Abstract
定向细胞迁移的下一个直流电场（dcEF）的行为被称为electrotaxis。生理dcEF在胚胎发育，细胞分化和伤口愈合过程中引导细胞运动的显著的作用已被证明在许多研究。通过将微流体芯片的electrotaxis测定中，调查过程缩短和实验误差最小化。近年来，微流体装置制成的聚合物质（例如，甲基丙烯酸甲酯，聚甲基丙烯酸甲酯，或丙烯酸）或聚二甲基硅氧烷（PDMS）已被广泛用于研究细胞的响应电刺激。但是，与制造一个PDMS装置所需的许多步骤中，丙烯酸类微FL uidic芯片的简单而快速的结构使得它适合于设备的原型和生产。然而，没有报道的设备，这有助于该组分化学DCE的效率研究对细胞˚F影响。在这份报告中，我们描述我们的设计和丙烯酸系多信道双电场（MDF）芯片调查化学和电刺激对肺癌细胞的效果并发的制造。中密度纤维板芯片提供了一个测试的电气/化学刺激八种组合。该芯片不仅大大缩短了实验所需的时间，但在electrotaxis研究也提高了准确性。
Introduction
贴壁细胞下的直流电场（dcEF）朝向阳极或阴极移动的行为被称为electrotaxis。细胞的行为electrotactic起着胚胎发生，神经再生，和伤口愈合一个显著作用。1肿瘤细胞如鼠前列腺癌细胞，2-乳腺癌细胞，3和肺腺癌细胞4-8已根据所施加的dcEF所示electrotactic运动。生理EF已在腺组织进行了测量。9,10- Electrotaxis也有报道在腺相关的肿瘤细胞。2,3两者合计，癌细胞的electrotaxis被认为是一个转移因子11控制的电指导dcEF下的癌细胞可以是用于癌症的未来治疗的潜在的方法。然而，今天，electrotaxis的具体分子机制仍存在争议。因此，INF进行调查对癌症细胞迁移的电刺激的luence可以方便的策略的发展为癌症的治疗。
最近，生物微流体装置已被制造用于研究的细胞响应流动的剪切力，12化学梯度，13和电刺激4 体外 。使用聚二甲基硅氧烷（PDMS）或聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA，也被称为丙烯酸类）的生物微流体装置的制造已成功地减少了此类实验的故障率。此外，使用基于丙烯酸的微流体装置作为原型调查生物受试者比使用PDMS芯片简单。在丙烯酸类装置的各种功能已经开发了用于electrotaxis研究。然而，没有任何先前的设计都能够同时测试的各种化学条件对细胞的影响，并在电场为electrotaxis研究。因此，我们开发了一种微流体装置，所述亩ltichannel双电场（MDF）四个独立培养通道和八个不同的实验条件在一个芯片包含芯片。
丙烯酸基密度板芯片，首先报道了侯等人，8集成电刺激和几个化学隔离通道。这些化学隔离通道可以用来培养在一个实验中不同类型的细胞。所述dcEF在通道是由一电源产生的。两个独立的电场，一用施加的电场强度（EFS）和另一用0 EFS，在各化学分离的信道进行的。以这种方式，在芯片提供了更好的控制的共存EF和化学刺激。此外，从MDF芯片内部的化学扩散数值模拟结果表明，无交叉污染，24小时的试验期后，通道之间发生。8
相比于叠维策报道李等人，14密度板芯片提供了一个更大的文化区域，其允许电刺激的细胞的进一步的生化分析。此外，与中密度纤维板芯片的较大的观察区域，更多的细胞可以在测试中观察，所以迁移速度的电刺激的细胞的或指向性的分析更准确。报告由Huang等人4和Tsai等人。15以前的研究的单通道芯片设计允许被测试仅一种类型的细胞或化学的。然而，中密度纤维板芯片可用于研究的各种化学品上electrotaxis的影响，以及电刺激对不同类型的细胞的作用。换句话说，中密度纤维板芯片允许对化学剂量依赖性的高效学习。
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Protocol
1.设计和MDF芯片的制备
- 绘制使用商业软件，如AutoCAD单个丙烯酸系层的图案，并保存该图形。
- 回顾在图1A中的四层压克力板图案的设计和确认层间的连接。
- 制造所有的丙烯酸类片材，并通过激光烧蚀使用CO 2激光划线器（图1B，2A 和 2B）的双面胶带。16
- 打开电池激光划线和机器连接到控制笔记本。
- 运行的商业软件，通过点击打开设计步骤1.1模式“设计图案的文件。”
- 将一块空白丙烯酸系片材或双面胶带上的激光划线器的XYZ台。
- 设置激光束的焦点的丙烯酸系片材或双面胶带具有自动alignmen的表面上通过激光划片的制造商提供吨棒。
- 发送所设计的图案，以该激光划线器的丙烯酸系片材或双面胶带的直接加工。
- 使用镊子从丙烯酸系片材除去保护纸和吹表面的清洁氮气。
- 堆叠的丙烯酸系片材，并在一个热粘合机在2kg / cm 2的压力结合在一起在110 45分钟 °C至形成流/电刺激通道组件。
- 准备在显微镜盖玻璃作为在芯片中的细胞培养基材。
- 把防护玻璃成染色缸和填充罐用稀释10倍的物质列表中列出的洗涤剂。
- 把盖玻璃和染色缸中的超声波免缝滤清器并清洁罩玻璃15分钟。
- 倒入稀释的洗涤剂出来的染色缸中，加注蒸馏水罐子，并重复步骤1.5。2 3次。
- 通过将其附着在双面胶带前用氮气吹干燥清洗玻璃盖。
- 附着的清洗玻璃盖与双面胶带构图步骤1.2的流量/电刺激通道组件。
- 坚持在中纤板芯片组装与超级胶水的第1层13件亚克力适配器连接到单独的开口。密度板芯片组装就完成了（ 图2D）。
- 与使用前紫外线照射30分钟消毒完整的中纤板芯片组装。
2.设置密度板芯片的盐桥网络
- 在使用之前，消毒所有的塑料管，用手指拧紧螺母， 并且在图3B中所示的离心管通过设置的15分钟的保持时间在121 °下在高压釜中。
- 经由介质入口连接氟塑管（ 图3B-ⅰ）到MDF芯片组件并且，如图1A所示插座适配器。
- 连接介质入口的Luer锥形和出口塑料管在图3B-i到所述旋塞3路。
- 取2.5 ml的CO 2的-equilibrated磷酸盐缓冲盐水（PBS）的使用3毫升注射器和注射器连接到入口塑料管的活塞3路。空3毫升注射器连接到插座的塑料管的活塞3路。这两个注射器通过MDF芯片从而互连。
注：孵育PBS在37 °C 5％-CO 2细胞培养孵化器O / N来获得二氧化碳 -equilibrated PBS。 - 封蓝色的开口和绿色适配器（图1A）上的第1层PMMA板用白色固体手指拧紧螺母（图3B-ⅲ）。
- 与CO 2填充盐桥通道和培养室中设置步骤2.4中所述的注射器-equilibrated PBS。避免形成气泡。
- 接下来，把CO 2 -equilibrated PBS含在37℃，5％-CO 2细胞培养孵化器的O / N培养MDF芯片。这允许在双面胶带的溶解空气，以形成在所述腔室的泡沫。
- 冲洗掉在通道中的气泡，通过使用两个注射器快速PBS流动的通道。泵的PBS来回如果必要的。
- 漏的PBS中通过3路活塞连接到所述介质出口管的通道。
- 使用一个新的3-ml注射器，取2.5毫升的 CO 2 -equilibrated Dulbecco氏改良的Eagle培养基（DMEM）（见步骤3.5），并更换连接到用新的入口的注射器。笔芯渠道与网上平台。
- 制备盐桥网络。
- 时间上去除固体螺母（ 图3B-III）绿色适配器（ 图1A），注入3％热（> 70℃）的琼脂糖放入盐BRI通过开口中的绿色的适配器（图1A）DGE通道。
注意：热琼脂糖制备：将1.5克琼脂糖粉末在50毫升PBS中。通过在高压釜设定20分钟的保持时间在121℃灭菌。 - 停止注射琼脂糖当液体充满四分之三的盐桥通道的长度的。
- 通过琼脂糖注射后拧固螺母（图3B-ⅲ）密封在绿色适配器（图1A）的孔。
- 替换在蓝色适配器（图1A）与半透明管状手指拧紧螺母（图3B）的固体坚果。
- 加载3％预热琼脂糖入管状螺母（图3B-ⅳ）。
- 嵌入前的银/氯化银电极（图3B-v）的入管状螺母（图3B-ⅳ）凝固的琼脂糖。
- 时间上去除固体螺母（ 图3B-III）绿色适配器（ 图1A），注入3％热（> 70℃）的琼脂糖放入盐BRI通过开口中的绿色的适配器（图1A）DGE通道。
- 完成盐桥网络的设置完成后，注入CL1-5肺癌细胞到培养腔室，一个腔室的时间。
3.准备癌细胞，并设立Electrotactic实验
- 肺癌细胞株CL1-5经常文化。
- 培养的CL1-5肺癌细胞，从教授杨泮池，17中的完全培养基中，在37中得到一个75T细胞培养烧瓶 °下在5％CO 2的气氛中。完全培养基由DMEM和10％牛胎儿血清（FBS）的。子培养细胞每3至4天。用于执行electrotaxis实验的细胞是从原始来源小于25代。
- 加入2毫升0.25％胰蛋白酶缓冲器向指数生长的细胞CL1-5并孵育在37 2分钟 °C 5％-CO 2细胞培养孵化器电池detachmen吨。
- 终止该拆卸过程用6ml 10％FBS的DMEM，并离心将细胞在300克5分钟，室温。然后丢弃培养基和悬浮细胞沉淀用5毫升PBS中。
- 计数细胞，在PBS中的数目。然后取1×10 6个细胞，并离心以300g为5分钟，在室温。
- 丢弃的PBS。悬浮细胞用预热的 CO 2 -equilibrated的DMEM，并调整细胞密度为1×10 6个细胞/ ml。
注：在孵育37完全培养基 °C 5％-CO 2细胞培养孵化器O / N来获得二氧化碳 -equilibrated DMEM。
4.设立Electrotactic实验
- 从密度板芯片的出口处，注入0.3毫升的细胞，1×10 6 /毫升，进入芯片。
- 孵育在细胞培养孵化器的细胞接种密度纤维板芯片（设置在37 ℃和5％的CO 2）为2-4小时。
- MDF微设置流体系统。
- 安装MDF微流体系统在透明的氧化铟锡玻璃（ITO），加热器。测量密度板芯片用K型热电偶密度板芯片与ITO玻璃之间夹住的温度。控制在ITO加热器与一个比例 - 积分 - 微分（PID）控制器。设置MDF微流体系统孵化温度为37 °下与PID控制器。
注：在ITO加热器的制造和细胞培养加热系统的安装是在以往的报告18,19说明。 - 安装在倒置显微镜上的计算机控制的XYZ电动载物台的温度控制的中密度纤维板芯片组件。电动载物台的使用方法在步骤5.1中描述。通过使用四通道注射泵入口泵完全培养基向培养腔室。
- 安装MDF微流体系统在透明的氧化铟锡玻璃（ITO），加热器。测量密度板芯片用K型热电偶密度板芯片与ITO玻璃之间夹住的温度。控制在ITO加热器与一个比例 - 积分 - 微分（PID）控制器。设置MDF微流体系统孵化温度为37 °下与PID控制器。
- 泵完全培养基到MDF芯片以20微升/小时的流速。从出的文化浪费让被收集在离心管（示出为图 3A中的“废物”）。
- 在MDF中芯片孵育将细胞再16-18小时，在37℃。
- 要更换介质，泵含有50，25，第5和0μM激酶抑制剂，分别培养基，向每个培养室在20μL/分钟，持续10分钟的流速。
注：加入3毫升无菌水到10.6毫克激酶抑制剂准备Rho相关蛋白激酶抑制剂Y27632的10mM储备溶液。稀释10mM储备溶液至50，25和5μM，分别使用10％FBS的DMEM培养基中。 - 孵育细胞中的激酶抑制剂另外60分钟，在37℃。设置介质流速至20微升/小时。使用相同的培养温度和流量在后面的步骤上述率。
- 使用电线到直流电源连接到经由芯片上的银/氯化银电极密度板芯片。
- 串接电流表我n中的电路。使用电流表监测中的电流密度纤维板芯片。
- 接通直流电源和通过调节供电电压以15至19五设置电流表86.94μA的电流
注意：考虑欧姆定律E = I /（σAEFF），其中I是电流流过块状材料， 即 ，在electrotactic室中的培养基，σ（= 1.38Ω-1米- 1）是培养基中，甲EFF（= 0.21毫米2为3毫米宽×0.07毫米高）的导电率是electrotactic腔的有效截面面积，并且电流（I）中，以产生一个300毫伏/毫米所需EF中密度板芯片是86.94μA。
5.采集和细胞图像分析
- 控制使用MATLAB GUI程序的机动阶段。通过安装在microsco密度板微流体系统PE，移动芯片采用电动舞台的观察区域。
- 安装在显微镜用数字单镜头反光（SLR）相机记录细胞图像。
- 以使用4X物镜以15分钟的间隔2小时的显微图像。
- 细胞迁移分析。
- 运行NIH ImageJ的1.47 V.
- 从初始的距离进行分析，以细胞的质心的最终位置。
- 进入 “文件”→“导入”→“图像序列”，并导入九张图像细胞迁移分析。第一图像是零时间的结果，最后图象是120分钟的结果。
- 进入“ 分析”→“设置测量”，并勾选旁边的“ 重心”
- 点击“ 写意选择”图标。
- 描绘了选择的细胞的边缘中的第一图像。
- 进入“编辑”→ >“选择”→“ 添加到管理器”
- 转到第九图像和描绘在第一图像上所选择的同一细胞的边缘。细胞位置可以使用第二到第八图像进行追踪。
- 进入“编辑”→“ 选项”→“ 添加到管理器”
- 重复步骤5.4.5至5.4.9，以90至100个细胞采集数据。
- 进入“ 分析”→“测量”，以获得所选单元格的最初和最后的位置的结果。
注：迁移速度被定义为每小时的平均细胞运动的长度。的指向性被定义为余弦，其中是dcEF（从阳极到阴极）的矢量和从一个单元的起点到其最终位置的向量之间的角度。的指向性是-1细胞向阳极迁移和1对细胞向阴极迁移。对于一组随机心肌梗死光栅单元，所述指向性为0 2
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Representative Results
制造中密度纤维板设备和组装
丙烯酸基密度板芯片的示意图示于图1A。四压克力板，一个覆盖玻璃，13丙烯酸适配器，和一块双面胶带在已完成的中密度纤维板芯片（图2D）的组件被使用。只有四个独立的文化通道中密度纤维板设备。然而，芯片上的盐桥网络创建八个不同的实验条件下，在芯片的八个段。三盐桥（蓝色通道中图1A的第2层），79，90，和80毫米长，被耦合到MDF芯片的第二层而不与图像的观察产生干扰。盐桥网络和培养室之间的小孔隙（在层3和蓝色长方体通道4 图1A的 ），其中有一个00.25毫米2的横截面面积，最小化流体流量成盐桥在实验过程中。中密度纤维板芯片的养殖面积为74 平方毫米的每个片段。在这个演示中，中纤板设备的细胞培养室组成的70微米厚的双面胶和玻璃盖。然而，如果不同细胞培养条件（例如，胶原涂层的要求，低流量的剪切，或在培养室大培养基体积）是需要electrotaxis研究中，培养底物和磁带都可以很容易地更换。因此，可用于中密度纤维板芯片内electrotaxis研究各种类型的细胞。
MDF微流体系统的配置
密度板微流体系统的设置示出在图3A中 。 在图3B中所示的组件有Used将建立的介质流量和电流网络在MDF中的微流体系统。与中空手指拧紧螺母（红色和绿色）和鲁尔锥度（棕色） 图连接在管3B-i的用来传送介质到MDF流网络。后的注射器连接到路厄锥度和稳定到四通道泵，管道流动系统是完全的。培养基和废物通过管道系统输送。因为管子和丙烯酸适配器之间的连接由连接器拧紧，中密度纤维板介质网络可以忍受比可以与PDMS系统更高的液压。由于丙烯酸系片材和管子的极端低的透气性，该介质网络和外部环境之间的任何接触被阻止。因此，在系统中的介质的pH值保持稳定，细胞可以使用密度板微流体系统外部的二氧化碳培养箱中培养。由于密度板通道IP被安装在一个电动载物台，时间推移细胞图像可以从八个单独的部分。开底的微量离心管（图3B-ⅱ）安装在半透明管状手指拧紧螺母（图3B-ⅳ），以增加琼脂糖的体积容量。以这种方式，比较大的电极可以被插入到琼脂糖以提供稳定的电刺激的细胞的时间较长。
表明直流电场中密度板芯片代
各室的电压可以通过在电路连接的芯片的植入电极来测量。然而，我们没有测量腔室中的电压。相反，我们的盐桥网络和芯片的细胞培养室中模拟的电场。四electrotactic室进行连续CONnected在电子电路。以这种方式，相同的电流被保持在每个这些腔室。根据欧姆定律，EFS相关用的腔室，在微流体装置的横截面的面积。此外，所有的PMMA板和磁带通过CO 2激光划线器被制造。芯片组装件的对准是精确和芯片的结构缺陷是最小的。因此，每个室中的EFS应保持稳定。电场模拟结果表明EFS的一个均匀分布300和0毫伏/ mm的第一半部和在设备中的培养室的其余半部（数据未显示）。此前，报告从我们的实验室中，黄等人。和Tsai等，已经表明，在所测量的和模拟的EFS值的差为小于4％。4,15这一结果表明，在我们的系统中，所测量的电场非常符合模拟的值。在该W扫，我们插入大量的Ag / AgCl电极，以提供稳定的电流为一个漫长的实验。中密度纤维板芯片上的应用目前在electrotaxis的实验仅下降后1.85±0.19％，7小时EF刺激。此外，电刺激的最长时间是在我们的研究中4小时。因此，我们认为，输入电流electrotaxis测试期间保持稳定，而电场在MDF中芯片的electrotactic室由串联连接的电流表进行监视。
肺癌细胞使用MDF微流体系统的electrotaxis的调查
Rho相关卷曲螺旋激酶（ROCK）的electrotactic调节已被证明在中国仓鼠卵巢（CHO），20内皮，21及神经细胞22但尚未被研究用于肺癌ÇELLS。因此，ROCK抑制剂，Y27632，施加到MDF微流体系统，研究其对肺癌细胞的效果electrotaxis。 如图4，治疗Y27632显示在改变细胞迁移速度有或没有电刺激没有影响。然而，Y27632应用程序癌细胞dcEF下（300毫伏/毫米）显著减少了阳极迁移。在50微米的浓度，ROCK抑制剂消除肺癌细胞的阳极运动，但并没有影响他们的迁移速度。此外，有施加的化学浓度和指向性指数（图4B）之间的剂量依赖关系。这些结果表明，中密度纤维板微流体系统是可靠和有效的用于研究electrotaxis。
图1. 德IGN密度板芯片。（ 一）MDF芯片的示意图。密度板装置由四层丙烯酸片（72×50毫米），13丙烯酸适配器（10×10×6毫米），双面胶带，和盖玻璃（24×60毫米）。二层丙烯酸系片材的厚度为2毫米，而其它三个层各自是1毫米。在较低的三个层丙烯酸类，盐桥和介质流网络由蓝色和红色块，表示分别。在第一丙烯酸系片材层，绿色丙烯酸适配器被用于注射琼脂糖。蓝色丙烯酸适配器被用作连接到的Ag / AgCl电极。有在MDF中芯片4细胞培养室。的面积和每个细胞培养室的高度148毫米2（3×46毫米）和0.07毫米。在层3和4的蓝色小通道盐桥网络连接到培养腔室。这些连接通道的横截面为0.25毫米
图2. 密度板芯片制造 和装配过程。（A）中的丙烯酸系片材和双面胶带的图案用CO 2激光加工刻划。 （B）中的各个丙烯酸系片层是由CO 2激光器按设计图纸制造。 （ 三）清理压克力板小号一起被采用热粘合机粘合。 （ 四）已完成MDF芯片组装。 请点击此处查看该图的放大版本。
图3. 系统electrotaxis研究，系统的electrotaxis的实验（A）示意图。连接到MDF芯片的管用于中等输液和废弃物外排。所述dcEF在芯片是通过银/氯化银电极和电源进行的。该设备设置安装在显微镜的XYZ电机阶段。在芯片的细胞图像拍摄由商业数码单反相机。 （B）中的介质流的网络的组件和dcEF代在MDF中的微流体系统的照片，inclu丁（i）该管接头，（二）开放式底离心管，（三）白色固体用手指拧紧螺母，（IV）的半透明管状用手拧紧螺母，以及（v）的Ag / AgCl电极。 请点击此处查看该图的放大版本。
图 的Y27632对肺癌细胞迁移下的（A）中的EFS 4. 影响零和（B）300毫伏/毫米。dcEF刺激1小时的预处理的Y27632指定浓度后应用。电刺激持续了2小时。的指向性和细胞迁移的速度的定量分析consititute一个代表性实验。 90-100细胞在数据分析中使用。 *为P <0.001。数据被表示为平均值±标准误差平均（SEM）。 请点击此处查看该图的放大版本。
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Discussion
我们发现秉承丙烯酸适配器到MDF芯片的1层是棘手的过程。仅1至2微升的强力胶的应用是足够坚定奉行适配器到MDF芯片。更大量的胶水导致强力胶和不遵守的一个不完整的聚合。一旦丙烯酸适配器牢固地附着在芯片中密度纤维板，液体泄漏的微流体系统很少发生。此外，O / N培养在真空室内有助于去除双面胶带/盖玻璃或双面胶带/丙烯酸片接口之间截留空气。因此，该过程增强了培养室中密度板芯片的稳定性。
的3％琼脂糖的盐桥网络的制备过程中的温度控制是重要的。如果琼脂糖的温度不是在注入过程足够高，琼脂糖会迅速固化针筒内并不能注入盐桥网络。此外，琼脂糖注射期间，以避免任何气泡形成盐桥网络中是很重要的。气泡的外观大大地增加了网络的电阻，导致试验失败。此外，一旦注射过程中琼脂糖固化，也不能完全阻止液体流中盐桥的通道。这样，化学物可以很容易泄漏到其他信道。最好的方法是热的琼脂糖注入到网络和然后让琼脂糖巩固内部的盐桥通道。
细胞注射是在实验electrotaxis一个关键过程。以确保细胞在培养室的细胞接种的足够数量，我们注射细胞过量数目。在这种方法中，将细胞从出口喷射。注射速度应缓慢，甚至避免在培养室的不均匀细胞分布。另外，由于该通道被隔离在密度板芯片，喷射必须一次完成一个通道。因此，完整的细胞注射过程是费时。在将来，将有必要创建一个额外的细胞注射通道可以同时植入细胞分化成所有四个培养室。这种新工艺将减少样品体积，所需的注射细胞的数目，并且操作时间。
有在使用丙烯酸系，而不是作为PDMS用于制造微流体设备的材料有几个优点。丙烯酸基的设备可以直接在加热器上进行操作，而不培养箱。由于该系统不需要的 CO 2的供应，细胞可以在丙烯酸类生物微流控芯片上生长有规律倒置显微镜与加热器。这是比较容易的培养箱外部记录在芯片细胞图像。我们使用了广泛市售的数码单反相机记录系统中的细胞的图像。此外，软洁具必要的相机可编程控制也容易获得。这使得细胞的延时成像易于编程的。因此，构建的生物微流自动记录图像系统的成本比商业系统的要低得多。与此相反，采用了基于PDMS的芯片时，系统必须在CO 2培养箱操作。因此，额外的图像记录设备必须运行在孵化器购买。这样的设备是昂贵的，体积相对较大，并占据在细胞培养孵化器的有限空间的很大一部分。在另一个方面，相对于PDMS芯片制造过程中，丙烯酸类微FL uidic芯片的容易和快速制造是适合于装置的原型和生产。而且，随着基于PDMS的装置相比，丙烯酸基微流体芯片是结构上更稳定的，更适合用于构造复杂的三维微流体网络系统，因为是在这项研究中密度板芯片执行。在MDF中芯片的芯片上的盐桥网络不能容易地制造在一个基于PDMS的设备。该网络系统最大限度地减少了微流体芯片的总尺寸并使得electrotaxis研究更容易和更快。
中密度纤维板芯片内部，我们生成的只有两个电场强度（EFS，0和300毫伏/毫米），每个隔离通道。然而，中密度纤维板芯片和多场electrotactic芯片，所报告的Huang等人，4共享一个类似的信道设计的细胞培养区域。通过改变培养室中密度板芯片的形状，多个EFSs也可以密度板芯片上产生的。具有这些修饰，多发性EFSs和多种化学品可在相同的测试中使用。因此，高通量筛选系统可以创建以调查使用该设备electrotaxis。
只在一个实验中，中密度纤维板芯片能测试的影响的在细胞上不同的化学物质dcEF下，或电刺激对不同类型的细胞的影响。它甚至可以是能够实现在MDF中芯片20分离的并行通道，而不显著增加器件的尺寸。8这表现在这项工作中，在一个实验中，我们获得了细胞迁移的指向性和之间的显著剂量依赖性相关Y27632（图4）。密度板芯片，四通道明确规定了在癌细胞研究electrotaxis的有效方法。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| DMEM medium | Gibco,Invitrogen, USA | 12800-017 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco,Invitrogen, USA | 16000-044 | |
| Trypsin | Gibco,Invitrogen, USA | 25200-072 | |
| PBS | Basic Life | BL2651 | |
| Y-27632 (hydrochloride) | Cayman Chemical Co | 10005583 | |
| agarose | LONZO, USA | SeaKem LE AGAROSE | |
| syringe | Terumo | 3 ml with Luer taper | |
| 3-way stopcock | Nipro | with Luer taper | |
| PMMA (acrylic) | HiShiRon Industries CO., Ltd, Taiwan | thickness 1mm, 2mm | |
| acrylic adaptor | KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Taiwan | 1/4-28 port, 10x10x6 mm | customized |
| nut | Thermo Fisher Scientific Inc. | UPCHURCH:P-206x, P-200x, F120x, P-659, P-315x | |
| Microscope cover glass | Deckgläser, Germany | 24x60 mm | |
| double-sided tape | 3M | PET 8018 | |
| super glue | 3M | Scotch Liquid Plus Super Glue | |
| TFD4 detergent | Franklab, France | TFD4 | |
| ultrasonic steri cleaner | LEO ULTRASONIC CO., LTD., Taiwan | ||
| Thermo bonder | KuanMin Technology Co., Ltd, Taichung, Taiwan | customized | |
| CO2 laser scriber | LTT group, Taiwan | ISL-II | |
| proportional-integral-derivative (PID) controller | JETEC Electronics Co., Japen | TTM-J40-R-AB, | |
| K-type thermocouple | TECPEL | TPK-02A | |
| 4-channel syringe pump | KdScientific, USA | 250P | |
| DC power supply | GWInstek, Taiwan | ||
| X-Y-Z motor stage | TanLian, E-O Co. Ltd., Taiwan | customized | |
| inverted microscope | Olympus, Japan | CKX41 | |
| digital SLR camera | Canon, Japan | 60D |
References
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