PDX腫瘍細胞の標識への導入:レンチウイルスを導入して蛍光マーカーを発現する蛍光マーカーをインビトロで腫瘍細胞に導入
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:ハンナ、C.、他.腫瘍の成長と転移研究のための追跡可能なレポーターと乳癌患者由来の異種移植片の標識.J. ヴィス・エクス .(2016).
以下のビデオは、緑色蛍光タンパク質およびルシファーゼレゼレポーターをインビトロで腫瘍細胞に発現するレンチウイルスを導入するために用いられる(患者由来異種移植)PDX腫瘍細胞に標識するトランスダクションの技術を説明する。
Protocol
PDX由来腫瘍細胞の導入 遠心分離細胞は300g x 5分で腫瘍細胞を解約し、2mlのmmosphere培地で再懸濁した。トリパンブルー排除を使用して生存細胞を数える(5ml洗浄バッファーで消化された細胞を再中断し、トリパンブルー排除を使用して生存可能な細胞と生存不可能な細胞の両方をカウントする。簡単に言えば、50 μlの細胞と50 μlのトリパンブルーを混ぜ、ヘモサイトメーターを使用して?…
Representative Results
図1:解き分けPDX細胞におけるトランスダクション効率の追跡A) PDX解キセシ細胞は、pSIH1-H1-copGFP-T2A-レンチウイルス粒子による導入後24時間のヒト上皮細胞(Lin+枯渇)に富化した。B)PDX解離細胞は、別の実験から、上皮細胞濃縮を伴わない、pHAGE-EF1aL-ルシファーゼ-UBC-GFP-Wでの導入後72時間。両方の?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| DMEM/F12 (1:1) | Hyclone | SH30023.01 | |
| bFGF | BD Biosciences | 354060 | |
| EGF | BD Biosciences | 354001 | |
| Heparin | Sigma | H4784 | |
| B27 | Gibco/Thermo Fisher | 17504-44 | |
| Anti-fungi-antibiotics | Hyclone | SV30010 | |
| HBSS Red Ca2+/Mg2+ free | Hyclone | SH30031.02 | |
| Hepes | |||
| Cultrex | Cultrex | 3433-005-01 | Basement Matrix Extract (BME) |
| 30 °C shaker | NewBrunswick Scientific CO. INC | Series 25 Incubator Shaker |
Cite This Article
Transduction to Label PDX Tumor Cells: Introducing Lentivirus Expressing Fluorescent Marker into the Tumor Cell In Vitro. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20214, doi: (2023).