Bu prosedür sinaptik potansiyeller, nöromüsküler bileşke (NMJ) ışık darbeleri ile uyandırmak için mavi bir ışık ile aktive alg kanal ve hücre spesifik genetik ifade araçları kullanır<em> Drosophila</em> Larvaları. Bu teknik, bir ucuz ve emme elektrot stimülasyon, araştırma ve eğitim laboratuvarları sinaptik fizyolojisi çalışmaları için alternatif kullanımı kolay.
Abstract
<em> Drosophila</em> Larva nöromüsküler hazırlık sinaptik fizyolojisi eğitimi için yararlı bir araç olduğu kanıtlanmıştır<sup> 1,2,3</sup>. Şu anda, sadece bu hazırlık eksitatör junctional potansiyelleri (EJPs) uyandırmak için kullanılabilir anlamına gelir emme elektrot kullanımı içerir. Hem de araştırma ve eğitim laboratuvarları, öğrencilerin sık sık bu tür uyarıcı elektrot manevra ve manipüle zorluk var. Bu çalışmada, biz emme elektrot kullanmadan uzaktan larva NMJ sinaptik potansiyeller uyarmak için nasıl göstermektedir. Channelrhodopsin2 (ChR2) ifade<sup> 4,5,6</sup><em> Drosophila</em> Motor nöronların<em> GAL4-UAS</em> Sistem<sup> 7</sup> Ve temel elektrofizyoloji donatmak için küçük bir değişiklik yaparak, mavi ışık darbeleri ile EJPs güvenilir bir şekilde uyandırmak için başardık. Bu teknik, özellikle öğrenci teçhizat uygulama zamanı ve kaynakları sınırlı nörofizyoloji öğretim laboratuvarlarında kullanımı olabilir.
Protocol
Bölüm 1: Hayvan bakım ve genetik haçlar UAS-ChR2 ve standart sinek medya içeren 8 ayrı şişelerde OK371-GAL4 sinek hattı koruyun. OK371-GAL4 sinek hatları ve UAS-ChR2 hatlar erkekler bakireler toplayın. Kadın ve erkeklerde 1 mM all-trans retina (ATR) ile karışık standart sinek medya içeren bir şişe yerleştirin. ATR gıda ~ 1 dakika için mikrodalga ilk erime düzenli sinek medya tarafından yapılmalıdır. Erimiş sonra, bir dakika 3…
Discussion
Kritik adımlar ilk diseksiyon ve kas hücrelerine girişini içerir. Ilk diseksiyon sırasında sinirler kesilir veya kas bozuksa bu deney geri kalanı devam etmek zordur. Diseksiyon sırasında, bir dorsal insizyon sırasında yukarı doğru mümkün olduğunca makas diseksiyon açısını çok dikkatli olmalıdır. Ikinci önemli adım sırasında, bir kas hücreye girerek, bir geçmişte bir hiperpolarizasyon ~ 30 mV için dikkat etmeniz gerekir. -30 MV Yukarıdaki değerler, elektrot, bir kas hücre içinde ya da s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Sağlık hibe RO1GM-33205 ve MH-067.284 LC Griffith Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından ve Brandeis Üniversitesi NJ Hornstein yaz lisans araştırma bursu tarafından desteklenmiştir. Woods Hole, MA: 2008 Sinir Sistemleri ve Davranış yaz kursu (R25 MH059472 NIMH hibe) bir parçası olarak bu tekniği için ön deneyler Deniz Biyoloji Laboratuvarı yapıldı.
Hornstein, N. J., Pulver, S. R., Griffith, L. C. Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions. J. Vis. Exp. (25), e1133, doi:10.3791/1133 (2009).