استهداف المنشآت الدماغ العميق مع Microinjections لتسليم المخدرات وناقلات فيروسية ، أو زرع الخلايا
Summary
في هذه المقالة ، وتبين لنا طريقة لجعل الإبر الزجاج الشعرية مع التجويف 50 ميكرومتر. هذا الأسلوب يقلل بشكل ملحوظ من تلف في الدماغ ويقلل من انتشار السلبية للمخدرات ويسمح باستهداف دقيق في الدماغ القوارض.
Abstract
Microinjections في لحمة الدماغ هي الاجراءات الهامة لتسليم المخدرات ، وناقلات فيروسية أو زرع الخلايا. آفة الدماغ التي تنتج إبرة حقن خلال مساره هو مصدر قلق كبير خصوصا في مخ الفأر ليست فقط في الدماغ هو صغير ولكن أيضا في بعض الأحيان هناك حاجة لحقن متعددة. نعرض هنا طريقة لإنتاج الزجاج الإبر الشعرية مع التجويف 50 ميكرون مما يقلل بشكل كبير من تلف في الدماغ ويسمح لاستهداف دقيقة في الدماغ القوارض. هذا الأسلوب يسمح للتسليم كميات صغيرة (2-10 NL) ، ويقلل من مخاطر النزيف ، ويقلل من انتشار المخدرات السلبي في لحمة الدماغ. باستخدام مختلفة الحجم من أنابيب الزجاج الشعرية ، أو تغيير تجويف الإبرة ، يمكن حقنه عدة أنواع من المواد والخلايا. Microinjections مع أنبوب زجاجي الشعرية تمثل تحسنا كبيرا في تقنيات الحقن العميق للمخ واستهداف مع الحد الأدنى من الأضرار الجانبية في القوارض الصغيرة.
Protocol
Discussion
وأظهرت الأسلوب في هذا الفيديو هو مفيد جدا لتقديم معظم العقاقير أو ناقلات فيروسية في أماكن دقيقة جدا في الدماغ. بعض المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي موثوقية نقطة الاستهداف ، ودقة من الحقن وصغر حجم المخ ، والضرر الآفة المسالك 1 ، 2 ، 5 ، 6. يجب مرة واحدة موحدة هي تقني…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد OG – P بواسطة CONACYT ق منحة (CB – 2008-101476) وFRABA (686/10). AQ – H بدعم من المعهد الوطني للصحة ، ومعهد هوارد هيوز الطبي ، ومؤسسة روبرت وود جونسون ومؤسسة الخلايا الجذعية ولاية ماريلاند.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Capillary glass tube | Wiretrol I | 5-000-1001 | ||
| Micropipette puller | Kopf | Model 730 | ||
| Microforge | World Precision Instruments | Model 48000 | ||
| Mineral oil | MSDS | M7700 | ||
| High-vacuum grease | Dow Corning | 05054-AB | ||
| Anesthesia: 2.5% Avertin | 2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v | |||
| Heater pad | Mastex | Model 900 | ||
| Stereotactic device | Kopf | Model Kopf-900 | ||
| Surgical scalpel blade # 15 | Medi-Cut | |||
| Micro driller | Ideal Micro Drill | 67-1000 | ||
| Fine forceps | Fine Scientific Tools | |||
| 1-μL Micropipette | Rainin | |||
| Parafilm M. | ||||
| Surgical microscope | Zeiss | Vasiorkop with Contraves system | ||
| Microinjector | Narishige | Model MO-10 |
References
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes. Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).
- Hall, S. M. Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline. J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).
- Webster, G. R., Thompson, R. H. Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues. Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).
- Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain. Cell. 97, 1-20 (1999).
- Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells. Neuron. 36, 1021-1034 (2002).
- Baraban, S. C. Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).
- Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy. Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).
- Alvarez-Dolado, M. Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain. J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).
