Vis Exp. (79), (2013).
- Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye. J Vis Exp. (69), (2012).
- Eberle, D., Santos-Ferreira, T., Grahl, S., Ader, M. Subretinal transplantation of MACS purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina. J Vis Exp. (84), e50932 (2014).
- Sahel, J. A., Roska, B.
- Allocca, M., et al. Novel adeno-associated virus serotypes efficiently transduce murine photoreceptors. J Virol. 81 (20), 11372-11380 (2007).
- Takahashi, K., et al. Sustained transduction of ocular cells with a bovine immunodeficiency viral vector. Hum Gene Ther. 13 (11), 1305-1316 (2002).
- Rolling, F., et al. Gene therapeutic prospects in early onset of severe retinal dystrophy: restoration of vision in RPE65 Briard dogs using an AAV serotype 4 vector that specifically targets the retinal pigmented epithelium. Bull Mem Acad R Med Belg. 161 (10-12), 497-508 (2006).
- Le Meur, G., et al. Restoration of vision in RPE65-deficient Briard dogs using an AAV serotype 4 vector that specifically targets the retinal pigmented epithelium. Gene Ther. 14 (4), 292-303 (2007).
- Alexander, J. J., Hauswirth, W. W. Adeno-associated viral vectors and the retina. Adv Exp Med Biol. 613, 121-128 (2008).
- Puche, N., et al. Genetic and environmental factors associated with reticular pseudodrusen in age-related macular degeneration. Retina. 33 (5), 998-1004 (2013).
- Campochiaro, P. A. Gene transfer for neovascular age-related macular degeneration. Hum Gene Ther. 22 (5), 523-529 (2011).
- Park, S. W., et al. Intracellular amyloid beta alters the tight junction of retinal pigment epithelium in 5XFAD mice. Neurobiol Aging. 35 (9), 2013-2020 (2014).
- Shin, B., et al. Intracellular cleavage of amyloid beta by a viral protease NIa prevents amyloid beta-mediated cytotoxicity. PLoS One. 9 (6), e98650 (2014).
