計測線虫（Caenorhabditis elegans）寿命
Summary
この記事では、UV殺菌細菌食品を固体培地上で維持線虫の寿命を測定するための一般的なプロトコルを提示する。
Abstract
老化は細胞成分と死亡率をもたらす細胞内小器官の進行性の悪化によって特徴付け変性過程です。線虫<em>線虫（Caenorhabditis elegans）</em>老化の生物学を研究するために使用される主なモデルとして登場しました。事実上すべての生物学的なサブシステムは、加齢に伴って機能低下を起こしているので老化の合計率を考慮した場合、寿命は、関心の主要エンドポイントです。線虫では、寿命は一般的に動物が外部刺激に応答残る日数として定義されます。線虫は、液体培地で、プレートの固体培地上でいずれかを伝達することができます、そしてテクニックは、両方の条件下での寿命を測定するために開発されている。ここでは、固体の線虫の増殖培地上で維持線虫の寿命を測定するための一般的なプロトコルを提示し、UV -死菌の飼料を与えた。これらの手順は、簡単に、生菌、食事制限、およびRNA干渉で構成される食事療法を含め、様々な一般的な条件下でアッセイの寿命に適合させることができます。
Protocol
パート1：準備線虫の増殖培地（NGM）プレートこのセクションでは、寿命の実験のための固体NGMプレートの準備について説明します。アンピシリン（アンプ）とNGMに追加fluorodeoxyuridine（FUDR）の両方を持っていない添加物、およびアンプ/ FUDRプレートが含まれていては標準のNGMプレート、：基本的な寿命の実験では、プレートの2つのタイプが必要です。アンピシリンは、外?…
Discussion
長寿の遺伝的制御は 、Cで広く研究されている寿命を決定することができる容易さと速さが主な原因虫 、。この記事に記載されているプロトコルは、Cの再現性の寿命のデータを取得するための基本的な枠組みを説明しエレガンスとはrelatednematodeの種にも適用できます。2は 、これらの手順は、さまざまな条件下での寿命を測定するために適合させることが?…
Acknowledgements
この作業は、老年学の賞とNIHグラントMKGSへ1R01AG031108 – 01 NIH訓練助成金P30AG013280でサポートされているのグレン/遠くブレークスルーによってサポートされていました。 MKは、高齢化のエリソン医学財団新奨学生です。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
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Cite This Article
Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media. J. Vis. Exp. (27), e1152, doi:10.3791/1152 (2009).