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एंजियोटेंसिन द्वितीय प्रेरित पेट महाधमनी धमनीविस्फार के माउस मॉडल में केंद्रीय शिरापरक कैथेटर द्वारा दवा उपचार और 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा निगरानी

Published: August 4, 2022 doi: 10.3791/64124
Automatic Translation
1, 1, 1, 2,3, 4, 5, 1, 1, 1
1Division of Vascular Surgery, Department of General Surgery, Medical University of Vienna and Vienna General Hospital, 2Leeds Institute for Cardiovascular and Metabolic Medicine, School of Medicine, University of Leeds, 3Leeds Vascular Institute, Leeds General Infirmary, 4Department for Visceral, Thoracic and Vascular Surgery, Technical University of Dresden and University Hospital Carl-Gustav Carus, 5Division of Cardiovascular and Interventional Radiology, Division of Molecular and Gender Imaging, Department of Biomedical Imaging and Image Guided Therapy, Medical University of Vienna and Vienna General Hospital

Summary

यह प्रोटोकॉल एपोलिपोप्रोटीन ई (एपीओई) की कमी वाले चूहों में एंजियोटेंसिन द्वितीय रिलीज द्वारा पेट महाधमनी धमनीविस्फार को प्रेरित करने के लिए एक आसमाटिक पंप के लगातार आरोपण का वर्णन करता है और बार-बार दवा उपचार के लिए एक गले की नस कैथेटर के साथ एक संवहनी पहुंच बंदरगाह का वर्णन करता है। पृष्ठीय प्रत्यारोपण के बावजूद 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा धमनीविस्फार विकास की निगरानी प्रभावी ढंग से आयोजित की जाती है।

Abstract

चूंकि उदर महाधमनी धमनीविस्फार (एएए) के नैदानिक प्रबंधन में दवा उपचार विकल्पों की कमी है, इसलिए पशु मॉडल, विशेष रूप से माउस मॉडल, रोग रोगजनन की समझ को आगे बढ़ाने और संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करने के लिए लागू होते हैं। इन मॉडलों में एएए वृद्धि को अवरुद्ध करने के लिए उपन्यास दवा उम्मीदवारों का परीक्षण आम तौर पर प्रयोग के समय के दौरान बार-बार दवा प्रशासन की आवश्यकता होती है। यहां, हम एएए प्रेरण के लिए एक संकलित प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, लंबे समय तक चिकित्सा की सुविधा के लिए एक अंतःशिरा कैथेटर का सम्मिलन, और 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा धारावाहिक एएए निगरानी। एन्यूरिज्म एपोलिपोप्रोटीन ई (एपीओई) की कमी वाले चूहों में एंजियोटेंसिन द्वितीय रिलीज द्वारा 28 दिनों में आसमाटिक मिनी-पंपों से माउस बैक में चमड़े के नीचे प्रत्यारोपित किया जाता है। इसके बाद, बाहरी गले की नस कैथीटेराइजेशन के लिए सर्जिकल प्रक्रिया एक चमड़े के नीचे संवहनी पहुंच बटन के माध्यम से दैनिक अंतःशिरा दवा उपचार या दोहराया रक्त नमूनाकरण के लिए अनुमति देने के लिए आयोजित की जाती है। दो पृष्ठीय प्रत्यारोपण के बावजूद, एएए विकास की निगरानी को अनुक्रमिक अर्ध-स्वचालित 3 डी अल्ट्रासाउंड विश्लेषण द्वारा आसानी से सुविधाजनक बनाया जाता है, जो महाधमनी व्यास और मात्रा के विस्तार और धमनीविस्फार आकृति विज्ञान पर व्यापक जानकारी देता है, जैसा कि प्रयोगात्मक उदाहरणों द्वारा सचित्र है।

Introduction

एक पेट महाधमनी धमनीविस्फार (एएए) महाधमनी की दीवार में भड़काऊ और ऊतक-विनाशकारी प्रक्रियाओं के कारण एक पोत का एक रोग फैलाव है जो अंततः टूटना और रोगी की मृत्यु का कारण बन सकता है। सर्जिकल एएए मरम्मत में काफी उपलब्धियों के बावजूद, धमनीविस्फार विस्तार की प्रगति को अवरुद्ध करने और संभावित रूप से टूटने के जोखिम को कम करने के लिए एक रूढ़िवादी दवा उपचार आज तक गायब है। रोग के ट्रिगर्स और मध्यस्थों को स्पष्ट करने और चिकित्सा के लिए उपन्यास दृष्टिकोण का परीक्षण करने के लिए पशु मॉडल विकसित किए गए हैं। एएए के माउस मॉडल व्यापक रूप से लागू होते हैं और मानव ऊतक से विभिन्न टिप्पणियों को कवर करते हैं। उनके रोगतंत्रवादी मतभेदों के कारण, अक्सर अणुओं / मार्गों के विशेष कार्य या संभावित चिकित्सीय दवाओं 1,2 की प्रभावकारिता की जांच करने के लिए एक से अधिक मॉडल लागू किए जाते हैं। एएए प्रेरण के सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले मॉडलों में एंजियोटेंसिन-द्वितीय (एंग-द्वितीय) एपोलिपोप्रोटीन ई की कमी (एपीओई केओ) चूहों3 में प्रशासन है, जिसमें मॉडल की तुलना में अधिक पुरानी तरह रोगजनन है जो महाधमनी दीवार 4,5 के तीव्र अपमान से धमनीविस्फार गठन पर भरोसा करते हैं। इस प्रकार, आंग-द्वितीय मॉडल रोग की प्रगति की निगरानी के लिए विशेष रूप से अनुकूल लगता है और हाल ही में चयापचय और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं के संबंध में मानव एएए रोग से मिलता-जुलता दिखाया गया था6. विशेष रूप से, आंग -2 मॉडल में न केवल एएए विकास बल्कि थोरैसिक एन्यूरिज्म गठन, साथ ही इंट्राम्यूरल थ्रोम्बस गठन के साथ महाधमनी विच्छेदन भी शामिल है।

रोग की दीक्षा को रोकने के बजाय पहले से स्थापित एएए की प्रगति को लक्षित करने के उद्देश्य से उपचार में उच्च अनुवाद मूल्य हो सकता है क्योंकि पहले से मौजूद स्थिति वाले रोगियों को उपचार 7,8 की आवश्यकता होती है। एक तुलनीय प्रयोगात्मक डिजाइन के लिए, रोग के विकास की दहलीज को परिभाषित करने और संभावित रूप से उपचार समूहों में चूहों को स्तरीकृत करने के लिए एएए प्रेरण से पहले और बाद में महाधमनी आकार की निगरानी की जानी चाहिए।

दवा प्रशासन का तरीका संबंधित पदार्थ के उत्थान और स्थिरता पर निर्भर करता है। इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) इंजेक्शन का उपयोग अक्सर उनके आवेदन में आसानी के कारण किया जाता है, संवेदनाहारी की आवश्यकता नहीं होती है, और इंजेक्शन वॉल्यूम बाधाओं की कमी9. हालांकि, प्रशासन का मार्ग चुनते समय फार्माकोकाइनेटिक्स पर विचार किया जाना चाहिए, क्योंकि आईपी प्रशासित पदार्थ मुख्य रूप से यकृत पोर्टल परिसंचरण के माध्यम से अवशोषित होते हैं और परिसंचरण तक पहुंचने से पहले यकृत चयापचय से गुजर सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप पहले पास प्रभाव10 के आधार पर अलग-अलग प्लाज्मा सांद्रता हो सकती है। अंतःशिरा (यानी) इंजेक्शन पदार्थों की उच्चतम जैव उपलब्धता पैदा करता है, और दोहरावदार आईवी पहुंच की चुनौती को दैनिक प्रशासन11,12,13 के लिए कैथेटर और संवहनी पहुंच बंदरगाहों के उपयोग से दरकिनार किया जा सकता है। एएए सेटिंग के संबंध में, परिसंचरण में दवा वितरण परिभाषित सांद्रता पर प्रत्यक्ष धमनीविस्फार जोखिम की सुविधा प्रदान करता है।

यहां, हम एक आसमाटिक पंप के चमड़े के नीचे के आरोपण के माध्यम से आंग -2 माउस मॉडल में एएए को प्रेरित करने के लिए एक वर्कफ़्लो का वर्णन करते हैं, बाहरी गले की नस में डाले गए कैथेटर से जुड़े संवहनी पहुंच बंदरगाह के माध्यम से दैनिक आईवी दवा उपचार के लिए, साथ ही दो पृष्ठीय प्रत्यारोपण की उपस्थिति के बावजूद 3 डी अल्ट्रासाउंड14 के माध्यम से धमनीविस्फार आकार की निगरानी के लिए।

Protocol

पशु प्रयोगों को स्थानीय नैतिकता समिति और ऑस्ट्रियाई विज्ञान मंत्रालय (बीएमडब्लूएफडब्ल्यू -66.009 / 0355-डब्ल्यूएफ / वी / 3 बी / 2016) द्वारा अनुमोदित किया गया था, जो वैज्ञानिक उद्देश्यों और ऑस्ट्रियाई पशु प्रयोग अधिनियम 2012 के लिए उपयोग किए जाने वाले जानवरों के संरक्षण पर यूरोपीय निर्देश 2010/63 / यूरोपीय संघ के अनुरूप है। मानवीय समापन बिंदु निम्नानुसार निर्धारित किए गए थे: ≥15% शरीर के वजन का नुकसान, भोजन और / या पानी के सेवन से बचना, कम गतिविधि (हाइपोकिनेसिया) या डिस्केनेसिया, या दर्द / लक्षण प्रबंधन के बावजूद लंबे समय तक मिलाते हुए, खरोंच, श्रम श्वसन, या कूबड़ मुद्रा। यदि आवश्यक हो, तो एक जानवर को गहरे संज्ञाहरण के तहत इच्छामृत्यु दी जाती है, अर्थात, केटामाइन (लगभग 100 मिलीग्राम / किग्रा) और ज़ाइलाज़िन (लगभग 5 मिलीग्राम / किग्रा), या ग्रीवा अव्यवस्था का ओवरडोज कॉकटेल। सर्जिकल प्रक्रियाओं के लिए, सड़न रोकनेवाला तकनीक और बाँझ / साफ दस्ताने का उपयोग किया जाता है।

1. पंप प्रत्यारोपण

  1. संज्ञाहरण
    1. एपीओई की कमी वाले चूहों (बी 6.129 पी 2-एपीओटीएम 1 यूएनसी / जे) को सामान्य आहार पर रखें और अधिमानतः मानव रोग में पुरुष प्रबलता का प्रतिनिधित्व करने के लिए प्रयोगों में 12-14 सप्ताह के नर जानवरों को शामिल करें।
    2. सर्जरी से 1 दिन पहले (डी -1, प्री-ओपी), निर्माता के प्रोटोकॉल के बाद माउस वजन के अनुसार एंजियोटेंसिन द्वितीय की वांछित एकाग्रता के साथ आसमाटिक पंप तैयार करें और भरें और रात भर 15 पर खारा मेंपंपों को सेते हैं।
      उदाहरण: 25 ग्राम माउस के लिए, 1000 एनजी / किग्रा / मिनट वितरण दर और 28 दिनों के लिए 0.25 μL / घंटा पंप दर के साथ आसमाटिक पंप ( सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करके, खारा के 300 μL में आंग -II के 1.8 मिलीग्राम भंग करें (आंग -II के 1500 एनजी / पंप में कुंद भरने सुई के साथ समाधान लोड करें और फिर पंप को बंद करने के लिए प्रवाह मॉडरेटर डालें।
    3. बेहोशहोने तक 2 एल / मिनट ओ 2 के साथ मिश्रित 3% -4% आइसोफ्लूरेन पर संज्ञाहरण कक्ष में माउस रखें। एक प्रवण स्थिति में एक गर्म तालिका (37 डिग्री सेल्सियस) के लिए माउस ले जाएँ और एक नाक शंकु के माध्यम से 1.8% -2% पर आइसोफ्लूरेन संज्ञाहरण बनाए रखने।
    4. ड्राईनेस से बचने के लिए दोनों आंखों पर आई लुब्रिकेंट लगाएं।
    5. माउस चमड़े के नीचे के 10 μL/g पर खारा में 2.5% ब्यूप्रेनोर्फिन के साथ माउस इंजेक्ट करें और एक पैर की अंगुली चुटकी द्वारा संज्ञाहरण की गहराई को सत्यापित करें।
    6. कंधे ब्लेड पर माउस वापस के ऊपरी बाईं ओर एक छोटे से क्षेत्र दाढ़ी। मुंडा क्षेत्र के कीटाणुशोधन के लिए 10% (डब्ल्यू / वी) पोविडोन-आयोडीन समाधान लागू करें।
  2. पंप सम्मिलन (5-7 मिनट, एक माइक्रोस्कोप के बिना प्रदर्शन किया)
    1. जांचें कि माउस पैर की अंगुली चुटकी द्वारा पूरी तरह से संवेदनाहारी है और मिडस्पाइनल और बाएं स्कैपुलर लाइन के बीच स्केलपेल के साथ ऊपरी पीठ की त्वचा में 1 सेमी ट्रांसवर्सल चीरा बनाते हैं।
    2. संदंश के साथ त्वचा को पकड़ो और बाएं हिंद अंग की ओर धक्का देकर चमड़े के नीचे जेब बनाने के लिए कुंद, घुमावदार कैंची का उपयोग करें। कैंची खोलें, खुली कैंची को कट से बाहर निकालें और जेब को चौड़ा करने के लिए दोहराएं।
    3. धीरे पूंछ की ओर प्रवाह मॉडरेटर के साथ जेब में पंप डालें (चीरा साइट द्वारा आंग -द्वितीय रिलीज के संभावित हस्तक्षेप को कम करने के लिए)।
      नोट: जेब न केवल पंप सम्मिलन के लिए पर्याप्त चौड़ी होनी चाहिए, बल्कि त्वचा को पंप के चारों ओर तंग नहीं होना चाहिए, और इष्टतम घाव भरने की अनुमति देने के लिए पंप और चीरा साइट के बीच कम से कम 5 मिमी होना चाहिए।
    4. घाव को 4-0 अवशोषित बाधित टांके के साथ बंद करें।
    5. माउस चमड़े के नीचे के 10 μL / g पर खारा में 10% ग्लूकोज के साथ माउस इंजेक्ट करें।
    6. बंद घाव पर पोविडोन-आयोडीन घाव स्प्रे लागू करें और माउस को हीटिंग लैंप के नीचे चेतना को ठीक करने की अनुमति दें, फिर इसे 7.5 मिलीग्राम पिरिट्रामाइड (विस्तारित दर्द प्रबंधन के लिए) और 20 मिलीग्राम 5% ग्लूकोज के साथ पिंजरे में वापस करें ऑपरेशन के बाद 3 दिनों के लिए 200 मिलीलीटर पीने के पानी में।
    7. दर्द या संकट के संकेतों के लिए प्रति दिन कई बार चूहों की जांच करें।
      नोट: चूंकि महाधमनी टूटना 20% -40% दर पर होता है और मुख्य रूप से ऑपरेशन के बाद पहले 3-10 दिनों के भीतर होता है, इसलिए लंबे समय तक गंभीर दर्द या संकट के जोखिम को लगातार पशु निगरानी द्वारा कम करने की आवश्यकता होती है। आसन्न टूटने के लिए मुख्य संकेतों में शामिल हैं: समूह से अलग होना, कूबड़ मुद्रा, गतिशीलता में कमी (हिंद अंग पक्षाघात की सीमा तक), और हैंडलिंग के दौरान कम या गैर-जवाबदेही।

2. गले की नस कैथीटेराइजेशन

नोट: इस शल्य चिकित्सा प्रक्रिया 8x-10x आवर्धन के साथ एक माइक्रोस्कोप की आवश्यकता है।

  1. संवहनी एक्सेस सिस्टम ( सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करके, वांछित लंबाई (सिलिकॉन एंकर से पहले ~ 5-7 मिमी) में 3 एफआर पक्ष को काटकर कैथेटर तैयार करें और कम से कम 3 मिमी ओवरलैप के साथ संवहनी पहुंच प्रणाली (वीएएस) के 22 जी धातु कनेक्टर पर कैथेटर को धक्का दें। बंदरगाह की रक्षा के लिए बटन पर एल्यूमीनियम टोपी रखें।
  2. 1-1.5 सेमी लंबा 6-0 रेशम संयुक्ताक्षर तैयार करें।
  3. बेहोशहोने तक 2 एल / मिनट ओ 2 के साथ मिश्रित 3% -4% आइसोफ्लूरेन पर संज्ञाहरण कक्ष में माउस रखें।
  4. एक लापरवाह स्थिति में एक गर्म मेज (37 डिग्री सेल्सियस) के लिए माउस ले जाएँ और एक नाक शंकु के माध्यम से 1.8% -2% पर आइसोफ्लूरेन संज्ञाहरण बनाए रखने।
  5. ड्राईनेस से बचने के लिए दोनों आंखों पर आई लुब्रिकेंट लगाएं।
  6. माउस चमड़े के नीचे के 10 μL / g पर खारा में 2.5% ब्यूप्रेनोर्फिन के साथ माउस इंजेक्ट करें।
  7. उदर की तरफ गर्दन के दाईं ओर से और ऊपरी पीठ के दाईं ओर से फर को दाढ़ी दें (बाईं ओर प्रत्यारोपित आसमाटिक पंप होगा)।
  8. मुंडा क्षेत्र के कीटाणुशोधन के लिए पोविडोन-आयोडीन समाधान लागू करें।
  9. जाँच करें कि माउस पैर की अंगुली चुटकी द्वारा पूरी तरह से संवेदनाहारी है।
  10. गले की नस की तैयारी (5-10 मिनट, माइक्रोस्कोप के तहत प्रदर्शन किया)
    1. दाहिनी हंसली पर गर्दन के दाईं ओर 0.5 सेमी ट्रांसवर्सल सुपरक्लेविकुलर त्वचा चीरा बनाएं।
    2. बाहरी जुगुलर नस को उजागर करते हुए, संयोजी ऊतक और वसा को अलग करने के लिए कुंद माइक्रोसर्जिकल चिमटी का उपयोग करें। वसा में छोटी रक्त वाहिकाओं को फाड़ने से बचें।
    3. पोत के कम से कम 5 मिमी को अलग करें, पेक्टोरल मांसपेशियों के करीब।
    4. कुंद सूक्ष्म चिमटी का उपयोग कर शिरा के नीचे ऊतक विच्छेदन और 6-0 संयुक्ताक्षर के 2-3 के माध्यम से गुजरते हैं।
      नोट: यदि ब्याज के क्षेत्र में किसी भी पक्ष शाखाओं की पहचान की जाती है, तो या तो संयुक्ताक्षर को साइड शाखा में पुच्छल होने के लिए डाला जाना चाहिए या साइड शाखा को स्थायी रूप से 6-0 संयुक्ताक्षर के साथ अलग और बांधकर लिगेट किया जाना चाहिए।
    5. संयुक्ताक्षर में टक करें और साइट पर खारा की एक बूंद जोड़ें।
  11. बटन आरोपण (5-7 मिनट, एक माइक्रोस्कोप के बिना प्रदर्शन किया)
    1. माउस पर फ्लिप और प्रवण स्थिति में यह जगह; पैर की अंगुली चुटकी द्वारा संज्ञाहरण की गहराई को सत्यापित करें और मुंडा क्षेत्र कीटाणुरहित करने के लिए पोविडोन-आयोडीन समाधान लागू करें।
    2. मिडस्पाइनल और दाएं स्कैपुलर लाइनों के बीच स्केलपेल के साथ ऊपरी पीठ पर 1 सेमी धनु चीरा बनाएं।
    3. कुंद विच्छेदन द्वारा चीरा साइट के चारों ओर वीएएस के आकार से थोड़ा बड़ा एक परिपत्र जेब बनाने के लिए कुंद घुमावदार कैंची का उपयोग करें।
    4. कुंद घुमावदार कैंची का उपयोग करें कि कैंची को थोड़ा खोलकर गर्दन पर उदर चीरा की ओर दाहिने कंधे पर सुरंग बनाने के लिए, फिर खुली कैंची को बाहर खींचें, और कार्रवाई को दोहराएं क्योंकि इसे आगे धकेल दिया जाता है।
      नोट: माउस इस चरण के लिए अपने बाईं ओर चालू किया जा सकता है।
    5. एक बार सुरंग उदर चीरा तक पहुंच जाने के बाद, उदर से पृष्ठीय चीरा तक सर्जिकल क्लैंप से गुजरती है।
    6. कैथेटर के 3 एफआर अंत को क्लैंप में संलग्न करें और सुरंग के माध्यम से कैथेटर खींचें ताकि यह उदर गर्दन चीरा से बाहर हो और वीएएस पृष्ठीय चीरा पर जगह में हो।
    7. पीठ पर चीरा पर वीएएस की सर्जिकल महसूस डिस्क चमड़े के नीचे डालें।
    8. कैथेटर को अनक्लैंप करें और कैल्शियम और मैग्नीशियम (पीबीएस-/-) के बिना खारा या फॉस्फेट-बफर खारा के साथ फ्लश करें, सुरक्षात्मक एल्यूमीनियम टोपी को हटाने के लिए हैंडलिंग टूल के कांटेदार अंत का उपयोग करके पैटेंसी की जांच करें, और फिर बटन को पकड़ने के लिए चुंबकीय अंत का उपयोग करें और संबंधित इंजेक्टर से जुड़ी 1 एमएल सिरिंज के साथ इंजेक्ट करें जब तक कि तरल 1 एफआर अंत से लीक न हो जाए।
      नोट: कैथेटर निस्तब्धता वैकल्पिक रूप से चरण 2.1 में आयोजित की जा सकती है।
    9. जेब में बटन को दबाएं और वीएएस के निकला हुआ किनारा के नीचे वीएएस की महसूस की गई डिस्क पर त्वचा को बंद करें, कम से कम दो 4-0 बाधित टांके के साथ।
      नोट: बटन के चारों ओर त्वचा पर कोई तनाव सुनिश्चित करें।
  12. नस कैथीटेराइजेशन (7-10 मिनट, माइक्रोस्कोप के तहत प्रदर्शन किया)
    1. माउस को लापरवाह स्थिति में वापस फ्लिप करें, पैर की अंगुली चुटकी द्वारा संज्ञाहरण की गहराई को सत्यापित करें, और कट साइट पर खारा की एक बूंद जोड़ें।
    2. कैथेटर के चारों ओर पहला संयुक्ताक्षर और गले की नस को 2-3 समुद्री मील के साथ बांधें जहां तक संभव हो सके नस को लिगेट करने और कैथेटर को बाहर की ओर लंगर डालने के लिए। पेक्टोरल मांसपेशियों के लिए जितना संभव हो उतना करीब दूसरे संयुक्ताक्षर को स्थानांतरित करें।
    3. कैथेटर को आवश्यक लंबाई तक छोटा करें ताकि ~ 3-5 मिमी कैथेटर एक तेज अंत बनाने के लिए एक विकर्ण कोण पर सूक्ष्म कैंची के साथ काटकर नस में हो।
    4. सुरक्षित कपाल संयुक्ताक्षर पर खींचकर और नस के समानांतर सुई को धक्का देकर खारा से भरे 1 एमएल सिरिंज से जुड़ी 27 जी सुई का उपयोग करके नस में छेद करें।
      नोट: यदि बैकफ्लो से रक्त नस से लीक होता है, तो रक्तस्राव बंद होने तक दबाव लागू करने के लिए कपास झाड़ू का उपयोग करें।
    5. सुरक्षित कपाल संयुक्ताक्षर पर खींचकर और तुला चिमटी का उपयोग करके कैथेटर को नस में फिसलने से उसी तरह नस में कैथेटर डालें। कैथेटर को तब तक दबाएं जब तक कि यह नस के साथ संरेखित न हो जाए।
    6. उस क्षेत्र पर दूसरा संयुक्ताक्षर बांधें जहां कैथेटर को 2-3 समुद्री मील के साथ नस में डाला जाता है और जांचें कि कोई रक्त रिसाव नहीं है। कैथेटर को अतिरिक्त रूप से सुरक्षित करने के लिए एक तीसरा संयुक्ताक्षर और कुछ स्थानीय वसा ऊतक का उपयोग किया जा सकता है।
    7. सूक्ष्म कैंची के साथ दोनों संयुक्ताक्षर के अतिरिक्त छोर को काट लें और खारा की एक बूंद जोड़ें।
    8. 4-0 अवशोषित बाधित टांके के साथ त्वचा को बंद करें।
    9. माउस चमड़े के नीचे के 10 μL / g पर खारा में 10% ग्लूकोज के साथ माउस इंजेक्ट करें।
    10. सुरक्षात्मक एल्यूमीनियम टोपी को हटाने के लिए हैंडलिंग टूल के कांटा अंत का उपयोग करके अवरोधक या पीबीएस / नमकीन की वांछित मात्रा के साथ माउस इंजेक्ट करें और फिर बटन को पकड़ने के लिए चुंबकीय अंत और इंजेक्टर से जुड़े 1 एमएल सिरिंज के साथ इंजेक्ट करें।
      नोट: सुनिश्चित करें कि इंजेक्शन सिरिंज में कोई हवा या हवा के बुलबुले नहीं हैं, जब तक कि इंजेक्शन लगाने से पहले तरल की एक बूंद बाहर नहीं आती है। कैथेटर टिप में रक्त खींचने और कैथेटर रुकावट पैदा करने से रोकने के लिए वीएएस से इंजेक्टर के साथ सिरिंज को डिस्कनेक्ट करते समय सवार पर सकारात्मक दबाव बनाए रखें।
    11. बंद घाव के लिए एक पोविडोन-आयोडीन घाव स्प्रे लागू करें और माउस को हीटिंग लैंप के नीचे चेतना को ठीक करने की अनुमति दें, फिर इसे 7.5 मिलीग्राम पिरिट्रामाइड (विस्तारित दर्द प्रबंधन के लिए) और 20 मिलीग्राम 5% ग्लूकोज के साथ पिंजरे में वापस करें ऑपरेशन के बाद 3 दिनों के लिए 200 मिलीलीटर पीने के पानी में।
    12. दर्द या संकट के संकेतों के लिए प्रति दिन कई बार चूहों की जांच करें।
  13. दैनिक इंजेक्शन (<5 मिनट)
    1. दैनिक इंजेक्शन के लिए, संज्ञाहरण कक्ष में माउस को 3% -4% आइसोफ्लूरेन में 2 एल /मिनट ओ 2 के साथ मिश्रित करें जब तक कि यह बेहोश न हो जाए और इसकी श्वास दर धीमी हो जाए, फिर चरण 2.12.10 के रूप में इंजेक्ट करें। इंजेक्शन के बाद सूजन के संकेतों के लिए गर्दन की जांच करें, जो इंगित करेगा कि कैथेटर अब नस में नहीं डाला जाता है। इसके अलावा, ध्यान दें कि कैथेटर को रोकदिया जाता है तो इंजेक्शन संभव नहीं होगा।
      नोट: माउस वजन 1x प्रति दिन इंजेक्शन का एक 10 μL/

3.3D अल्ट्रासाउंड

  1. अल्ट्रासाउंड इमेजिंग सिस्टम, हीटिंग टेबल और जेल वार्मर तैयार करें, ट्रांसड्यूसर को सिस्टम से संलग्न करें, और एक अनुप्रस्थ स्थिति (यानी, माउस रीढ़ के लंबवत) में मंच के ऊपर स्थापित करें।
  2. अल्ट्रासाउंड सॉफ्टवेयर का उपयोग करके, 30 डीबी, 9.0 मिमी की छवि गहराई और 8.08 मिमी की छवि चौड़ाई हासिल करने के लिए सेटिंग्स को समायोजित करें।
  3. बेहोशहोने तक 2 एल / मिनट ओ 2 के साथ मिश्रित 3% -4% आइसोफ्लूरेन पर संज्ञाहरण कक्ष में माउस रखें। लापरवाह स्थिति में एक गर्म तालिका (37 डिग्री सेल्सियस) के लिए माउस ले जाएँ और एक नाक शंकु के माध्यम से 1.8% -2% पर आइसोफ्लूरेन संज्ञाहरण बनाए रखने।
  4. ड्राईनेस से बचने के लिए दोनों आंखों पर आई लुब्रिकेंट लगाएं।
  5. माउस पेट पर फर दाढ़ी। यदि आवश्यक हो तो 1 मिनट के लिए बालों को हटाने की क्रीम लागू करें, फिर नम धुंध के साथ पोंछ और साफ करें।
  6. मंच पर चार इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी) इलेक्ट्रोड में से प्रत्येक के लिए इलेक्ट्रोड जेल की एक बूंद जोड़ें और उन्हें करने के लिए माउस छोरों टेप।
  7. माउस के पेट पर गर्म अल्ट्रासाउंड जेल फैलाएं और जानवर के संपर्क में सेट करने के लिए ट्रांसमीटर को कम करें।
  8. महाधमनी को एक गोलाकार तेज स्पंदन पोत के रूप में पहचानें।
    नोट: अवर वेना कावा (आईवीसी) महाधमनी के बगल में स्थित होगा, और यदि जांच को दृढ़ता से दबाया जाता है, तो आईवीसी को संकुचित किया जाएगा जबकि महाधमनी स्थिर रहती है। पुष्टि है कि विश्लेषण पोत आईवीसी के बजाय महाधमनी है, 65 ° के कोण के साथ पल्स वेव डॉपलर (पीडब्ल्यू-मोड) का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है। महाधमनी में एक उच्च नाड़ी तरंग वेग होगा।
  9. बाएं गुर्दे की धमनी का पता लगाएं और यह सुनिश्चित करने के लिए मैन्युअल रूप से 12 मिमी तक क्षेत्र का सर्वेक्षण करें कि ब्याज के क्षेत्र (यानी, सुपररेनल महाधमनी) में कोई हस्तक्षेप नहीं है। बाएं गुर्दे की धमनी पर लौटें, फिर बाएं गुर्दे की धमनी से 6 मिमी कपाल पर जांच सेट करें।
    नोट: 3 डी अल्ट्रासाउंड निर्दिष्ट लंबाई (यानी, 12 मिमी) को मूल बिंदु से आधे रास्ते (6 मिमी) से शुरू करेगा और निर्दिष्ट लंबाई (12 मिमी) तक कपाल रूप से रिकॉर्ड करेगा। हस्तक्षेप के लिए समस्या निवारण चरणों में ट्रांसड्यूसर के साथ थोड़ा नीचे दबाना, फिर ट्रांसड्यूसर को फिर से उठाना, अधिक अल्ट्रासाउंड जेल लागू करना और चरण के कोण को झुकाना शामिल है।
  10. 3 डी अल्ट्रासाउंड अधिग्रहण
    1. श्वसन गेटिंग को 25% देरी और 50% की खिड़की और ईसीजी ट्रिगर (टी 1) को 50 एमएस (महाधमनी के शिखर सिस्टोलिक फैलाव को रिकॉर्ड करने के लिए) पर सेट करें।
      नोट: श्वसन गेटिंग श्वसन दर और आंदोलन कलाकृतियों को हटा दिया जाता है सुनिश्चित करने के प्रयास के आधार पर प्रत्येक जानवर के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
    2. 3 डी विकल्पों से, स्कैन दूरी को 0.076 मिमी के चरण आकार के साथ 11.96 मिमी पर सेट करें, जिसके परिणामस्वरूप 157 फ्रेम होते हैं।
    3. कार्यक्रम स्वचालित रूप से लगभग 1-2 मिनट में 157 फ्रेम प्राप्त करेगा। छवि गुणवत्ता की जांच करने के लिए स्क्रॉल करें, यदि सबपर दोहराएं, तो छवि को सहेजें।
  11. 2 डी व्यास अधिग्रहण
    1. श्वसन गेटिंग और ईसीजी ट्रिगर बंद करें, और मैन्युअल रूप से सुपररेनल महाधमनी के 12 मिमी खिंचाव में सबसे बड़े व्यास वाले क्षेत्र का पता लगाएं।
    2. एक बी-मोड छविप्राप्त करें 16.
    3. इसके अतिरिक्त, ट्रांसड्यूसर को स्थानांतरित किए बिना, एक ही साइट पर सिस्टम की मानक सेटिंग्स के साथ ईसीजी-गेटेड किलोहर्ट्ज़ विज़ुअलाइज़ेशन (ईकेवी) छवि प्राप्त करें।
  12. स्कैन समाप्त करना
    1. पेट से अल्ट्रासाउंड जेल पोंछें और माउस को उसके पिंजरे में वापस लाएं। माउस की निगरानी करें जब तक कि यह पूरी तरह से ठीक न हो जाए।

4. अल्ट्रासाउंड विश्लेषण

  1. वॉल्यूम विश्लेषण
    1. विश्लेषण सॉफ़्टवेयर में, 3 डी मोड छवि खोलें, और छवि प्रसंस्करण मेनू के तहत, लोड को 3 डी में दबाएं, जो 157 2 डी फ्रेम को 3 डी छवि (यानी, घन) में संकलित करेगा।
    2. वॉल्यूम मापन मेनू में, समानांतर और घूर्णी विधियाँ चुनें, और तब सॉफ़्टवेयर 3 डी छवि को एक फलक में प्रदर्शित करेगा।
    3. वॉल्यूम के तहत, प्रारंभ दबाएँ, और पहले बिंदु को जोड़ने के लिए क्लिक करके, महाधमनी के चारों ओर कर्सर को घुमाकर, और फिर समोच्च को पूरा करने के लिए राइट-क्लिक करके महाधमनी की आंतरिक दीवार के चारों ओर पहला समोच्च खींचें।
    4. 9-10 फ्रेम (0.75-1 मिमी) छोड़ें, फिर उसी तरह से एक और समोच्च खींचें। अंतिम फ़्रेम तक पहुँचने तक इन चरणों को दोहराएँ। इसके परिणामस्वरूप 16-17 समोच्च होने चाहिए।
      नोट: पहले और अंतिम फ्रेम में 12 मिमी से अधिक की सही मात्रा की गणना करने के लिए आकृति खींची जानी चाहिए।
    5. मेनू से पहले समोच्च का चयन करें और परिष्कृत चुनें। यह पोत की दीवार पर लाइन को बारीकी से फिट करने के लिए एज डिटेक्शन एल्गोरिदम शुरू करेगा। बिंदुओं को एक नई स्थिति में खींचकर समोच्च पर ले जाएं ताकि समोच्च महाधमनी की आंतरिक दीवार किनारे को सटीक रूप से रेखांकित करे।
      नोट: आंग -2 मॉडल में, एक इंट्राम्यूरल थ्रोम्बस मौजूद हो सकता है। चूंकि यह इस मॉडल की एक सामान्य विशेषता है, इसलिए वॉल्यूम माप में थ्रोम्बस शामिल होना चाहिए।
    6. सभी समोच्चों को परिष्कृत करें और विश्लेषण को सहेजने के लिए समाप्त दबाएं । परिकलित वॉल्यूम नीचे बाएँ कोने में प्रदर्शित किया जाएगा।
  2. व्यास विश्लेषण
    नोट: व्यास माप आंतरिक-से-आंतरिक दीवार, बाहरी-से-बाहरी दीवार, या आंतरिक-से-बाहरी दीवार आयोजित किया जा सकता है लेकिन सभी मापों के लिए सुसंगत होना चाहिए। हालांकि, आंग -2 मॉडल में, एक इंट्राम्यूरल थ्रोम्बस मौजूद हो सकता है, जिसे विश्लेषण में शामिल किया जाना चाहिए।
    1. 3 डी मोड छवि से: दृश्य निरीक्षण द्वारा अधिकतम व्यास की पहचान करने के लिए 157 फ्रेम का मूल्यांकन करें। फिर, मापन मेनू से, रैखिक चुनें और सबसे बड़ा व्यास निर्धारित करने के लिए महाधमनी में कई रेखाएं खींचें।
    2. बी-मोड या ईकेवी (ईसीजी-गेटेड किलोहर्ट्ज़ विज़ुअलाइज़ेशन) छवि से: सिने लूप में, दृश्य निरीक्षण द्वारा महाधमनी (सिस्टोल पर) के अधिकतम विस्तार की पहचान करें। फिर, मापन मेनू से, रैखिक चुनें और सबसे बड़ा व्यास निर्धारित करने के लिए महाधमनी में कई रेखाएं खींचें।
      नोट: ईसीजी का उपयोग कार्डियक चक्र निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, लेकिन दृश्य पहचान सटीक परिणाम देती है।

Representative Results

प्रतिनिधि परिणाम बेसलाइन, दिन 8, और दिन 27 (चित्रा 1 ए) पर अल्ट्रासाउंड द्वारा निगरानी के रूप में सुपररेनल एन्यूरिज्म के विकास और प्रगति को दिखाते हैं। चित्रा 1 ए में दिन 27 महाधमनी का एक ट्राइक्रोम दाग (चित्रा 1 बी) आगे दीवार विच्छेदन और इंट्राम्यूरल थ्रोम्बस के साथ गठित धमनीविस्फार की आकृति विज्ञान को दर्शाता है। महाधमनी मात्रा (मिमी3) 12 मिमी14 के खिंचाव पर निर्धारित की गई थी, और अधिकतम महाधमनी व्यास को ईकेवी छवियों से भी मापा गया था। प्रारंभिक धमनीविस्फार विकास को परिभाषित करने के लिए बेसलाइन से दिन 8 तक 125% वॉल्यूम वृद्धि की सीमा निर्धारित की गई थी। 2 वर्षों (2020-2021, एन = 157) में एकत्र किए गए आंकड़ों के आधार पर, केवल 9% जानवर इस कटऑफ के अनुसार एएए बनाने में विफल रहे। हालांकि, चूहों के 35% ने 9 दिन पर कैथेटर प्रत्यारोपण से पहले महाधमनी टूटने (वक्ष या पेट) का अनुभव किया, इस प्रकार उपचार समूहों (चित्रा 1 सी) में स्तरीकरण के लिए उत्तरदायी स्थापित एएए रोग के साथ शेष जानवरों का कुल 56% जिसके परिणामस्वरूप। ध्यान दें, हमारे ऐतिहासिक पीबीएस नियंत्रण (एन = 21) के बीच, धमनीविस्फार अलग-अलग डिग्री तक विकसित हुआ (सीमा: 128% -314%, दिन 8 पर 199% ± 55% एसडी महाधमनी मात्रा वृद्धि)। महत्वपूर्ण बात यह है कि प्रारंभिक विस्तार और आगे की बीमारी की प्रगति के बीच एक व्युत्क्रम संबंध देखा गया था, अर्थात, तेजी से प्रगति करने वाले धमनीविस्फार का 55% (दिन 8 पर >200% वॉल्यूम वृद्धि) 27 दिन तक आगे नहीं बढ़ी, जबकि अन्य धमनीविस्फार का 80% (>125% और 8 दिन में <200% वॉल्यूम वृद्धि) प्रयोग के अंत तक विस्तारित होता रहा (चित्रा 1 डी)।

जैसा कि हाल ही में14,17 की सूचना दी गई है, वर्णित विधियों को सफलतापूर्वक स्थापित, मान्य और कार्यान्वित किया गया है, उदाहरण के लिए, स्थापित एएए की प्रगति को अवरुद्ध करने में हिस्टोन साइट्रुलिनेशन इनहिबिटर (जीएसके 484, न्यूट्रोफिल बाह्य कोशिकीय जाल गठन के निषेध के लिए) के चिकित्सीय प्रभाव का दस्तावेजीकरण करने के लिए। एपीओई की कमी वाले चूहों को 28 दिनों में चमड़े के नीचे प्रत्यारोपित आसमाटिक पंपों द्वारा 1000 एनजी / किग्रा / मिनट पर आंग -2 प्राप्त हुआ। जानवरों को 1: 1 से जीएसके 484 (0.2 μg / g / दिन) या पीबीएस उपचार के लिए स्तरीकृत किया गया था, जो दिन 8 पर मापा गया महाधमनी मात्रा के आधार पर था और 9 वें दिन गले की नस कैथीटेराइजेशन प्रक्रिया से गुजरा था। ड्रग इंजेक्शन अध्ययन17 के अंत तक माउस वजन के 10 μL / g की मात्रा में दैनिक आयोजित किए गए थे। चित्रा 2 अनुकरणीय (एन = 2/समूह) अल्ट्रासाउंड परिणाम (पूर्ण और सापेक्ष मात्रा या व्यास विस्तार का समय पाठ्यक्रम) दिखाता है, यह खुलासा करते हुए कि जीएसके 484 उपचार ने एएए प्रगति को बाधित किया, जबकि धमनीविस्फार नियंत्रण चूहों में बढ़ता रहा।

Figure 1
चित्रा 1: 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा पता लगाए गए आंग -2 माउस मॉडल में एएए गठन और प्रगति ( ए ) सुपररेनल महाधमनी की निगरानी बेसलाइन (बीएल), दिन 8 (डी 8), और आंग -2 पंप प्रत्यारोपण के बाद दिन 27 (डी 27) पर 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा की गई थी। वॉल्यूम को 3 डी पुनर्निर्माण छवि के आधार पर सुपररेनल महाधमनी (157 फ्रेम) के 12 मिमी खिंचाव पर मापा गया था। अधिकतम महाधमनी व्यास ईकेवी छवियों से निर्धारित किया गया था। (बी) माउस बलिदान और अंग संग्रह के बाद दिन 27 महाधमनी के एक अनुप्रस्थ अनुभाग के ट्राइक्रोम दाग। एल 2 (लुमेन 1 और लुमेन 2) द्वारा इंगित किया जाता है, और इंट्राम्यूरल थ्रोम्बस को ए और बी में * द्वारा दर्शाया जाता है। (सी) दिन 8 पर एएए (बीएल से >125% महाधमनी मात्रा वृद्धि) की घटना दर और 2 वर्षों (एन = 157) में एकत्र किए गए डेटा सेट से पहले 9 दिनों (वक्ष या पेट) के भीतर महाधमनी टूट जाती है। (डी) पीबीएस नियंत्रण-उपचारित चूहों (एन = 21) में मध्यम रूप से बढ़ने (बीएल से दिन 8 तक >200% महाधमनी मात्रा वृद्धि) बनाम मामूली रूप से बढ़ने (> 125% और बीएल से दिन 8 तक <200% महाधमनी मात्रा वृद्धि) धमनीविस्फार के दिन 8 से दिन 27 तक प्रगति आवृत्ति। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: संवहनी पहुंच बटन के माध्यम से जीएसके 484 या पीबीएस के अंतःशिरा इंजेक्शन द्वारा आंग -2 मॉडल में एएए प्रगति को अवरुद्ध करने के लिए हिस्टोन साइट्रुलिनेशन के निषेध से अनुकरणीय परिणाम। (बी) बेसलाइन (बीएल = 100%) से महाधमनी मात्रा वृद्धि की गणना की। (सी) अधिकतम महाधमनी व्यास के रूप में ईकेवी छवियों से निर्धारित किया गया है। (डी) बीएल से गणना महाधमनी व्यास वृद्धि जीएसके 484 डेटा पहले प्रकाशित अध्ययन17 से निकाले गए थे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

आंग -2 मॉडल एएए के सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले माउस मॉडल में से एक है क्योंकि इसकी कम तकनीकी मांगों और मानव रोग 3,6 जैसी विशेष विशेषताएं हैं। सर्जरी का समय प्रति जानवर लगभग 10 मिनट है, और चमड़े के नीचे पंप प्रत्यारोपण चूहों द्वारा अच्छी तरह से सहन किया जाता है यदि चमड़े के नीचे की जेब पर्याप्त रूप से चौड़ी है और चीरा साइट से दूर जानवर की पीठ पर कम रखी जाती है, ताकि घाव भरने में हस्तक्षेप न हो। जब त्वचा पंप के चारों ओर तंग होती है, तो ऊतक जलन हो सकती है, जो सूजन और स्कैबिंग का कारण बन सकती है और संभावित रूप से आसमाटिक दबाव द्वारा पंप की रिहाई के तंत्र को बाधित कर सकती है। पशु बलि के समय पंप में शेष आंग -2 की मात्रा को मापने से अंतर्दृष्टि मिलती है कि क्या आंग -2 को 28 दिनों में सफलतापूर्वक जारी किया गया था।

आंग-द्वितीय मॉडल को हाल ही में महाधमनी धमनीविस्फार और विच्छेदन प्रगति का अध्ययन करने के लिए अच्छी तरह से अनुकूल होने का प्रस्ताव दिया गया है क्योंकि यह दोनों6 की मानव विशेषताओं के साथ समानता प्रदर्शित करता है। महत्वपूर्ण बात यह है कि महाधमनी विस्तार को अवरुद्ध करने और रीमॉडेलिंग को प्रभावित करने के लिए दवा उम्मीदवारों का परीक्षण वर्तमान नैदानिक मांग से मेल खाएगा। हमारी प्रयोगात्मक सेटिंग में, एन्यूरिज्म गठन के लिए एक कटऑफ बेसलाइन के संबंध में दिन 8 पर 125% वॉल्यूम वृद्धि के आधार पर उपचार शुरू होने से पहले परिभाषित किया गया था, जो चूहों में पूर्ण महाधमनी आकार में प्राकृतिक भिन्नता के लिए जिम्मेदार है। थ्रेसहोल्ड और टाइम पॉइंट एक प्रारंभिक समय पाठ्यक्रम से प्राप्त किए गए थे जो हिस्टोलॉजी में महाधमनी दीवार विनाश की पुष्टि करता था (डेटा नहीं दिखाया गया था) और इसके परिणामस्वरूप कैथेटर प्रत्यारोपण से पहले 35% टूटना और 56% मनाया गया एएए। जबकि अध्ययन समावेश के लिए स्थापित रोग की न्यूनतम सीमा लागू की गई थी, बाद में यह देखा गया कि प्रारंभिक महाधमनी विस्तार की एक उच्च सीमा भी प्रयोगात्मक प्रयोज्यता को सीमित कर सकती है। धमनीविस्फार जो दिन 8 तक >200% मात्रा में तेजी से आगे बढ़े, 55% मामलों (चित्रा 1 डी) में उस आकार से आगे नहीं बढ़े। प्रयोगात्मक डिजाइन और नमूना आकार गणना के दौरान इसे ध्यान में रखा जाना चाहिए, क्योंकि यह उपचार के वास्तविक प्रभाव को मुखौटा कर सकता है। इस मॉडल का एक अन्य पहलू लगातार महाधमनी टूटना (वक्ष या पेट) है, जो 20% -40% की दर से होता है और ज्यादातर आंग -2 पंप प्रत्यारोपण 3,18,19 के बाद पहले 10 दिनों के भीतर होता है। इस प्रकार, उपचार की शुरुआत को 9 दिन होने के लिए चुनकर, स्थापित धमनीविस्फार की एक उच्च दर हासिल की गई थी, और जुगुलर नस कैथीटेराइजेशन अनिवार्य रूप से चूहों पर किया गया था जो प्रयोग के अंत तक जीवित रहने की उम्मीद थी (हमारे ऐतिहासिक नियंत्रण समूह में केवल 3/24 चूहों ने दिन 9 के बाद टूट गया), इस प्रकार समय, प्रयास, और लागत।

महाधमनी टूटने के अलावा, जो एक गंभीर स्थिति का गठन करते हैं, संवहनी पहुंच बटन और आसमाटिक पंप के साथ कैथेटर के समवर्ती आरोपण को चूहों द्वारा अच्छी तरह से सहन किया गया था, सर्जरी से वसूली के बाद गतिशीलता या व्यवहार पर कोई उल्लेखनीय प्रभाव नहीं था। प्रशिक्षित शोधकर्ताओं के लिए गले की नस कैथीटेराइजेशन प्रक्रिया में लगभग 30 मिनट लगने चाहिए। (आइसोफ्लूरेन) संज्ञाहरण के संपर्क की अवधि को कम से कम रखा जाना चाहिए, और श्वास अवसाद को रोकने के लिए पशु श्वास दर की बारीकी से निगरानी की जानी चाहिए, जिससे हल नहीं होने पर घातक परिणाम हो सकता है20. कैथेटर सम्मिलन के लिए गले की नस को पंचर करने के बाद रक्त की हानि - प्रमुख होने पर जानवरों की मृत्यु के लिए अग्रणी - संभावित रूप से तब हो सकती है जब गले की नस ठीक से बंधी नहीं होती है या पोत के पृथक क्षेत्र में खिलाने वाली एक साइड शाखा बंद नहीं होती है। उस स्थिति में, कपास झाड़ू के साथ दबाव पंचर साइट पर लागू किया जाना चाहिए जब तक कि रक्त रिसाव धीमा या बंद न हो जाए, फिर कैथेटर सम्मिलन और बंधाव जितनी जल्दी हो सके किया जाना चाहिए; कोलेजन घाव ड्रेसिंग का एक छोटा सा टुकड़ा अस्थायी रूप से हेमोस्टेसिस की सहायता के लिए उपयोग किया जा सकता है।

कैथेटर पेटेंसी सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से एक है, क्योंकि नस या एक्सेस बटन से कैथेटर डिस्कनेक्शन के परिणामस्वरूप अनुचित दवा वितरण होता है जहां दवा चमड़े के नीचे की जगह में लीक हो जाती है। कैथेटर और धातु कनेक्टर के बीच न्यूनतम 3 मिमी ओवरलैप की निर्माता की सिफारिश के बाद, बटन पक्ष पर कैथेटर वियोग का केवल एक मामला (बटन पर चीरा साइट से लीक होने वाले इंजेक्शन तरल द्वारा इंगित) इस मॉडल (2020-2021, एन = 73) में 3 वर्षों में दर्ज किया गया था, जिसे घाव खोलकर और सर्जरी में कनेक्शन को फिर से स्थापित करके तय किया गया था। इसके अलावा, हमारे ऐतिहासिक पीबीएस नियंत्रण समूह (2/21) में लगभग 10% की कैथेटर पैटेंसी विफलता दर या तो कैथेटर रोड़ा (इंजेक्शन लगाना असंभव बना रही है), नस से कैथेटर वियोग (इंजेक्शन के दौरान गर्दन में स्पष्ट सूजन द्वारा इंगित), या घाव भरने की जटिलताओं के कारण अनुभव किया गया था। ये मुद्दे आत्म-प्रवृत्त चोटों, यानी, माउस खरोंच या काटने से जुड़े हो सकते हैं। विशेष रूप से, घाव भरने में हस्तक्षेप करने वाले दवा उपचार विफलता दर को बढ़ा सकते हैं। पैटेंसी दर में सुधार करने के लिए समस्या निवारण चरणों में नस में डाले गए कैथेटर की लंबाई बढ़ाना, यह सुनिश्चित करना कि लिगेचर कैथेटर और नस के चारों ओर कसकर गाँठदार हैं, और निर्माता की सिफारिश के बाद सकारात्मक दबाव तकनीक को लागू करना, जैसा कि चरण 2.12.10 में वर्णित है। इसके अतिरिक्त, माइक्रोस्कोप के तहत विच्छेदन और दृश्य निरीक्षण द्वारा पशु बलि के समय कैथेटर पैटेंसी को सत्यापित किया जाना चाहिए। ध्यान दें, इंजेक्शन दवा समाधान की दैनिक मात्रा पर सावधानीपूर्वक विचार किया जाना चाहिए। चूंकि प्लाज्मा वॉल्यूम रक्तचाप को नियंत्रित करता है, इंजेक्शन की मात्रा एएए विस्तार को प्रभावित कर सकती है, और इसलिए, नियंत्रण जानवरों को वाहक मात्रा के साथ शम प्रक्रिया प्राप्त करने की आवश्यकता होती है। हमारे अनुभव (और अप्रकाशित टिप्पणियों) के आधार पर, पीबीएस के 250 μL तक की दैनिक राशि अच्छी तरह से सहन की जाती है। अंत में, पंप प्रत्यारोपण के समान, प्रत्यारोपित संवहनी पहुंच बटन के आसपास त्वचा की जलन हो सकती है। यदि विचलित या परिगलित ऊतक के साथ सूजन देखी जाती है, तो घाव अपघटन को गैर-व्यवहार्य ऊतक को हटाकर किया जाना चाहिए (नेक्रोटिक ऊतक अक्सर घाव से स्वाभाविक रूप से अलग हो जाएगा), और यदि आवश्यक हो तो त्वचा को टांका लगाया जाना चाहिए; यदि सूजन और परिगलन व्यापक हैं, तो जानवर के कल्याण और मानवीय समापन बिंदुओं को दिशानिर्देशों के अनुसार माना जाना चाहिए।

या वीएएस के एकल और दोहरे पृष्ठीय आरोपण ने अल्ट्रासाउंड सिग्नल के साथ हस्तक्षेप नहीं किया और न ही अल्ट्रासाउंड चरण पर उचित स्थिति में माउस को सुरक्षित करने के साथ। वॉल्यूम माप के लिए महाधमनी की 3 डी छवि प्रस्तुत करने के लिए 12 मिमी से अधिक 157 फ्रेम का स्वचालित अधिग्रहण एक सरल और तेज़ प्रक्रिया14 है, जिसके लिए केवल यह सुनिश्चित करने की आवश्यकता होती है कि महाधमनी ब्याज के क्षेत्र पर हस्तक्षेप से स्पष्ट है। इस संदर्भ में एक नुकसान हस्तक्षेप की छवि को साफ करने का प्रयास करते समय ट्रांसड्यूसर के साथ बहुत अधिक दबाव डाल रहा है, जो स्वचालित माप को बाधित कर सकता है यदि श्वास दर पसलियों के संपीड़न से प्रभावित होती है जब पेट महाधमनी के कपाल अंत की छवियां दर्ज की जाती हैं। व्यास पारंपरिक रूप से अल्ट्रासाउंड विश्लेषण का संचालन करते समय ऑपरेटर द्वारा मैन्युअल रूप से अधिकतम व्यास के क्षेत्र की खोज द्वारा बी-मोड का उपयोग करके अधिग्रहित छवियों में मापा जाता है। बी-मोड छवियों पर एक उन्नति ईकेवी छवियां हैं, जो स्पंदित महाधमनी की उच्च गुणवत्ता वाली, धीमी गति से छवि का उत्पादन करने के लिए छोटे महाधमनी गतियों को हल कर सकती हैं। इसके अलावा, अधिकतम महाधमनी व्यास अधिग्रहित 3 डी फ्रेम से निर्धारित किया जा सकता है, जहां 157 छवियां सिस्टोल (सेट ईसीजी ट्रिगर के कारण) में ली गई महाधमनी का व्यापक अवलोकन प्रदान करती हैं।

अंत में, प्रस्तुत संकलित प्रोटोकॉल आंग-द्वितीय प्रेरित एएए के माउस मॉडल में आईवी दवा प्रशासन के लिए और 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा महाधमनी आकार की निगरानी के लिए एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य वर्कफ़्लो प्रदान करता है। निगरानी और संचालन के समय बिंदुओं को विशिष्ट आवश्यकताओं के लिए समायोजित किया जा सकता है, और गले की नस कैथीटेराइजेशन को किसी भी प्रयोगात्मक सेटअप के लिए अलग से किया जा सकता है जिसमें आईवी इंजेक्शन के माध्यम से विशिष्ट पदार्थों के वितरण की आवश्यकता होती है। वीएएस का उपयोग वैकल्पिक रूप से बार-बार रक्त नमूने के लिए किया जा सकता है यदि थक्के को रोकने के लिए कैथेटर लॉक समाधान का उपयोग किया जाता है। वर्णित 3 डी अल्ट्रासाउंड प्रक्रिया को इन्फ्रारेनल महाधमनी को मापने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, जहां एएए के इलास्टेज या सीएसीएल 2-आधारित माउस मॉडल में तीव्र अपमान पर धमनीविस्फार विकसितहोता है। जबकि 3 डी अल्ट्रासाउंड अधिग्रहण प्रभावित महाधमनी क्षेत्र और धमनीविस्फार आकृति विज्ञान का अवलोकन देने का लाभ रखता है, छवि अधिग्रहण अधिक समय लेने वाला है और इसलिए, अधिक लागत-गहन हो सकता है। प्रोटोकॉल की एक और सीमा जिसे स्वीकार किया जाना चाहिए, जानवरों को अंतःशिरा इंजेक्शन के लिए संक्षेप में संवेदनाहारी करने की आवश्यकता है, जबकि इंट्रापेरिटोनियल प्रशासन आमतौर पर सचेत चूहों पर किया जाता है।

Disclosures

लेखकों के पास कोई खुलासा नहीं है।

Acknowledgments

हम पशु प्रयोगों में सहायता के लिए प्रोफेसर पोडेसर और प्रोफेसर एल्मियर की टीमों (बायोमेडिकल रिसर्च और कोर फैसिलिटी फॉर लेबोरेटरी एनिमल ब्रीडिंग एंड हसबैंड्री, मेडिकल यूनिवर्सिटी ऑफ वियना) को धन्यवाद देना चाहते हैं। एएए ट्राइक्रोम धुंधला कृपया मोनिका वीस और प्रोफेसर पीटर पेटज़ेलबाउर (त्वचाविज्ञान विभाग, मेडिकल यूनिवर्सिटी ऑफ वियना) द्वारा किया गया था। इस काम को ऑस्ट्रियाई विज्ञान कोष [एसएफबी परियोजना एफ 5409-बी 21] द्वारा समर्थित किया गया था। मार्क बेली व्यक्तिगत रूप से ब्रिटिश हार्ट फाउंडेशन [एफएस / 18/12/33270] द्वारा समर्थित है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
4-0 Polysorb sutures Covidien GL-46-MG Braided absorbable suture CV-23 Taper
6-0 Silk sutures Ethicon 639H PERMA-HAND Silk
ALZET 2004 osmotic pumps DURECT Corp 298 Osmotic mini pumps
Angiotensin-II Bachem 4006473.0100 Angiotensin II acetate
Aquasonic Clear Ultrasound Transmission Gel Parker Labs PUSG-0308 Ultrasound gel
Betadona Wound Spray Mundipharma Wound disinfectant spray (povidone-iodine spray)
Betaisodona Solution Mundipharma 15973 Wound disinfectant solution (povidone-iodine solution)
Catheter for mouse femoral vein/artery Instech Laboratories Inc C10PU-MFV1301 1 to 3Fr, 10.5 cm, collar @1.2 cm. Fits 22 G
Hair removal cream
Handling tool Instech Laboratories Inc VABMG Handling tool for magnetic mouse Vascular Access Buttons
HYLO NIGHT Eye Oinment URSAPHARM 538922 Eye lubricant cream
Needles and syringes of various sizes 1 mL and 5 mL syringes, 27 G and 30 G needles
Olympus SZ51 Stereo microscope Olympus Corporation Dissection and inspection microscope
PinPort injectors Instech Laboratories Inc PNP3M-50 Injector for vascular access button
Protective aluminum cap Instech Laboratories Inc VABM1C Protective aluminum cap for magnetic 1 channel mouse VAB
Signa Electrode Ultrasound Gel Parker Labs PE-1560 Electrode gel
Small electric shaver
Surigcal and microsurgical equipment
Suprasorb C Lohmann & Rauscher 20482 Collagen wound dressing
Vascular access button (VAB) Instech Laboratories Inc VABM1B/22 Vascular Access Button for mouse, magnetic, 1 channel 22 G, injector
Vevo 3100 Imaging System FUJIFILM VisualSonics Inc 51073-51 Ultrasound system
Vevo Lab 5.6.1 software FUJIFILM VisualSonics Inc Ultrasound analysis software
Vevo MX550D transducer FUJIFILM VisualSonics Inc Linear Array Transducer For Vevo 3100 system
Vevo Mouse Handling Table FUJIFILM VisualSonics Inc 11436 Mouse heating, mouse core temperature capture and ECG pads for physiological monitoring

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चिकित्सा अंक 186
एंजियोटेंसिन द्वितीय प्रेरित पेट महाधमनी धमनीविस्फार के माउस मॉडल में केंद्रीय शिरापरक कैथेटर द्वारा दवा उपचार और 3 डी अल्ट्रासाउंड द्वारा निगरानी
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Ibrahim, N., Klopf, J., Bleichert,… More

Ibrahim, N., Klopf, J., Bleichert, S., Bailey, M. A., Busch, A., Stiglbauer-Tscholakoff, A., Eilenberg, W., Neumayer, C., Brostjan, C. Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound. J. Vis. Exp. (186), e64124, doi:10.3791/64124 (2022).

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