שיטה חדשה אנקפסולציה השחלות זקיק ברשת 3D הפיברין-אלגינט interpenetrating מתואר. מערכת זו משלבת תמיכה מבנית עם השפלה פרוטאוליטי כדי לתמוך בפיתוח של זקיקים בשלים לייצר ביציות בוגרות. שיטה זו עשויה להיות מיושם אגרגטים תא התרבות לשמור תאים תאים מגעים ללא הגבלת ההתרחבות.
זקיק בשחלה היא היחידה תפקודית של השחלה כי מפריש הורמוני המין ותומך הבשלת הביצית. בטכניקות זקיק במבחנה לספק כלי להתפתחות זקיק מודל כדי לחקור את הביולוגיה הבסיסית, והם עוד יותר מפותח כטכניקה לשימור פוריות מרפאה 1-4. המערכת שלנו במבחנה תרבות מעסיקה הידרוג על מנת לחקות את הסביבה השחלות יליד ידי שמירה על ארכיטקטורת הזקיקים 3D, תאים תאים אינטראקציות איתות אוטוקריני כי התפתחות זקיק ישיר 5. בעבר, היו זקיקים תרבותי בהצלחה אלגינט, פוליסכריד אינרטי אצות נגזר כי עובר gelation עם יוני סידן 6-8. הידרוג אלגינט נוצר בריכוז של 0.25% w / v היו המתירני ביותר לתרבות זקיק, ושימר את יכולת ההתפתחות הגבוהה ביותר 9. הידרוג אלגינט לא מתכלה, ובכך להגדיל את קוטר תוצאות זקיק בכוח דחיסה על זקיק אשר יכול להשפיע על הצמיחה זקיק 10. לאחר מכן אנו פיתחה מערכת המבוססת על תרבות רשת הפיברין-אלגינט interpenetrating (FA-IPN), שבה תערובת של הפיברין וכן בג'ל אלגינט הם בעת ובעונה אחת. שילוב זה מספק סביבת מכני דינמי כי שני הרכיבים לתרום קשיחות מטריצה בתחילה, אולם פרוטאזות מופרש על ידי הזקיק גדל לבזות הפיברין במטריצה עוזב אלגינט רק כדי לספק תמיכה. עם מהמכון נמסר, התוכן אלגינט יכול להיות מופחת מתחת 0.25%, דבר שאינו אפשרי עם אלגינט לבד 5. לכן, כפי הזקיק מתרחב, זה יהיה ניסיון כוח דחיסה מופחת עקב תוכן מוצקים מופחת. בזאת, אנו מתארים שיטה אנקפסולציה ומערכת במבחנה תרבות זקיקי השחלה בתוך FA-IPN. סביבת מכני דינמי מחקה את הסביבה הטבעית שבה השחלות זקיקים קטנים מתגוררים בקליפת נוקשה ולעבור לשד מתירני יותר כפי שהם גידול בגודל 11. רכיב מתכלה עשוי להיות קריטי במיוחד עבור תרגום קליניים כדי לתמוך יותר מ 10 6 פי הגידול בהיקף כי זקיקי אדם בדרך כלל עוברים in vivo.
זקיק הציגו השחלות אנקפסולציה השיטה FA-IPN מאפשר תרבות זקיק בסביבת 3D במבחנה. FA-IPN הוא דינאמי, תאים תגובה מטריצה שבו תכונות מכניות הראשוני נקבעים על ידי שילוב של הפיברין והן אלגינט. במהלך התרבות, זקיק במארז מפעיל פרוטאזות כי לבזות רק מרכיב אחד של IPN, את הפיברין, שתוצ…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו מומנה על ידי NIH (U54HD41857 ו PL1EB008542, P30 Biomaterials Core במסגרת קונסורציום Oncofertility מפת הדרכים מענק).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Fetuin | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | F3385 | ||
FBS | Invitrogen, Gibco | 10082-139 | ||
Aprotinin | Roche | 10236624001 | ||
CaCl2 | Wako | 039-00475 | 40 mM | |
EGF | Sigma | A412 | ||
rFSH | A.F. Parlow, National Hormone and Peptide Program, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases | |||
hCG | Sigma | CG-5 | ||
Hyaluronidase | Sigma | A1603 | ||
ITS | Sigma | I1884-1VL | ||
L-15 | Gibco | 11415 | ||
αMEM+Gluta MAX | Gibco | 32561 | ||
Pen-Strep | Cellgro | 30-002-CI | ||
TBS | Pierce | 28379 | ||
Tisseel Fibrin kit | Baxter | 921030 | ||
Sodium Alginate | FMC BioPolymers | LF200DL | Mw 418kDa |