측정 Caenorhabditis 엘레간스 수명
Summary
이 문서에서 우리는 UV – 살해 박테리아 음식 고체 미디어에 유지 nematodes의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시한다.
Abstract
노화는 세포의 구성 요소와 사망률의 결과 organelles의 점진적 저하 특징 퇴행성 과정이다. 선충류<em> Caenorhabditis 엘레간스</em> 노화의 생물학을 연구하는 데 사용하는 주요 모델로 등장했습니다. 거의 모든 생물 학적 서브 시스템이 점점 나이가 기능 감소를 겪습 때문에 노화의 총 비율을 고려할 때, 수명은 관심의 기본 종점이다. nematodes에서, 수명은 일반적으로 동물은 외부 자극에 반응 남아있는 일수로 정의됩니다. Nematodes은 액체 매체 또는 접시에있는 고체 매체에 중 전파 될 수 있으며, 기술은 두 조건에서 수명을 측정하기 위해 개발되었습니다. 여기 고체 선충류의 성장 미디어에 유지 nematodes의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시하고 UV – 살해 박테리아의 음식을 먹이. 이러한 절차는 쉽게 사는 박테리아,식이 제한, 그리고 RNA 간섭 구성된 식단을 포함하여 다양한 일반적인 조건 하에서 분석 수명을 적용할 수 있습니다.
Protocol
1 부 : 준비 선충류의 성장 미디어 (NGM) 접시 이 섹션은 수명 실험에 사용하기 위해 고체 NGM 플레이트의 준비에 대해 설명합니다. 암피실린 (앰프)와 NGM에 추가 fluorodeoxyuridine (FUDR)를 모두 가지고 아무런 첨가제 및 앰프 / FUDR 접시를 포함하지 표준 NGM 번호판, : 기본 수명 실험은 접시 두 가지 유형이 필요합니다. 암피실린 외국 세균 오염을 방지하는 데 사용됩니다. FUDR은 세포 분…
Discussion
장수 유전자 제어 C. 광범위하게 연구되어 수명을 확인할 수있는 쉽고 인텔리로 주로 인해 엘레간스. 본 문서에서 언급한 다른 프로토콜은 C로 재현성 수명 데이터를 얻기위한 기본 프레임 워크를 설명 엘레간스하며 relatednematode 수종에도 적용할 수 있습니다. 2 이러한 절차는 다양한 조건 하에서 수명을 측정하기 위해 적응 수있는 몇 가지 간단한 변경을함으로?…
Acknowledgements
이 작품은 노인학 수상 및 NIH 그랜트 MKGS에 1R01AG031108 – 01 NIH 연수 부여 P30AG013280에서 지원하는에있는 글렌 / 멀리 획기적인 지원했다. MK는 노화에 엘리슨 의료 재단 신규 장학생입니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
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Cite This Article
Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media. J. Vis. Exp. (27), e1152, doi:10.3791/1152 (2009).