Summary

Ориентация глубинных структур мозга с Микроинъекции для доставки лекарственных средств, вирусные векторы, или клеточных трансплантатов

Published: December 01, 2010
doi:

Summary

В этой статье мы покажем способ сделать стеклянный капилляр иглы с 50-мкм просвет. Этот метод значительно сокращает повреждение головного мозга, снижает пассивной диффузии лекарственных препаратов и позволяет точного прицеливания в грызун мозга.

Abstract

Микроинъекции в паренхимы мозга важны процедуры доставки лекарств, вирусных векторов или клеточных трансплантатов. Поражение головного мозга, что инъекционные иглы производит во время его траектория представляет собой серьезную проблему, особенно в мозге мыши не только мозг маленький, но также иногда многократные инъекции необходимы. Мы покажем здесь метод получения стеклянных капиллярных игл с 50-мкм просвета что значительно сокращает повреждение головного мозга и позволяет точного прицеливания в грызун мозга. Этот метод позволяет доставка небольших объемах (от 20 до 100 п), уменьшает кровотечение риски и свести к минимуму пассивной диффузии препаратов в мозг паренхимы. При использовании различных размеров капилляров стекло, или изменения просвета иглы, несколько типов веществ и клеток может быть введен. Микроинъекции со стеклянной капиллярной трубке представляют собой значительное улучшение инъекционным методикам и глубокие мозга ориентации с минимальным сопутствующим ущербом в мелких грызунов.

Protocol

Сделайте стекло иглы перед мыши хирургии: Положите капиллярной стеклянной трубки в съемник микропипетки. Тепло середине стеклянной трубки, чтобы смягчить стеклянной трубки в локализованной области. Стретч стеклянную трубку вдоль его продольной оси на начальное рассто…

Discussion

Метод показал в этом видео очень полезно для доставки большинства лекарств или вирусных векторов в очень точные места в мозгу. Некоторые из основных преимуществ этого метода являются надежность ориентации точки, точность инъекций и небольшие размеры поражения мозга и повреждение пут…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

ОГ-Р была поддержана КОНАСИТ с гранта (CB-2008-101476) и FRABA (686/10). AQ-H при поддержке Национального института здравоохранения, Медицинского института Говарда Хьюза, Роберта Вуда Джонсона Фонда и сотовый Мэриленд Стволовые Foundation.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Capillary glass tube   Wiretrol I 5-000-1001  
Micropipette puller   Kopf Model 730  
Microforge   World Precision Instruments Model 48000  
Mineral oil   MSDS M7700  
High-vacuum grease   Dow Corning 05054-AB  
Anesthesia: 2.5% Avertin       2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v
Heater pad   Mastex Model 900  
Stereotactic device   Kopf Model Kopf-900  
Surgical scalpel blade # 15   Medi-Cut    
Micro driller   Ideal Micro Drill 67-1000  
Fine forceps   Fine Scientific Tools    
1-μL Micropipette   Rainin    
Parafilm M.        
Surgical microscope   Zeiss Vasiorkop with Contraves system  
Microinjector   Narishige Model MO-10  

References

  1. Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
  2. Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes. Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).
  3. Hall, S. M. Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline. J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).
  4. Webster, G. R., Thompson, R. H. Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues. Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).
  5. Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain. Cell. 97, 1-20 (1999).
  6. Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells. Neuron. 36, 1021-1034 (2002).
  7. Baraban, S. C. Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).
  8. Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy. Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).
  9. Alvarez-Dolado, M. Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain. J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).

Play Video

Cite This Article
Gonzalez-Perez, O., Guerrero-Cazares, H., Quiñones-Hinojosa, A. Targeting of Deep Brain Structures with Microinjections for Delivery of Drugs, Viral Vectors, or Cell Transplants. J. Vis. Exp. (46), e2082, doi:10.3791/2082 (2010).

View Video