In vivo ed ex vivo approcci per studiare il cancro ovarico metastatico colonizzazione delle strutture Lattea Spot in peritoneale adiposo
Summary
We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Abstract
Di alta qualità carcinoma ovarico sieroso (HGSC), la causa di diffuse metastasi peritoneali, continua ad avere una prognosi estremamente sfavorevole; meno del 30% delle donne sono vivi a 5 anni dopo la diagnosi. L'omento è un sito preferito HGSC formazione di metastasi. Nonostante l'importanza clinica di questo microambiente, il contributo del tessuto adiposo omentale alla progressione del cancro ovarico rimane poco studiato. Adiposo omental è insolito in quanto contiene strutture note come macchie biancastre, che sono composti da B, T e cellule NK, macrofagi e cellule progenitrici circostanti nidi dense di vascolarizzazione. Macchie biancastre giocano un ruolo chiave nelle funzioni fisiologiche del omento, che sono necessari per l'omeostasi peritoneale. Abbiamo dimostrato che macchie biancastre anche promuovere il cancro ovarico colonizzazione metastatica di adiposo peritoneale, un passo fondamentale nello sviluppo delle metastasi peritoneali. Qui si descrivono gli approcci che abbiamo sviluppato per valutare e quantificare macchie biancastre in ogniitoneal adiposo e studiare il loro contributo funzionale di cellule di cancro ovarico colonizzazione metastatica dei tessuti omentali sia in vivo ed ex vivo. Questi approcci sono generalizzabile a modelli di topo e linee cellulari aggiuntivo, permettendo così lo studio della formazione di metastasi del cancro ovarico dalla localizzazione iniziale di cellule a strutture piatte lattee allo sviluppo di metastasi peritoneali diffuse.
Introduction
A differenza di molti tumori solidi, metastasi da carcinoma ovarico sieroso ad alto grado (HGSC) si limitano alla cavità peritoneale 1. Così, efficaci terapie peritoneali potrebbero potenzialmente controllare o sradicare HGSC. Attualmente, un approccio terapeutico standard è citoriduzione chirurgica combinata con la chemioterapia 1-3. Purtroppo, la stragrande maggioranza dei pazienti esperienza e soccombono a complicanze di recidiva di malattia. Queste statistiche tristi evidenziano la necessità di una migliore comprensione della colonizzazione metastatica, il processo attraverso il quale le cellule tumorali a localizzare, utilizzare, e proliferare in tessuti dell'ospite a formare metastasi 2.
L'omento è un luogo preferito precoce di metastasi HGSC 4-7. A differenza di altri adiposo peritoneale, il tessuto adiposo omentale contiene le strutture immunitarie insolite note come macchie biancastre, che contengono B, T e cellule NK e macrofagi, che svolgono un ruolo chiave nella homeos peritonealiTASIS 8,9. Oltre alle loro funzioni fisiologiche, abbiamo scoperto che macchie biancastre svolgono un ruolo attivo nel carcinoma ovarico colonizzazione metastatica 4. Nei saggi metastasi sperimentali, SKOV3ip.1, CaOV3, e HeyA8 (umana) e ID8 (murino; C57BL / 6) cellule di cancro ovarico rapidamente a casa per macchie biancastre, suggerendo che le cellule si stanno muovendo verso un fattore chemiotattico secreto. È interessante notare che le cellule tumorali non colonizzare adiposo peritoneale privo macchie biancastre (cioè, gonadici e grasso uterina) 4.
Al fine di identificare i meccanismi che regolano la colonizzazione macchia lattiginosa, abbiamo ottimizzato i modelli di xenotrapianto che consentono l'interrogatorio di eventi cellulari e molecolari nel corso tempo della colonizzazione metastatica 4. Un vantaggio specifico degli approcci qui descritti è la sua enfasi sulla architettura tissutale e la funzione, che consente agli utenti di testare le ipotesi in completamente integrato in vivo e ex vivo modelli di metastatic 4,10 colonizzazione. Confrontando la localizzazione e la crescita delle cellule tumorali nei depositi di grasso peritoneale che o contengono o mancano di macchie biancastre, i ricercatori possono testare il contributo relativo (s) di adipociti e cellule all'interno macchie biancastre per l'alloggio e la progressiva crescita delle cellule di cancro ovarico in tessuti fisiologicamente rilevanti.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sviluppo di terapie per colpire le cellule Disseminata richiede una comprensione meccanicistica della colonizzazione metastatica, il primo passo fondamentale per lo sviluppo della malattia peritoneale. Per affrontare questi problemi riportiamo approcci che possono essere utilizzati per discernere come composizione del tessuto unico del omento e l'architettura promuovere cancro ovarico colonizzazione metastatica. Segni particolari del nostro approccio sono: 1) l'attenzione sui primi eventi del processo d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Materials
| Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
| Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
| 5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
| 26 gauge needle | BD | 329652 | |
| BSA | Sigma | A7906 | |
| Collagenase | Worthington | LS004196 | |
| Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
| Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
| Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
| Cell-Tak | BD | 354240 |
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