Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

בניית Thioether/ויניל גופרתי-קשורה Hydrothiolation תיול-ene/yne הנוצרות על-ידי פפטידים הסליל באמצעות צילום

Published: August 1, 2018 doi: 10.3791/57356
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1
1Key Laboratory of Chemical Genomics, School of Chemical Biology and Biotechnology, Peking University Shenzhen Graduate School
* These authors contributed equally

Summary

אנו מציגים את פרוטוקול לבנייה של thioether/ויניל קשורה סולפיד פפטידים הסליל באמצעות צילום-induced תיול-ene/תיול-yne hydrothiolation.

Abstract

כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מפורט עבור הכנת פפטידים קשורה thioether תוך שימוש בשרף הבין-התפלגות מולקולרי/תיול-ene hydrothiolation. בנוסף, פרוטוקול זה מתאר את הכנת פפטידים ויניל-גופרתי-קשורה, שימוש בפתרון התפלגות תיול-yne hydrothiolation בין amino acids שקיימים אלקן/אלקין לצד רשתות ציסטאין שאריות-אני, אני + 4 עמדות. פפטידים ליניארי היו מסונתז באמצעות סינתזה פפטיד מוצק-פאזי סטנדרטי מבוסס Fmoc (SPPS). תיול-ene hydrothiolation מתבצעת באמצעות לתגובה thio התפלגות-ene או לתגובה thio הבין-מולקולרי-ene, בהתאם לאורך פפטיד. במחקר זה, לתגובה thio התפלגות-ene מבוצעת במקרה של פפטידים קצרים תוך שימוש בשרף deprotection של קבוצות trityl של ציסטאין שאריות לאחר הסינתזה מלאה של פפטיד ליניארי. השרף מוגדר אז הקרנת UV באמצעות photoinitiator 4-methoxyacetophenone (מפה) ו- 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP). התגובה תיול הבין-מולקולרי-ene מבוצעת על ידי המסת Fmoc-Cys-OH ב הממס - dimethylformamide (DMF) N, N. זה הוא הגיבו אז פפטיד באמצעות השאריות אלקן מניבי על שרף. לאחר מכן, macrolactamization מתבצע באמצעות benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBop), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt) ו- 4-Methylmorpholine (NMM) כמו ריאגנטים ההפעלה על השרף. בעקבות macrolactamization, הוא המשיך את הסינתזה פפטיד באמצעות תקן SPPS. במקרה hydrothiolation thio-yne, פפטיד ליניארי ביקע מן השרף, מיובשים, לאחר מכן מומס degassed DMF. זה ואז הוא מוקרן באמצעות אולטרא סגול עם photoinitiator 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone (DMPA). בעקבות התגובה, DMF הוא התאדה, השאריות גולמי הוא זירז וטיהרו באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC). שיטות אלה יכולים לפעול כדי לפשט את הדור של פפטידים מחזורית קשורה thioether עקב השימוש של הכימיה לחץ thio-ene/yne שמחזיק סובלנות קבוצה פונקציונלית מעולה ועם תשואה טובה. המבוא של אגרות חוב thioether לתוך פפטידים מנצל אופי שאריות ציסטאין נוקלאופילי, חמצון-חיזור-אינרטי ביחס חוב דיסולפידי.

Introduction

הפיתוח של ליגנדים לווסת אינטראקציות חלבון (להדברה) מספקת גישה אטרקטיבית גילוי תרופות מודרניות. לכן, כמות גדולה של מאמץ הושקעה אל תוך לימוד שיטות כימיות הרומן זה יכול לווסת ביעילות להדברה1,2,3. להדברה מורכבת בדרך כלל משטחים שמעצבת רדוד, גדולים, ו/או הופסק, מולקולות קטנות בדרך כלל נחשבים ליגנדים מתאימים עבור האפנון של להדברה4,5. מתאים חשוף שמעצבת בשטח, פפטידים קצרים לחקות תכונות מבניות של חלבון ממשקי מייצגים מועמדים אידיאליים לכתובת זו בעיה6,7. עם זאת, פפטידים קצרים הם בדרך כלל לא מובנים ב פתרון מימית. זה בשל העובדה כי מולקולות מים אשר להתחרות עם הרשת מליטה מימן התפלגות של עמוד השדרה פפטיד, מוגדרים היטב הייצורים החיים הם entropically שלילי מים8. בנוסף, של פפטידים נמוך מטבעו יציבות ואת מאפייני חדירות תא במידה רבה להגביל את השימוש בו יישומים ביולוגיים9,10. על פי ניתוח נתוני הבנק (PDB) של חלבון, > 50% להדברה לערב קצר סליל α אינטראקציות11. לכן, פותחו שיטות כימיות שונות לגבי סליל מייצב. אלה כוללים דיסולפידי/thioether בונד היווצרות12,13,14, טבעת-סגירת שיכול עיצורים15, לקטם טבעת היווצרות16, 'לחץ' כימיה17, תוספת של 18,perfluoroarenes19, ויניל-סולפיד היווצרות20.

פפטידים לוליינית מיוצב מנוצלים נרחב עבור מטרות תאיים שונים, כולל p53, לאסטרוגן קולטנים, ראס, BCL-2 חלבונים משפחה, ואחרים21,22,23,24. ALRN-6924,-כל-פחמימנים משודכים פפטיד מעכב כפול של MDM2, MDMX, נמצא כעת בשימוש עבור החקירה קליני25. בשנים האחרונות, הקבוצה שלנו יש התמקדו בפיתוח שיטות מייצב פפטיד הרומן באמצעות תיול-ene ו תיול-yne תגובות26,27,28. באופן כללי, אנחנו הראו תגובות אלו המופעלים באמצעות צילום יעילים בתנאים קלים כאשר באופן טבעי משמש ציסטאין בשפע. בנוסף, אנחנו הראו כי תגובות אלו של סובלנות מעולה קבוצה פונקציונלית, ביו-אורתוגונלית הינם הוכחו להיות ישימים עבור שינויים של פפטידים וחלבונים -29. פפטידים סולפיד קשורה וכתוצאה מכך thioether/ויניל בעיקר לשפר את המרחב כימי של אילוץ פפטידים, מספקים מרכז שינוי בהקשר יציב, הוכח להיות ישימים עבור שימושים רבים יישומים ביולוגיים30 ,31,32. עד כה, תוארו רק מוגבל דוחות בנוגע תיול-ene/תיול-yne פפטיד cyclization. במחקר שפורסם על-ידי. Anseth et al. ב-2009, לתגובה על-שרף התפלגות תיול-ene עבור פפטיד cyclization בין alkenes מופעל עם ציסטאין היה והפגינו33. בשנת 2015, צ'ו ואח. תיאר שני הרדיקלי יזם תיול-ene תגובה עבור פפטיד הידוק34 ו התגובה של צימוד תיול-yne/ene עוקבות, רציפים35. לאחרונה, תיאר לנו סדרה של יצירה המבוססת על thioether/ויניל סולפיד קשורה פפטידים20,26,27. פרוטוקול זה מתאר מפורטת סינתזה של פפטידים סולפיד קשורה thioether הנ ל/ויניל בתקווה שזה יהיה מועיל עבור קהילת המחקר רחבה יותר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. ציוד הכנה

  1. למכשירים פפטיד ידנית-סינתזה, מקום של יריעה ואקום (טבלה של חומרים) הוד fume יעיל. בשלב הבא, המקום stopcocks משולשת על שואב האבק מניפולד ולקשר אותם אל קו גז חנקן או ארגון. שווי כל אינלטס שאינם בשימוש באמצעות septa גומי.
  2. חבר מלא שרף עמודות (0.8 x 4 ס"מ, מאגר 10-mL, ראה טבלה של חומרים) סעפת באמצעות את stopcocks-כיוונית (איור 1). השתמש משאבה מחובר למערכת ואקום סינון ואקום או נורת פיפטה גומי על ידי הבלטת ממד כדי להסיר הממס בעמודות.
  3. שימוש photoreactor (איור 2), מצוידים עם מנורות עשר 350 nm (טבלה של חומרים) עבור הקרנת UV. לחבר את מיכל גז ארגון דרך הים האוויר photoreactor על מנת להבטיח כי photoreactor מלא בגז ארגון בטרם ובמהלך את photoreactions האלה.
  4. לפני להדליק את מנורת UV של photoreactor, ודא כי סגירת הדלת photoreactor למקרה שיש הקרנה מן האור UV.

2. שרף הכנה

הערה: באופן כללי, הבנייה של פפטיד מצעים מתבצעת באמצעות פרוטוקולים מבוססי Fmoc מוצק-פאזי פפטיד סינתזה. אלה מתבצעות באמצעות שרף אמיד רינק מה שמשאיר של C-מסוף אמיד הנותרים הבאים פפטיד המחשוף. פרוטוקול זה משמש לאורך כל הנייר.

התראה: N, N- dimethylformamide (DMF), דיכלורומתאן (DCM), 4-methylmorpholine (NMM) ו- N, N- diisoproylethylamine (DIPEA) הם רעילים ואינם מזיקים על ידי שאיפה, בליעה או מגע עם העור. דיאתיל אתר הוא דליק. חומצה Trifluoroacetic (TFA) היא מאכל. 1, 2-ethanedithiol (EDT) היא מאוד מסריח. לכן, כל ממיסים אורגניים וכימיקלים צריך להיות מטופל עם ציוד מגן אישי המתאים (nitrile כפפות חלוק המעבדה, משקפיים מגן), טיפל בתוך ברדס fume כימי.

  1. לחשב את הכמות של שרף הנדרש באמצעות הנוסחה הבאה:
    קנה מידה (mmol) / (שרף העמסה (mmol/g) 1,000 (mg/g)) = מסה של שרף (מ ג)
    אי, הכמות של ההחלקה אמיד MBHA שרף (0.5 mmol/g) עבור 25 µmol = 0.025 mmol / (0.5 mmol/g 1,000 מ ג/גרם) = 50 מ"ג. בשלב הבא, שוקלת 50 מ"ג של שרף בעמודה, להגדיר אותו על סעפת ואקום באמצעות stopcocks-כיוונית.
  2. להוסיף 1-2 מ ל DCM השרף בעמודה (0.8 x 4 ס מ, 10-mL אגירה). להתנפח השרף, בעדינות להתסיס אותו באמצעות זרם חנקן או ארגון למשך 10 דקות. בשלב הבא, להסיר הממס באמצעות סינון ואקום.

3. N-מסוף Fmoc Deprotection, כביסה

  1. להכין את Fmoc N-מסוף deprotecting פתרון: להכין אמצעי אחסון נאותים (200 מ ל) של 50% (v/v) morpholine ב DMF בבקבוק זכוכית.
  2. להוסיף 1-2 מ"ל של הפתרון deprotection שרף, בעדינות להתסיס זה 10 דקות, ואז מסננים את הפתרון באמצעות ואקום. באמצעות DMF (1-2 מ"ל) ו DCM (1-2 מ"ל) לפי הסדר הזה, לשטוף השרף את מיכל התגובה ביסודיות עבור סכום כולל של 3 x. לאחר מכן, חזור על ההליכים deprotection ושטוף 1 x.

4. Fmoc מוגן חומצת אמינו צימוד

  1. כדוגמא את צימוד של שאריות אלנין, במקרה של סינתזה ידנית 25 µmol-סולם, שוקל Fmoc-Ala-הו (5 equiv., 41.4 מ ג) 2-(6-chloro-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate (HCTU; equiv. 4.9, 50.5 מ ג) ב מיכל פוליפרופילן להמיס ב DMF (0.5 מ"ל).
  2. להוסיף DIPEA (10 equiv., 43.5 µl) על מנת ליצור 0.25-M מופעל פתרון חומצה אמינית (טבלה 1). בעקבות הפעלה מראש משוער 1 דקות, להוסיף את הפתרון שרף, ואז בועה זה עם N2 עבור 1-2 h.
  3. מהשלב הזה על, לשלב את כל חומצת אמינו בשרשרת פפטיד כרצף של צעדים: ראשית deprotection של Fmoc-קבוצת N-מסוף, ולאחר מכן הכביסה, מלווה זיווגו של החומצה אמינית דרך הפעלה באמצעות HCTU.
    הערה: זמן רב יותר מצמד (למשל., 2 h) מומלץ אם זיווגים בעקבות משקע חומצת אמינו sterically הפריע [למשל., Fmoc-חמישי (tBu) - Fmoc-Cys (Trt), או - הו, הו (Trt) - הו, Fmoc-Arg (Pbf) - Fmoc-שלו]. אלקן/אלקין הנושאת חומצות אמינו טבעיות משולחים שאינם נמצאים בשימוש מקבילות 3 במקום 5 ועזב להגיב במשך 3 שעות.
  4. מעקב אחר התקדמות סינתזה פפטיד באמצעות בדיקות קייזר או chloranil, כפי שתואר על ידי. Arora et al. 36 בדיקות אלה מספקים הערכות איכותי של נוכחות או היעדרות של אמינים חינם ראשיים ומשניים. לחלופין, כ 2-3 מ"ג פפטיד יכול להיות ביקע מן השרף, נותחו על ידי LC-MS.

5. תיול-ene Hydrothiolation ו- Cyclization תיול-yne

  1. לבנות מקשר thioether דרך cyclization--שרף (איור 3).
    1. להכין כ- 50 מ של הפתרון deprotection Trt (TFA/זה/DCM 0.03/0.06/1.0). מתייחסים Cys - ו -mS5-הנושאת שרף [NH2-R-mS5-A-A-A-Cys (Trt)-R'-שרף, 50 מ"ג] 1-2 מ של הפתרון deprotection Trt בעמודה 10-mL. בעדינות להתסיס את הפתרון עבור 10 דקות באמצעות N2. לבסוף, לשטוף אותו עם DCM (1 מ ל-2) עבור סכום כולל של 3 x.
      הערה: MS5 מייצג אבן הבניין alkylene מניבי (ראה את המבנה מתואר באיור6) המשמש פפטיד כמצמד, וגם thio-ene cyclization38.
    2. חזור על הפעולות המתוארות לעיל עבור סכום של 6 x כדי להסיר את קבוצת הגנה trityl ציסטאין, עד לצבע הפתרון הוא כבר לא צהוב.
    3. מבעבע עם N2, לשטוף את R-mS5- A-A-A-Cys(-SH)-R'-שרף [ציסטאין עם thio חינם (-SH)] עם DMF (1-2 מ"ל) ו DCM (1-2 מ"ל) לפי הסדר הזה. לכווץ את השרף באמצעות מתנול (1-2 מ"ל) למשך 2 דקות ולאחר מכן להסיר את הממס באמצעות סינון. בשלב הבא, ברצף יבש השרף תחת אדים של דלק2 N כ 5 דקות בעמודה.
    4. הכן degassed DMF מראש, בתוך בקבוקון הפה, על ידי גז חנקן מבעבע עבור 1 h דרך מחט ארוכה זה התפשט לתוך הממס.
    5. העברת השרף לתוך בקבוקון עם תחתית עגול 10-mL דרך נייר השקילה. להשעות את השרף ב 2 מיליליטר DMF degassed ואחריו התוספת של photoinitiator 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP; 1 equiv., 5.6 מ ג), 4-methoxyacetophenone (מפה; 1 equiv., 3.8 מ ג).
    6. להוסיף למהומה בר (0.3 ס מ) לתוך הבקבוק, קאפ. הבקבוק עם פקק גומי מתאימה, ואז לתפוס את האוויר הבקבוק עם גז חנקן באמצעות משאבת שמן.
      הערה: האווירה אינרטי אינה נדרשת אך ורק photoreaction thio יעיל-ene על שלב מוצק. עם זאת, זה ממש הכרחי עבור photoreaction thio-yne בשלב פתרון באיור5. אחרת, גופרית נישחק במהלך הקרנת UV.
    7. המקשטים את הבקבוקון התגובה photoreactor ומערבבים השרף עבור h 1 תחת הקרנת UV בטמפרטורת החדר (איור 2).
      התראה: לפני להדליק את מנורת UV photoreactor, ודא כי סגירת הדלת photoreactor למקרה שיש הקרנה מזיקים מן האור UV.
      הערה: לעתים קרובות הדגימה את תערובת התגובה במהלך photoreactions מומלץ רצפים חדש, כמו למבשר פפטיד ליניארי יש משקל מולקולרי זהה של המוצר. באופן כללי, פפטידים ליניארי, מחזורית להציג hydrophilicity שונה באופן משמעותי. זה יכול בקלות להבחין באמצעות HPLC. לחלופין, 5, 5' - dithiobis-(חומצה 2-nitrobenzoic) (DTNB) ריאגנט יכול לשמש גם כדי ללמוד על הימצאות תיול חינם37.
    8. העבר השרף הבקבוק לתוך העמודה ולהסיר הממס באמצעות סינון ואקום. רוחצים ומייבשים את השרף כפי שמתואר בשלב 5.1.3.
    9. להכין כ- 10 מ"ל של המחשוף קוקטייל (TFA/טיפים/EDT/H2O 94/1/2.5/2.5) בשכונה fume.
    10. להעביר את השרף לתוך מיכל פוליפרופילן 2-mL, להוסיף 1 מ"ל של פצילות קוקטייל (TFA/טיפים/EDT/H2O 94/1/2.5/2.5) אל המיכל, לסגור את המיכל בחוזקה באמצעות כובע בורג. ואז, בעדינות להתסיס את המיכל על שאכר מסלולית בקצב של 60 סל ד בשכונה fume עבור h-1.5-2.
      זהירות: TFA היא מאכל מאוד. ללבוש ביגוד מגן, ולעבוד בשכונה של fume יעיל. EDT הוא חומר מאוד מסריח, חייבים להיות מטופלים בשכונה fume יעיל.
    11. הסר את הקוקטייל TFA על ידי אידוי תחת זרם גז N2 בשכונה fume. בשלב הבא, לזרז את שאריות באמצעות דיאתיל קר (1 מ"ל) עבור 30 s ולנתק את זה באמצעות צנטריפוגה ב g x 12,000 למשך 2 דקות. בעקבות צנטריפוגה, בעדינות שופכים את הרכיב אתר. חזור על השלבים התמיסה, צנטריפוגה עבור 2 x. להתנדף השאריות ליובש.
    12. לבסוף, להמיס את השאריות 1 מ"ל H2O/acetonitrile (2:1) ולטהר מאת HPLC באמצעות עמודה אנליטית סי18 (4.6 x 250 מ מ, זרימה לדרג 1.0 mL/min). שימוש H2O (המכיל 0.1% TFA) ו acetonitrile טהור כמו ממסים 2%/min ליניארית הדרגתי מ 20% ל-70% acetonitrile מעל 25 ספקטרה HPLC צג מינימלית, באמצעות UV 280 nm ו- 220 אורכי גל nm (טבלה 2).
  2. לבנות את מקשר thioether דרך thio הבין-מולקולרי-ene התגובה, ולאחר מכן cyclize פפטיד מאת macrolactamization (איור 4).
    1. לסנתז את שאריות alkylene הנושאת את פפטיד ליניארי H2N-A-A-A-mS5(2-R ")-R'-שרף (50 מ ג) באמצעות סינתזה של פפטיד מוצק-פאזי סטנדרטי מבוסס Fmoc (SPPS) כפי שמתואר שלבים 2-4. בשלב הבא, רוחצים ומייבשים את השרף כפי שמתואר בשלב 5.1.3.
    2. להשעות את שרף 10-mL להטלטל סיבוב בקבוקון המכיל 2 מיליליטר DMF degassed כפי שמתואר בשלב 5.1.4.
    3. הוסף את photoinitiator MMP ומפת (MMP: 1 equiv., 5.6 מ ג; מפה: 1 equiv., 3.8 מ ג), Fmoc-Cys-הו (3 equiv., 25.7 mg), ומערבבים עם בר (0.3 ס מ) לתוך הבקבוק. שווי הבקבוק באמצעות פקק גומי מתאימה ולאחר מכן להשתמש את משאבת שמן כדי להחליף את האוויר הבקבוק עם חנקן.
    4. הגדר את הבקבוקון התגובה לתוך photoreactor. מערבבים במשך 1-2 h תחת הקרנת UV בטמפרטורת החדר (איור 2).
    5. לפקח על התגובה תחת ניתוח LC-MS: קליב 2-3 מ"ג של שרף באמצעות קוקטייל המחשוף. אז לזרז את השאריות עם קר דיאתיל אתר (300 µL), לבודד את השאריות על ידי צנטריפוגה ולאחר להתאדות השאריות ליובש כפי שמתואר בשלב 5.1.11. לאחר מכן, להמיס את השאריות של 100 µL של H2O/acetonitrile (2:1). Filtrate הפתרון פפטיד באמצעות סרט נקבובי 0.22-מיקרומטר ולנתח אותו באמצעות LC-MS עם המתחם מיונן ב יינון ספקטרומטריית electrospray (ESI) ומופעל במצב חיובי.
    6. אם יש צורך, חזור על שלבים 5.2.2 - 5.2.4 כדי להבטיח את התגובה מבוצעת עד לסיומו.
    7. בעקבות השלמת התמונה-התגובה, להעביר השרף הבקבוק לתוך העמודה ולאחר להסיר הממס באמצעות סינון ואקום. רוחצים ומייבשים את השרף כפי שמתואר בשלב 5.1.3.
    8. להוסיף הפתרון DMF של benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBob; 2.4 equiv., 31.2 מ ג), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt; 2.4 equiv., 8.1 מ ג), ו- NMM (4 equiv., 11 µL) שרף בעמודה עבור macrolactamization. בועה פתרון זה עם N2 כבר שעתיים.
      1. בנוסף, לפקח כזאתי צימוד באמצעות LC-MS כפי שמתואר בשלב 5.2.3. אם יש צורך, חזור על שלב זה כדי להבטיח את התגובה מבוצעת עד לסיומו.
    9. להאריך את פפטיד באמצעות SPPS מבוססי Fmoc רגיל כפי שתואר בשלבים 3 ו- 4.
    10. על הרכבה של כל שאריות חומצה אמינית, קליב את פפטיד מן השרף כפי שתואר בשלבים 5.1.10 ו 5.1.11, לטהרו כפי שמתואר בשלב 5.1.12.
  3. לבנות ויניל סולפיד מקשר בשלב פתרון (איור 5).
    1. לסנתז את שאריות אלקין הנושאת פפטיד ליניארית באמצעות SPPS מבוססי Fmoc רגיל כפי שמתואר שלבים 2-4. לסנתז את אלקין הנושאת חומצת אמינו על פי פרוטוקול ומבוססת כפי שמתואר במחקר הקודם20.
    2. קליב את פפטיד של השרף, לזרז אותו באמצעות דיאתיל אתר קר כמתואר בצעדים 5.1.9 - 5.1.11. בעקבות המחשוף משקעים של השרף, לאסוף את פפטיד באמצעות צנטריפוגה ב 12,000 x g למשך 2 דקות.
    3. יבש את שאריות הנוצרת בחלל ריק. להמיס את השאריות ב degassed DMF (50 מ"ל) בבקבוקון עם תחתית עגול 100-mL כדי להגיע ריכוז סופי של 0.5 מ מ (בהתבסס על ההעמסה של השרף, 0.025 mmol (1000 מ ל/L / 0.5 mmol/L) = 50 מ ל).
      1. מוסיפים את photoinitiator DMPA (0.5 equiv., 3.2 מ ג), ואז דגה הפתרון תגובה 10 דקות באמצעות N2 דרך מחט ארוכה הפכו את הפתרון. בשלב הבא, להאיר את הדגימה תחת אולטרא סגול בטמפרטורת החדר במשך 0.5 - 1 h בלי עצבנות...
    4. הסר את DMF תחת ואקום גבוה, לזרז את שאריות גולמי על ידי הוספת דיאתיל אתר על מנת להמיס את תוצרי לוואי אורגניים. לאחר מכן, לבודד את השאריות בעזרת צנטריפוגה ב 12,000 x g למשך 2 דקות. בעקבות צנטריפוגה, בעדינות שופכים את הרכיב אתר. להתנדף השאריות ליובש. לבסוף להמיס את השאריות של 1 מ"ל של H2O/acetonitrile (2:1), לטהרו באמצעות HPLC כפי שמתואר בשלב 5.1.7.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ספקטרום HPLC ו- MS של פפטיד של Ac-YmS5AAAC-NH2 , המוצר שלה cyclized Ac - Y-(cyclo-1.5)-[mS5AAAC] - NH2 זה נוצר באמצעות את photoreaction--שרף התפלגות תיול-ene מתוארים ב איור 6B. פפטיד מחזורית נמצאה על משקל מולקולרי זהה ביחס מבשר ליניארי שלה. עם זאת, זמן השמירה שלה HPLC נצפתה להיות כ- 2 דקות מוקדם יותר של מבשרי שלה בתנאים הפרדה זהה. פפטידים קצרים עם רצפים שונים כל נצפו יש המרה טובים, כפי שהיא מתוארת דמות 6C.

תהליך המיון עבור התנאים photoreaction thio-yne מצטיירת דמות 7 ב, איזומר ההמרה של יחס נקבעו באמצעות השילוב של הפוך-פאזי HPLC. רק מעקב רמות של פפטיד 2c נצפו בעקבות הקרנת UV. . זה ככל הנראה בגלל העדפה השמנה של thiyl רדיקלי-קצה אמיני במהלך הצעד קבלנות macrocycle אנחנו שמרנו אותו 20 הסתגלותי. פפטידים 1a והן 1b נמצאו כדי ליצור שני isomers עם crosslink גופרתי ויניל 8-חבר. פפטידים 2a-A ו- 2a-B, אשר נוצרו מפפטיד 1a, הציג פעמים השמירה ברורים, כמו גם יחס שונה עבור הקרנת UV שונה פעמים (0 - 30 דקות) (איור 7C). אלה היו להקצות את isomers E/Z בשל האותות פרוטון הקשר הכפול על ספקטרוסקופיה H-NMR 1(איור 7D). במקרה של פפטידים 2d-2f, Z-איזומר נמצאה להיות המוצר דומיננטי. זה ככל הנראה בגלל ההעדפה הסתגלותי במהלך הבנייה של מבנה קומפקטי יחסית crosslink סולפיד ויניל 8-חבר. כפי שהיא מתוארת באיור 7-אי, לפי הקשת קיווטות (CD), פפטידים 2a-A/B ו- 2b-A/B שקיימים crosslink גופרתי ויניל 8-חבר נספח סליל אקראי, בעוד פפטיד 2d שמחזיק ויניל 7-חבר של סולפיד crosslink תערוכות קונפורמציה הסליל. לסיכום, Z-איזומר ההדבקה סולפיד ויניל נמצאה להתעצב מעדיפים ויוצגו של אינדוקציה סליל טוב יותר.

Figure 1
איור 1: פפטיד ידנית-סינתזה מכשירי מעבדתי פפטיד סינתזה. העמודות הונחו על סעפת ואקום באמצעות stopcocks משולשת, המנגנון היה מחובר קו גז חנקן או ארגון עבור מבעבעים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: המכשיר photoreactor המשמש את photoreactions. המכשיר היה מצויד עם מנורות עשר 350 nm (טבלה של חומרים) הקרנת UV ו מיכל גז ארגון על מנת להבטיח photoreactor היה מלא בגז ארגון בטרם ובמהלך את photoreactions. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: התפלגות תיול-ene התגובה במקרה של פפטידים קצרים בשרף- התגובה הזו היתה ביצעו שימוש של deprotection--שרף של קבוצות trityl של ציסטאין שאריות לאחר הסינתזה מלאה של פפטיד ליניארי ולאחר מכן הגדר השרף הקרנת UV באמצעות photoinitiators את המפה ו- MMP. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4: תגובה thio הבין-מולקולרי-ene--שרף- התגובה הזו מתבצעת על ידי המסת Fmoc-Cys-OH ב הממס DMF, אז מוקרן עם השאריות אלקן מניבי פפטיד על השרף, ואחריו macrolactamization באמצעות PyBop, HoBt ו- NMM כמו ריאגנטים הפעלה. ואז המשיך הסינתזה פפטיד באמצעות SPPS רגיל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5: התפלגות תיול-yne התגובה בשלב פתרון. התגובה הזו התבצע בשלב פתרון בעקבות סינתזה מלאה של פפטיד ליניארי, לאחר מכן פפטיד ליניארי התפרקה degassed DMF וכן מוקרן באמצעות אולטרא סגול עם photoinitiator DMPA. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6: Thioether קשורה פפטידים מחזורית שנוצר באמצעות לתגובה על-שרף התפלגות תיול-ene. א. לוח זה מראה את הערכה של התגובה בשרף התפלגות thio-ene. mS5: "m" מייצג את חומצות אמינו olenic שהוחלפו מונו "S" מייצג את חומצת אמינו של S מוגדר, "5" מתייחס למספר של הצד שרשרת אטומים38. B. פאנלים זה מראה את ספקטרום HPLC ו- MS של פפטיד Ac-YmS5AAAC-NH2 לפני כן, בעקבות cyclization שלה. ג. לוח זה מציג את ההמרה של פפטידים מחזורית עם רצפים שונים. איור זה שונה מזאו, דרב ואח28 אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 7
איור 7: פפטיד הידוק באמצעות צילום-induced תיול-yne hydrothiolation. א. זה איור סכמטי של התפלגות תיול-yne hydrothiolation. B. חלונית זו מציגה את רצפי פפטיד הערכה במחקר זה. היוזם: (I) 0.5 הציוד DMPA, 1 h; (II) לא יוזם, 1 h; (III) 0.5 הציוד DMPA, 0.5 הציוד מפה, 1 h; (IV) 0.5 הציוד MMP, 0.5 ה C. לוח זה מראה את עקבות HPLC של תערובת התגובה של פפטיד 1a עם זמנים שונים של הקרנה UV ולעקוב אחר-220 ננומטר. ד. חלונית זו מציגה 1H-NMR ספקטרום של 1a, 2a-A, ו- 2a-B (נמדד דימתיל סולפוקסיד-d6-400 מגה-הרץ). הכוכביות מציינות את היווצרות חוב סולפיד ויניל כפול בעקבות הקרנת UV. E. חלונית זו מציגה קיווטות ספקטרום של פפטידים עם ויניל סולפיד חוצה קישורים. איור זה שונה מטיאן, י. ואח 44 אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

חומרים MW N(0.5mmol / g שרף × 0- 0 ג'י 5 × 5eq.) M(חומצת אמינו) (מ ג)
(Da) (mmol)
Fmoc-Gly-הו 297 0.125 37.1
Fmoc-Ala-הו 331 0.125 41.4
Fmoc-ואל-הו 339 0.125 42.4
Fmoc-Leu-הו 353 0.125 44.1
Fmoc-איל-הו 353 0.125 44.1
Fmoc-Pro-הו 337 0.125 42.1
Fmoc-Phe-הו 387 0.125 48.4
Fmoc-טיר (tBu)-הו 460 0.125 57.5
Fmoc-Trp (מפחיד)-הו 527 0.125 65.9
Fmoc-Ser (tBu)-הו 384 0.125 48
Fmoc-חמישי (tBu)-הו 398 0.125 49.8
Fmoc-Cys (Trt)-הו 586 0.125 73.3
Fmoc-פגשתי-הו 372 0.125 46.5
Fmoc-Asn (Trt)-הו 597 0.125 74.6
Fmoc-אך זה לא נגמר (Trt)-הו 611 0.125 76.4
Fmoc-Asp (OtBu)-הו 412 0.125 51.5
Fmoc-Glu (OtBu)-הו 426 0.125 53.3
Fmoc-ליס (מפחיד)-הו 469 0.125 58.6
Arg-Fmoc (Pbf)-הו 617 0.125 77.1
Fmoc-שלו (Trt)-הו 620 0.125 77.5
HCTU 414 0.122 50.5
DIPEA 129 0.25 43.5(ΜL)
DMF 0.5 mL

טבלה 1: הכמויות של התנאים צימוד.

טור Zorbax SB-Aq עמודה, 4.6 × 250 מ מ (גודל הנקבוביות 80 Å, חלקיקים בגודל 5 μm)
ממיסים ת: מים, 0.1% (vol/כרך) TFA; ב': acetonitrile
קצב הזרימה 1 mL/min
מעבר צבע 20-70% (vol/כרך) B מעל 25 דקות; 70% 98% מעל 5 דקות; 98% מעל 5 דקות;
נפח הזרקה 30 – 500 ΜL
אורך הגל (אן אם) 280 (עבור Fmoc, Trp - או המכילים Tyr פפטידים), או 494 (פפטידים התווית על-ידי FITC) או 220 (עבור אחרים)

טבלה 2: ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית תנאים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Cyclization--שרף התפלגות thio-ene המתואר באיור3, הסרת הקבוצה trityl של משקע ציסטאין נמצאו להיות צעד קריטי עבור photoreaction הבאים. בנוסף, את המשקל המולקולרי של פפטיד לפני ובעקבות שהתגובה נמצאה להיות זהה כמו מצטיירת דמות 6B. לכן, השימוש של זיהוי hplc, קורס או של DTNB assay נדרשת כדי לפקח על התגובה. במקרה של התגובה thio הבין-מולקולרי-ene המתואר באיור4, MS ניטור הוא הכרחי. בעוד צעד נוסף של צימוד לקטם נמצאה להיות הנדרשים לבנייה של רצועה בארוך thioether, אנו מציעים כי פרוטוקול זה ישמש עבור פפטידים ארוכים כדי להשיג יעילות גבוהה יותר באופן כללי.

הקשר סולפיד ויניל שנוצר על ידי photoreaction thio-yne לא היה יציב בפתרון TFA חומצי חזק המשמש למחשוף שרף. לכן, השימוש photoreaction thio-yne בשלב פתרון אומצה. התגובה הזו היתה מדולל כדי ריכוז נמוך (0.5 מ"מ) כדי להימנע פוטנציאליים הבין-מולקולרי על ידי-תגובות. זה גם חשוב באותה המידה דגה הממס כדי למנוע חמצון המוצר במהלך photoreactions. בעקבות התגובה, ואקום אידוי של הממס האורגני ש-DMF צריך גם בזהירות להתבצע כדי למנוע פפטיד חמצון/השפלה או מכונות פחת. התגובה cyclization thio-yne מתואר באיור 5 מספק מנגנון סינתזה פפטיד שלאחר השינוי35.

בזמן התגובה התפלגות תיול-ene שנוצרו בהצלחה פפטידים thioether קשורה עם ההמרה טוב, קישור thioether פשוט נכשלה להגביל את פפטידים לתוך קונפורמציה לוליינית הרצוי. בהתבסס על אסטרטגיה זו שינוי בהקשר, קונספט helicity מרכז כיראלי בהקשר פפטידי המושרה פותחה, שם γ שהוחלפו קבוצה עם התצורה R-פפטיד C-מסוף היה מסוגל לגרום קונפורמציה הסליל של פפטיד ( איור 4)39,40. המגבלה המשויך גישה זו היא הסינתזה של חומצת אמינו לא טבעי טהור enantiomerically ביותר עם שני מרכזים כיראלי (α (S), γ(R))41,42.

מחקר זה הראה כי התגובה thio-yne ניתן להגביל את פפטיד לתוך שתואם את הסליל המרה טובים, כפי שהיא מתוארת איור 7-אי. מבחינת הבנייה של פפטידים לוליינית, אנו ממליצים photoreaction thio-yne לבנייה של פפטידים הסליל. Cyclization--שרף התפלגות thio-ene הודגם למתאים לבנייה של פפטידים הקשר thioether קצר (פחות מ 15) למקרה פפטידים ארוכים גמישים מדי כדי להבטיח cyclization יעיל. בנוסף, cyclization--שרף thio הבין-מולקולרי-ene מומלצת פפטיד ארוך cyclization.

לסיכום, פיתחנו סדרה של פרוטוקולים כימי לבנייה של thioether/ויניל פפטידים סולפיד קשורה באמצעות photoinduced thio-ene/thio-yne לחץ כימיה. התגובה היא יעילה, מתכת ללא זרז, נוח מניפולציות, כבר הפגינו בעל עמידות מעולה קבוצה פונקציונלית ו ביו-אורתוגונלית. עוד יותר, שיטה זו פותחה על מנת לייצב מבנים משניים אחרים פפטיד כגון β-מכבנה43,44. מאמר זה מראה כי הכבל thioether מספק אתר שינוי traceless. זה במידה רבה מרחיב את שטח הכימית בעקבות השינוי סינתזה פפטיד. יתר על כן, פפטידים סולפיד קשורה thioether אליפטיות/ויניל הציג של רעילות ממברנה מופחת ביחס פפטידים עיקריים פחמימנים מוחלות ביישומים ביולוגיים שונים ומגוונים עם bioactivity טוב והפגינו ו הזמינות הביולוגית45,46.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים לאשר תמיכה כספית נדיבה של מדעי הטבע קרן של סין המענקים (21372023 מס, 21778009, 81701818); משרד המדע והטכנולוגיה של הרפובליקה העממית של סין (מספר 2015DFA31590); שנג'ן המדע של ועדת חדשנות טכנולוגית (מס ' JCYJ20170412150719814, JCYJ20170412150609690, JCYJ20150403101146313, JCYJ20160301111338144, JCYJ20160331115853521, JSGG20160301095829250 ו- GJHS20170310093122365); קרן המדע פוסט-דוקטורט סין (ז 2017 מס 610704).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rink Amide MBHA resin(0.53 mmol/g) HECHENG GRM50407
Standard Fmoc-protected amino acids GL Biochem (Shanghai) Ltd.
N-Methyl-2-pyrrolidinone Shenzhen endi Biotechnology Co.Ltd. 3230 skin harmful
N,N-Dimethyl formamide Energy B020051 skin harmful
Dichloromethane Energy W330229 skin harmful
N,N-Diisoproylethylamine Aldrich 9578 irritant
Trifluoroacetic acid J&K 101398 corrosive
Triisopropylsilane J&K 973821
1,2-Ethanedithiol J&K 248897 Stench
2-(6-Chloro-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate  GL Biochem (Shanghai) Ltd. 851012
Morpholine Aldrich M109062 irritant
Diethyl ether Aldrich 673811 flammable
Acetonitrile Aldrich 9758 toxicity
Methanol Aldrich 9758 toxicity
2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone Energy A050035
4-methoxyacetophenone Energy A050098
2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone Energy D070132
5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) J&K 281281
Benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate Energy E020172
1-Hydroxybenzotriazole Energy D050256
4-Methylmorpholine Energy W320038
High Performance Liquid Chromatography SHIMADZU LC-30AD
Electrospray Ionization Mass SHIMADZU LCMS-8030
Lyophilizer Labconco FreeZone
SpeedVac concentration system Thermo Savant
vacuum manifold promega A7231
three-way stopcocks Bio-Rad 7328107
poly-prep chromatography columns  Bio-Rad 7311550

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pelay-Gimeno, M., Glas, A., Koch, O., Grossmann, T. N. Structure-based design of inhibitors of protein-protein interactions: mimicking peptide binding epitopes. Angewandte Chemie International Edition. 54 (31), 8896-8927 (2015).
  2. Passioura, T., Katoh, T., Goto, Y., Suga, H. Selection-based discovery of druglike macrocyclic peptides. Annual Review of Biochemistry. 83, 727-752 (2014).
  3. Gonzalez, M. W., Kann, M. G. Protein interactions and disease. PLoS Computational Biology. 8 (12), 1-11 (2012).
  4. Wilson, A. J. Inhibition of protein-protein interactions using designed molecules. Chemical Society Reviews. 38 (12), 3289-3300 (2009).
  5. Teresa, A. F. C., Alessio, C. Cyclic and macrocyclic peptides as chemical tools to recognise protein surfaces and probe protein-protein interactions. ChemMedChem. 11 (8), 787-794 (2016).
  6. Craik, D. J., Fairlie, D. P., Liras, S., Price, D. The future of peptide-based drugs. Chemical Biology & Drug Design. 81 (1), 136-147 (2013).
  7. Cromm, P. M., Spiegel, J., Grossmann, T. N. Hydrocarbon stapled peptides as modulators of biological function. ACS Chemical Biology. 10 (6), 1362-1375 (2015).
  8. Zhang, Q. Z., Tian, Y., Lao, Y. Z., Li, Z. G. Peptides-staple method development and its application in cancer therapy. Current Medicinal Chemistry. 21 (21), 2438-2452 (2014).
  9. Cromm, P. M., Spiegel, J., Grossmann, T. N. Hydrocarbon stapled peptides as modulators of biological function. ACS Chemical Biology. 10 (6), 1362-1375 (2015).
  10. Wang, D., Liao, W., Arora, P. S. Enhanced metabolic stability and protein-binding properties of artificial alpha helices derived from a hydrogen-bond surrogate: application to Bcl-xL. Angewandte Chemie International Edition. 44 (40), 6525-6529 (2005).
  11. Bullock, B. N., Jochim, A. L., Arora, P. S. Assessing helical protein interfaces for inhibitor design. Journal of the American Chemical Society. 133, 14220-14223 (2011).
  12. Jackson, D. Y., King, D. S., Chmielewski, J., Singh, S., Schultz, P. G. General approach to the synthesis of short α-helical peptides. Journal of the American Chemical Society. 113 (24), 9391-9392 (1991).
  13. Timmerman, P., Beld, J., Puijk, W. C., Meloen, R. H. Rapid and quantitative cyclization of multiple peptide loops onto synthetic scaffolds for structural mimicry of protein surfaces. ChemBioChem. 6 (5), 821-824 (2005).
  14. Muppidi, A., Wang, Z., Li, X., Chen, J., Lin, Q. Achieving cell penetration with distance-matching cysteine cross-linkers: a facile route to cell-permeable peptide dual inhibitors of Mdm2/Mdmx. Chemical Communications. 47 (33), 9396-9398 (2011).
  15. Schafmeister, C. E., Po, J., Verdine, G. L. An all-hydrocarbon cross-linking system for enhancing the helicity and metabolic stability of peptides. Journal of the American Chemical Society. 122 (24), 5891-5892 (2000).
  16. Osapay, G., Taylor, J. W. Multicyclic polypeptide model compounds. 1. synthesis of a tricyclic amphiphilic alpha-helical peptide using an oxime resin, segment-condensation approach. Journal of the American Chemical Society. 112 (16), 6046-6051 (1990).
  17. Lau, Y. H., Andrade, dP., Wu, Y., Spring, D. R. Peptide stapling techniques based on different macrocyclisation chemistries. Chemical Society Reviews. 44 (1), 91-102 (2015).
  18. Spokoyny, A. M., Zou, Y., Ling, J. J., Yu, H., Lin, Y. S., Pentelute, B. L. A perfluoroaryl-cysteine S(N)Ar chemistry approach to unprotected peptide stapling. Journal of the American Chemical Society. 135 (16), 5946-5949 (2013).
  19. Lautrette, G., Touti, F., Lee, H. G., Dai, P., Pentelute, B. L. Nitrogen arylation for macrocyclization of unprotected peptides. Journal of the American Chemical Society. 138 (27), 8340-8343 (2016).
  20. Tian, Y., et al. Stapling of unprotected helical peptides via photoinduced intramolecular thiol-yne hydrothiolation. Chemical Science. 7 (5), 3325-3330 (2016).
  21. Chang, Y. S., et al. Stapled α-helical peptide drug development: a potent dual inhibitor of MDM2 and MDMX for p53-dependent cancer therapy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (36), 3445-3454 (2013).
  22. Zhao, H., et al. Crosslinked aspartic acids as helix-nucleating templates. Angewandte Chemie International Edition. 55 (39), 12088-12093 (2016).
  23. Leshchiner, E. S., et al. Direct inhibition of oncogenic KRAS by hydrocarbon-stapled SOS1 helices. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (6), 1761-1766 (2015).
  24. Wang, D., Qin, X., Zhao, H., Li, Z. N-cap helix nucleation: methods and their applications. Science China Chemistry. 60 (6), 689-700 (2017).
  25. Zorzi, A., Deyle, K., Heinis, C. Cyclic peptide therapeutics: past, present and future. Current Opinion in Chemical Biology. 38, 24-29 (2017).
  26. Hu, K., et al. An in-tether chiral center modulates the helicity, cell permeability, and target binding affinity of a peptide. Angewandte Chemie International Edition. 55 (28), 8013-8017 (2016).
  27. Lin, H., Jiang, Y., Zhang, Q., Hu, K., Li, Z. An in-tether sulfilimine chiral center induces helicity in short peptides. Chemical Communications. 52 (68), 10389-10391 (2016).
  28. Zhao, B., Zhang, Q., Li, Z. Constructing thioether-tethered cyclic peptides via on-resin intra-molecular thiol-ene reaction. Journal of Peptide Science. 22 (8), 540-544 (2016).
  29. Dondoni, A., Massi, A., Nanni, P., Roda, A. A new ligation strategy for peptide and protein glycosylation: photoinduced thiol-ene coupling. Chemistry. 15 (43), 11444-11449 (2009).
  30. Hu, K., Sun, C., Li, Z. Reversible and versatile on-tether modification of chiral-center-induced helical peptides. Bioconjugate Chemistry. 28 (7), 2001-2007 (2017).
  31. Shi, X., Jiang, Y., Yang, D., Zhao, H., Tian, Y., Li, Z. Reversibly switching the conformation of short peptide through in-tether chiral sulfonium auxiliary. Chinese Chemical Letters. , In Press (2017).
  32. Jiang, Y., et al. Switching substitution groups on the in-tether chiral centre influences backbone peptides' permeability and target binding affinity. Organic & Biomolecular Chemistry. 15 (3), 541-544 (2017).
  33. Aimetti, A. A., Shoemaker, R. K., Lin, C. C., Anseth, K. S. On-resin peptide macrocyclization using thiol-ene click chemistry. Chemical Communications. 46 (23), 4061-4063 (2010).
  34. Wang, Y. X., Chou, D. H. C. A thiol-ene coupling approach to native peptide stapling and macrocyclization. Angewandte Chemie International Edition. 54 (37), 10931-10934 (2015).
  35. Wang, Y., et al. Application of thiol-yne/thiol-ene reactions for peptide and protein macrocyclizations. Chemistry. 23 (29), 7087-7092 (2017).
  36. Patgiri, A., Menzenski, M. Z., Mahon, A. B., Arora, P. S. Solid-phase synthesis of short α-helices stabilized by the hydrogen bond surrogate approach. Nature Protocols. 5 (11), 1857-1865 (2010).
  37. Ozyurek, M., Baki, S., Gungor, N., Celik, S. E., Guclu, K., Apak, R. Determination of biothiols by a novel on-line HPLC-DTNB assay with post-column detection. Analytica Chimica Acta. 750, 173-181 (2012).
  38. Zhang, Q. Z., et al. Chiral sulfoxide-induced single turn peptide α-helicity. Scientific Reports. 6, 38573 (2016).
  39. Lin, H., et al. An in-tether sulfilimine chiral center induces beta-turn conformation in short peptides. Organic & Biomolecular Chemistry. 14 (42), 9993-9999 (2016).
  40. Hu, K., Li, W., Yu, M., Sun, C., Li, Z. Investigation of cellular uptakes of the in-tether chiral-center-induced helical pentapeptides. Bioconjugate Chemistry. 27 (12), 2824-2827 (2016).
  41. Hu, K., et al. A precisely positioned chiral center in an i, i + 7 tether modulates the helicity of the backbone peptide. Chemical Communications. 53 (50), 6728-6731 (2017).
  42. Li, J., et al. An in-tether chiral center modulates the proapoptotic activity of the KLA peptide. Chemical Communications. 53 (75), 10452-10455 (2017).
  43. Zhao, B., et al. A thioether-stabilized-D-proline-L-proline-induced β-hairpin peptide of defensin segment increases its anti-Candida albicans ability. ChemBioChem. 17 (15), 1416-1420 (2016).
  44. Tian, Y., Yang, D., Ye, X., Li, Z. Thioether-derived macrocycle for peptide secondary structure fixation. The Chemical Record. 17 (9), 874-885 (2017).
  45. Hu, K., Yin, F., Yu, M., Sun, C., Li, J., Liang, Y., Li, W., Xie, M., Lao, Y., Liang, W., Li, Z. G. In-tether chiral center induced helical peptide modulators target p53-MDM2/MDMX and inhibit tumor growth in stem-like cancer cell. Theranostics. 7 (18), 4566-4576 (2017).
  46. Tian, Y., Jiang, Y., Li, J., Wang, D., Zhao, H., Li, Z. Effect of stapling architecture on physiochemical properties and cell permeability of stapled α-helical peptides: a comparative study. ChemBioChem. 18 (21), 2087-2093 (2017).

Tags

כימיה גיליון 138 תגובה Thio-ene/yne צילום-induced ציסטאין thioether מייצב פפטידים לוליינית אינטראקציות חלבון-חלבון
בניית Thioether/ויניל גופרתי-קשורה Hydrothiolation תיול-ene/yne הנוצרות על-ידי פפטידים הסליל באמצעות צילום
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Shi, X., Liu, Y., Zhao, R., Li, Z.… More

Shi, X., Liu, Y., Zhao, R., Li, Z. Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation. J. Vis. Exp. (138), e57356, doi:10.3791/57356 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter