Vivo ve Ex Vivo Periton yağ içinde Samanyolu Nokta Yapıların Yumurtalık Kanseri Metastatik Kolonizasyon Eğitim Yaklaşımlar içinde
Summary
We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Abstract
Yüksek dereceli seröz over kanseri (HGSC), yaygın periton metastazı nedeni, son derece kötü prognoz devam eder; Kadınların% 30'dan azının 5 yıl teşhisten sonra hayatta. Omentum HGSC metastaz oluşumunun tercih edilen bir edilir. Bu mikro-klinik önemine rağmen, yumurtalık kanseri ilerlemesine omental adipoz dokudan katkısı örüntüsü oldukça kalır. Bu damar yoğun yuvalar çevreleyen süt B, T oluşmaktadır noktalar, ve NK hücreleri, makrofajlar ve projenitör hücreleri olarak bilinen yapılar içeren, omental adipoz olağan değildir. Sütlü noktalar periton homeostazı için gerekli olan omentum fizyolojik fonksiyonları, önemli bir rol oynamaktadır. Bu süt noktalar da periton adipoz yumurtalık kanseri, metastatik kolonizasyonunu periton metastaz gelişimini önemli bir adım teşvik göstermiştir. Burada yaklaşımlar biz değerlendirmek ve başına sütlü noktalar ölçmek için geliştirilen açıklamakadipoz itoneal ve in vivo ve ex vivo hem de omental doku yumurtalık kanseri hücresi metastatik kolonizasyon işlevsel katkı çalışma. Bu yaklaşımlar, böylece yaygın periton metastazı gelişimine sütlü nokta yapılarına hücrelerin ilk lokalizasyonu yumurtalık kanseri metastazı oluşumu çalışma sağlayan, fare modelleri ve hücre hatları ek genelleştirilebilir.
Introduction
En katı tümörlerin aksine, yüksek dereceli seröz yumurtalık kanseri (HGSC) için metastazlar periton boşluğuna 1 ile sınırlıdır. Böylece, etkili periton tedaviler potansiyel kontrol etmek veya ortadan kaldırmak HGSC olabilir. Şu anda, standart bir tedavi yaklaşımı kemoterapi 1-3 ile kombine cerrahi sitoredüksiyon olduğunu. Ne yazık ki, hastaların büyük çoğunluğu deneyim ve hastalığın tekrarlama komplikasyonlara yenik. Bu kasvetli istatistikler metastatik kolonizasyon geliştirilmiş anlayış ihtiyacını göstermek, süreç hangi kanser hücreleri, kullanmak ve metastaz 2 oluşturmak için konak dokuları içinde çoğalmaya lokalize.
Omentum metastazı HGSC 4-7 tercih edilen erken bir sitedir. Diğer periton adipoz aksine, omentum yağ dokusu, periton homeos kilit rol oynayan B, T ve NK hücreleri ve makrofajlar bulunur sütlü noktalar, olarak bilinen sıradışı bağışıklık yapıları içeriyortasis 8,9. Fizyolojik fonksiyonlara ek olarak, süt noktalar, yumurtalık kanseri, metastatik kolonizasyon 4 aktif bir rol oynadığı bulunmuştur. Hızlı ana süt noktalar yumurtalık kanser hücreleri, salgılanan bir kemotaktik faktör doğru hareket ettiğini göstermektedir; deneysel metastaz tahlilleri, SKOV3ip.1, CaOV3 ve HeyA8 (insan) ve ID8 (C57BL / 6 fare) kullanılmaktadır. İlginçtir, kanser hücreleri sütlü noktalar (yani, gonad ve rahim yağ) 4 eksik periton adipoz kolonize yok.
Sütlü nokta kolonizasyonu düzenleyen mekanizmaları belirlemek amacıyla, biz metastatik kolonizasyon 4 süresi boyunca hücresel ve moleküler olayların sorgulama sağlayan ksenogref modellerini optimize ettik. Bu tarifnamede tarif edilen yaklaşımların özel bir avantajı, tam olarak, in vivo olarak entegre edilmiştir ve m ex vivo modeller kullanıcıların hipotezleri test sağlayan doku mimarisi ve işlevi üzerinde vurgulamasıdıretastatic kolonizasyon 4,10. Içeren veya sütlü noktalar eksikliği ya periton yağ depolarında kanser hücre lokalizasyonu ve büyümeyi karşılaştırarak, araştırmacılar arasında ve fizyolojik ilgili dokularda yumurtalık kanseri hücrelerinin ilerleyici büyüme için sütlü noktalar içinde adipositlerde ve hücrelerin göreceli katkısını (ler) test edebilirsiniz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Development of therapies to target disseminated cells requires a mechanistic understanding of metastatic colonization, the critical first step in the development of peritoneal disease. To address these issues we report approaches that can be used to discern how the omentum’s unique tissue composition and architecture promote ovarian cancer metastatic colonization. Distinguishing features of our approach are: 1) the focus on early events in the colonization process; 2) comparison of milky spot-containing an…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Materials
| Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
| Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
| 5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
| 26 gauge needle | BD | 329652 | |
| BSA | Sigma | A7906 | |
| Collagenase | Worthington | LS004196 | |
| Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
| Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
| Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
| Cell-Tak | BD | 354240 |
References
- Bast, R. C., Hennessy, B., Mills, G. B. The biology of ovarian cancer: new opportunities for translation. Nature Reviews Cancer. 9 (6), 415-428 (2009).
- Bowtell, D. D. L. The genesis and evolution of high-grade serous ovarian cancer. Nature Reviews Cancer. 10 (11), 803-808 (2010).
- Colgan, T. J., Chang, M. C. Chapter 18 Familial Cancer and Prophylactic Surgery. Diagnostic Pathology of Ovarian Tumors. , 277-288 (2011).
- Clark, R., et al. Milky Spots Promote Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Peritoneal Adipose in Experimental Models. The American Journal of Pathology. 183 (2), 576-591 (2013).
- Platell, C., Cooper, D., Papadimitriou, J. M., Hall, J. C. The omentum. World Journal Of Gastroenterology: WJG. 6 (2), 169-176 (2000).
- Hagiwara, A., et al. Milky spots as the implantation site for malignant cells in peritoneal dissemination in mice. 癌症研究. 53 (3), 687-692 (1993).
- Gerber, S. A., et al. Preferential Attachment of Peritoneal Tumor Metastases to Omental Immune Aggregates and Possible Role of a Unique Vascular Microenvironment in Metastatic Survival and Growth. The American Journal of Pathology. 169 (5), 1739-1752 (2010).
- Liebermann-Meffert, D. The greater omentum. Anatomy, embryology, and surgical applications. The Surgical Clinics of North America. 80 (1), 275-293 (2000).
- Collins, D., Hogan, A. M., O’Shea, D., Winter, D. C. The Omentum: Anatomical, Metabolic, and Surgical Aspects. Journal of Gastrointestinal Surgery. 13 (6), 1138-1146 (2009).
- Khan, S. M., et al. In vitro metastatic colonization of human ovarian cancer cells to the omentum. Clinical, & Experimental Metastasis. 27 (3), 185-196 (2010).
- Shimizu, S., Hans, H. Routes of Administration. The Laboratory Mouse. , 527-542 (2004).
- Vang, R., Shih, I. -. M., Kurman, R. J. Fallopian tube precursors of ovarian low- and high-grade serous neoplasms. Histopathology. 62 (1), 44-58 (2012).
- Folkins, A. K., Jarboe, E. A., Roh, M. H., Crum, C. P. Precursors to pelvic serous carcinoma and their clinical implications. Gynecologic Oncology. 113 (3), 391-396 (2009).
- Li, J., Fadare, O., Xiang, L., Kong, B., Zheng, W. Ovarian serous carcinoma: recent concepts on its origin and carcinogenesis. Journal of Hematology, & Oncology. 5 (1), 8 (2012).
- Kurman, R. J., Shih, I. -. M. The origin and pathogenesis of epithelial ovarian cancer: a proposed unifying theory. The American Journal Of Surgical Pathology. 34 (3), 433-443 (2010).
- Crum, C. P., et al. The distal fallopian tube: a new model for pelvic serous carcinogenesis. Current Opinion In Obstetrics, & Gynecology. 19 (1), 3-9 (2007).
- Crum, C. P., et al. Lessons from BRCA: The Tubal Fimbria Emerges as an Origin for Pelvic Serous Cancer. Clinical Medicine, & Research. 5 (1), 35-44 (2007).
- Foulkes, W. D., Narod, S. A. Ovarian cancer risk and family history. The Lancet. 349, 878 (1997).
- Antoniou, A., et al. Average Risks of Breast and Ovarian Cancer Associated with BRCA1 or BRCA2 Mutations Detected in Case Series Unselected for Family History: A Combined Analysis of 22 Studies. The American Journal of Human Genetics. 72 (5), 1117-1130 (2003).
- King, M. -. C., Marks, J. H., Mandell, J. B. New York Breast Cancer Study Group Breast and ovarian cancer risks due to inherited mutations in BRCA1 and BRCA2. Science. 302 (5645), 643-646 (2003).
- Kjær Krüger, S., Gayther, S. Ovarian cancer and genetic susceptibility in relation to the BRCA1 and BRCA2 genes. Occurrence, clinical importance and intervention. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 85 (1), 93-105 (2006).
- Easton, D. F., Ford, D., Bishop, D. T. Breast and ovarian cancer incidence in BRCA1-mutation carriers. Breast Cancer Linkage Consortium. American Journal of Human Genetics. 56 (1), 265-271 (1995).
- Rebbeck, T. R., et al. Prophylactic Oophorectomy in Carriers of BRCA1or BRCA2Mutations. New England Journal of Medicine. 346 (21), 1616-1622 (2002).
- Olivier, R. I., et al. Clinical outcome of prophylactic oophorectomy in BRCA1/BRCA2 mutation carriers and events during follow-up. British Journal Of Cancer. 90 (8), 1492-1497 (2004).
