シナプス電位のChannelrhodopsin2仲介刺激でショウジョウバエ神経筋接合部
Summary
このプロシージャは、神経筋接合部（NMJ）の光パルスでシナプス電位を惹起する青色光活性化藻類チャネルと細胞特異的遺伝子発現のツールを使用しています<em>ショウジョウバエ</em>幼虫。この手法は、安価で研究と教育研究所のシナプス生理学研究のための吸引電極の刺激に代わる使いやすいです。
Abstract
市販<em>ショウジョウバエ</em>幼虫の神経筋標本では、シナプスの生理学を研究するための有用なツールであることが実証されています<sup> 1,2,3</sup>。現在のところ、これだけの準備で興奮接合部の電位（EJPsを）呼び起こす可能なことを意味吸引電極の使用を含む。研究と教育研究所の両方で、学生はしばしば困難刺激電極のこのタイプを操縦し、操作している。本研究では、我々は、リモートで吸引電極を使用せず幼虫のNMJでのシナプス電位を刺激する方法を示します。 channelrhodopsin2（ChR2）を発現することにより<sup> 4,5,6</sup>の<em>ショウジョウバエ</em使用して>運動ニューロン<em> GAL4 – UAS</em>システム<sup> 7</sup>、および基本的な電気生理学のリグにマイナーな変更を加える、我々は、青色光のパルスでEJPsを確実に喚起することができた。この手法は、学生のリグの練習時間と資源が限られている神経生理学の教授のラボで特定の使用の可能性があります。
Protocol
Discussion
重要なステップは、筋細胞の初期の解剖と入力の両方を含む。最初の解剖中に神経が切断されたり、筋肉が損傷している場合には、実験の残りを継続することは困難である。解剖時に、1つは、背側切開中に可能な限り上方解剖ハサミを角度に非常に慎重でなければならない。筋細胞に入る第二の重要なステップ、中に、1つは、過去の過分極〜30 mVのために監視しなければなりません。 -30 mV?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、健康補助RO1GM – 33205およびLCグリフィスへMH – 067284の国民の協会によっておよびNJホーンスタインのブランダイス大学の夏学部研究奨学金によってサポートされていました。ウッズホール、マサチューセッツ州：このテクニックのための予備実験は、2008年ニューラルシステムと行動のサマーコース（R25 MH059472 NIMH助成金）の一環として、海洋生物学研究所で実施した。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
| Sylgard | Ellsworth adhesives | 4019862 | www.ellsworth.com | |
| Minutens Pins | Fine Science Tools | 26002-10 | www.finescience.com | |
| Dissecting Dish | Fisher Scientific | www.fishersci.com | ||
| Neuroprobe Intracellular Amplifier and Head Stage | A-M Systems | 680100 | www.a-msystems.com | |
| Powerlab 4/30 data acquisition system | AD instruments | www.adinstruments.com | ||
| Grass stimulator | Grass instruments | www.grasstechnologies.com | ||
| Desktop Computer | Dell | www.dell.com | ||
| Dissecting Scope | Leica | www.leica-microsystems.com | ||
| Light Source | Dolan-Jenner | 41446-062 | www.dolan-jenner.com | |
| Fly Media | ||||
| All-Trans-Retinal | Sigma-Aldrich | 116-31-4 | www.sigmaaldrich.com | |
| OK-371 Gal4 Flies | Aberle lab, Griffith lab, Bloomington stock center | |||
| UAS-ChR2 Flies | Fiala lab, Griffith lab | |||
| LED controller circuit | Built in Griffith lab | http://www.ledsupply.com http://www.futureelectronics.com Composed of: 1. 200 mA Buck Puck 2. Blue LED 3. Insulated wire 4. Circuit bread board |
||
| LED Heat Sink | Thor Labs | http://www.thorlabs.com/ | ||
| Air Table | TMC | http://www.techmfg.com/products/accessories/intro3.html | ||
| Faraday Cage | Built in Griffith lab | |||
| Leica Leitz M Micro-Manipulator | Leica Leitz | ACS01 | www.leica-microsystems.com | |
| Electrode Holder | Axon Instruments | www.axon.com | ||
| Borosilicate Glass | FHC | www.fh-co.com/p14-15.pdf | ||
| Electrode Puller | Sutter Instruments | www.sutter.com | ||
| HL 3.1 Saline with 0.8mM Ca2+ | Contents (mM): NaCl:70 KCl:5 CaCl2: 0.8 MgCl2:4Sucrose:115 NaHCO3: 10 Trehalose: 5 HEPES |
|||
| Micro-Dissection Tools | Fine Science Tools | www.finescience.com |
References
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- Ralph Greenspan, . . Fly Pushing: The Theory and Practice of Drosophila Genetics, 2nd ed. , (2004).
