3D 섬유소 – 알지네이트요 interpenetrating 네트워크에 난소 대과의 캡슐에 대한 새로운 방법을 설명합니다. 이 시스템은 성숙 oocytes을 만들어 미숙 모공의 개발을 지원하기 위해 proteolytic 저하로 구조적 지원을 결합한 제품입니다. 이 방법은 확장을 제한하지 않고 세포 세포 접촉을 유지하기 위해 문화 셀 집계에 적용될 수 있습니다.
Abstract
난소 대과는 섹스 호르몬을 secretes 난소의 기능 단위이며, oocyte의 성숙을 지원합니다. 체외의 대과 기술의 기본적인 생물을 조사하기 위해 모델 대과 개발하는 도구를 제공하고, 추가로 다산을 보존하는 기술로 발전되고있다 클리닉 1-4.우리의 체외 배양 시스템은, 세포 세포의 상호 작용 및 paracrine 신호 것을 직접 고치 개발 5 3D follicular 구조를 유지하여 기본 난소 환경을 모방하기 위해 hydrogels을 사용합니다. 이전 모공이 성공적으로 알지네이트요, 칼슘 이온 6-8로 겔화를 겪습 불활성 조류 파생 다당류에 교양되었습니다. 0.25 % W / V의 농도에서 형성된 알긴산의 hydrogels는 뿌리 문화에 가장 허용되었고, 최고의 개발 역량 9 유지. 알긴산의 hydrogels 따라서, 뿌리의 성장 10 영향을 줄 수 있습니다 뿌리 압축력에 뿌리 직경 결과에 증가 분해되지 않습니다. 우리는 이후 섬유소와 알지네이트요의 혼합물을 동시에 gelled있는 섬유소 – 알지네이트요 interpenetrating 네트워크 (FA – IPN)을 기반으로하는 문화 시스템을 개발했습니다. 두 구성 요소가 처음 매트릭스 강성에 기여하기 때문에이 조합은 역동적인 기계 환경을 제공하지만, 성장 뿌리에 의해 분비 프로 테아제 지원을 제공하기 위해서만 알지네이트요를 떠나 매트릭스의 섬유소를 저하. IPN으로 알지네이트요 내용은 혼자 5 알지네이트요 가능하지 않습니다 0.25 %, 아래 줄일 수있다. 따라서 뿌리가 확장되면, 그것은 감소 고체 내용으로 인해 감소 압축 힘을 경험하게 될 것입니다. 여기에, 우리는 캡슐화 방법 및 FA – IPN 이내에 난소의 모공에 대한의 체외 배양 시스템을 설명합니다. 동적 기계적 환경은 작은 모공이 단단한 피질에 거주하고 크기가 11 증가로 더 허용 모수로 이동하는 자연 난소 환경을 모방한 것이었 지요. 분해 구성 요소는 인간의 머리카락은 정상적으로 생체내에서 받아야 해당 볼륨에있는보다 큰 10 6 배 증가를 지원하기 위해 임상 번역에 특히 중요있을 수 있습니다.
Protocol
1. 소낭 절연 동물 실험은 노스웨스턴 대학에서 지침과 규정을 건강 가이드의 국립 연구소에 의해 규정된 실험실 동물의 관리 및 사용과 설립 기관 동물 사용 및 관리 프로토콜에 따라 수행되었다. 최적의 결과를 들어, 모든 해부는 세균 오염을 최소화하기 위해 37 °의 온도 제어를위한 C 가열 단계, 그리고 깨끗한 벤치에, CO 2의 주위 수준에서 산?…
Discussion
FA – IPN의 표시 난소 대과의 캡슐 방법은 체외에서 3D 환경에서 뿌리 문화를 수 있습니다. FA – IPN은 초기 기계적 특성이 섬유소와 알지네이트요 모두의 조합에 의해 결정하는 동적 셀 응답 매트릭스입니다. 문화 동안 캡슐 대과은 전적으로 문화의 끝에 남은 알지네이트요에 의해 공헌하는 점차 감소 젤 강성 결과 IPN의 한 구성 요소, 섬유소를 저하 프로 테아제을 활성화한다. FA – IPN로 얻은 동…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH (U54HD41857 및 PL1EB008542, Oncofertility 컨소시엄 로드맵 부여 이내 P30 Biomaterials 코어)에 의해 재정 지원되었다.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Fetuin
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO
F3385
FBS
Invitrogen, Gibco
10082-139
Aprotinin
Roche
10236624001
CaCl2
Wako
039-00475
40 mM
EGF
Sigma
A412
rFSH
A.F. Parlow, National Hormone and Peptide Program, National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases
Shikanov, A., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System. J. Vis. Exp. (49), e2695, doi:10.3791/2695 (2011).