生体内および生体外では腹膜脂肪にミルキースポット構造の卵巣がん転移性コロニー形成を研究するためのアプローチで

Summary

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

Abstract

ハイグレード漿液性卵巣癌（HGSC）、広範な腹膜転移の原因は、非常に予後不良を持ち続けています。女性の30％未満では診断後5年生存しています。大網はHGSCの転移形成の好ましい部位です。この微小環境の臨床的重要性にもかかわらず、卵巣癌の進行への大網脂肪組織の寄与はunderstudiedまま。それは血管系の高密度の巣の周囲の乳白色B、TおよびNK細胞で構成されているスポット、マクロファージ、および前駆細胞として知られている構造が含まれているという点で、大網脂肪は珍しいです。ミルキースポットが腹膜ホメオスタシスのために必要とされる大網の生理学的機能に重要な役割を果たしています。私たちは、乳白色のスポットはまた腹膜脂肪の卵巣癌転移植民地化、腹膜転移の発生における重要なステップを促進することが示されています。ここでは、我々が当たりで乳白色スポットを評価し、定量化するために開発されたアプローチを説明itoneal脂肪およびin vivoおよびex vivoの両方大網組織の卵巣癌細胞の転移性のコロニー形成への機能的貢献を研究しています。これらのアプローチは、このように広範な腹膜転移の開発に乳白色のスポット構造への細胞の初期の局在から卵巣癌の転移形成の研究を可能にする、追加のマウスモデルおよび細胞株に一般化しています。

Introduction

ほとんどの固形腫瘍とは異なり、高品位漿液性卵巣癌（HGSC）からの転移は、腹膜腔¹に制限されています。このように、効果的な腹膜療法は、潜在的に制御またはHGSCを根絶可能性があります。現在、標準的な治療アプローチは、化学療法^1-3と組み合わせる外科的細胞減少です。残念ながら、患者の大多数は経験し、疾患再発の合併症に屈します。これらの憂鬱な統計は、転移性コロニー形成の改善された理解の必要性を示し、プロセスは、それによって癌細胞を利用する、および転移^{2を形成するために、}宿主組織内で増殖する局在化。

大網はHGSC転移^4-7の好ましい初期のサイトです。他の腹膜脂肪とは異なり、大網脂肪組織は、腹膜homeosにおいて重要な役割を果たしB、TおよびNK細胞およびマクロファージを含む乳白色のスポットとして知られる異常な免疫構造を含みますtasis ^8,9。その生理学的機能に加えて、我々は、乳白色スポットが卵巣がん、転移性植民⁴において積極的な役割を果たしていることがわかりました。実験的転移アッセイにおいて、SKOV3ip.1、CaOV3、及びHeyA8（ヒト）およびID8（マウス、C57BL / 6）迅速にホーム乳白色スポットへ卵巣癌細胞、細胞が分泌走化性因子に向かって移動していることを示唆しています。興味深いことに、癌細胞は乳白色スポット（ すなわち、生殖腺および子宮脂肪^{）4を欠く}腹膜脂肪を植民地化しません。

乳白色スポットコロニー形成を調節する機構を同定するために、我々は、転移性コロニー形成の⁴時間にわたって細胞および分子事象の尋問を可能にする異種移植片モデルを最適化しました。本明細書中に記載の方法の具体的な利点は、完全に生体内で統合されており、M の ex vivoモデルで、ユーザーが仮説をテストすることができ、組織構造と機能を重視、ですetastatic植民地化^4,10。乳白色スポットを含むか、または欠けているいずれかの腹膜脂肪デポで癌細胞の局在化と成長を比較することにより、研究者は、宿泊施設と、生理学的に関連する組織における卵巣癌細胞の進行性の成長に乳白色の斑内の脂肪細胞と細胞の相対的な寄与（複数可）をテストすることができます。

Protocol

全てのマウスは、制度動物実験委員会（IACUC）のガイドラインに、シカゴ動物資源センターの大学の監督の下で応じて、収容され維持し、安楽死させました。 実験的研究のための準備1.動物動物が輸送及び取扱いの潜在的な生理学的影響から回復するために、新しい住宅や環境に順応できるようにします。 注意：以下のような手法は、マウスのすべての市販?…

Representative Results

腹膜脂肪デポの同定と組織学的検査 総解剖学的解剖は、腹膜脂肪（ 図1A）の5つの主要な情報源の4の同定を可能にします。上部中央から時計回りに移動すると、次のとおりです。大網（OM;概説）子宮角に取り付けられて胃と脾臓の上に位置して、左卵巣を囲む生殖腺脂肪（GF）（OV）、子宮脂肪（UF）（UH）そして、腸間膜（MY）は、小腸（SI）に?…

Discussion

播種細胞を標的とする治療法の開発は、腹膜疾患の発症に重要な最初のステップは 、転移性コロニー形成のメカニズムの理解が必要です。我々は、大網の固有の組織組成とアーキテクチャは、卵巣癌、転移性コロニー形成を促進する方法を識別するために使用することができるアプローチを報告し、これらの問題に対処します。我々のアプローチの特徴的な機能は以下のとおりです。…

Materials

Dissection Tools	Fine Science Tools	NA
Geimsa	Fluka/Sigma Aldrich	48900
5% Formalin	Sigma	HT501320
DMEM	Corning	10-013-CV
Trypsin	Gibco	25200-056
PBS	Corning	21-040-CV	Without calcium and Magnesium
26 gauge needle	BD	329652
BSA	Sigma	A7906
Collagenase	Worthington	LS004196
Stomacher	Seward Labsystems	Stomacher 80 Biomaster
Microstomacher bag	Stomacher Lab Systems	BA6040/Micro
ACK Lysis Buffer	Gibco	A10492-01
Millicell culture plate insert	Millipore	PICM01250
Cell-Tak	BD	354240