생체 내 및 생체 외 복막 지방이에 밀키 스팟 구조의 난소 암 전이성 식민지를 연구하는 접근 방식
Summary
We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Abstract
고급 장 액성 난소 암 (HGSC)는 광범위한 복막 전이의 원인은 매우 불량한 예후를 계속; 여성의 적은 수의 30 % 이상 5 년 진단 후 생존. 그물막은 HGSC 전이 형성의 바람직한 위치이다. 이 미세 환경의 임상 적 중요성에도 불구하고, 난소 암의 진행에 대망 지방 조직의 기여도는 파악 하였다 남아있다. 이 혈관의 밀도가 둥지를 둘러싼 우유, B, T 구성되어 관광 명소, 그리고 NK 세포, 대 식세포 및 전구 세포로 알려진 구조를 포함한다는 점에서 대망 지방은 이례적인 일이다. 밀키 명소 복막 항상성에 필요한 대망의 생리적 기능에 중요한 역할을한다. 우리는 우유 반점도 복막 지방의 난소 암 전이성 식민지, 복막 전이의 개발에 중요한 단계를 촉진하는 것으로 나타났습니다. 여기에서 우리는 접근 방식은 우리가 평가하고 당에 우유 명소를 정량화하기 위해 개발 된 기술지방을 itoneal 및 생체 내 및 생체 외 모두 대망 조직의 난소 암 세포 전이 식민지에 자신의 기능 기여를 공부합니다. 따라서 이러한 접근법은 광범위한 복막 전이 개발 밀키 스폿 구조로 세포의 초기 위치 파악에서 난소 암 전이 형성의 연구를 가능하게 마우스 모델 세포주를 추가로 일반화된다.
Introduction
대부분의 고형 종양과는 달리, 고급 장 액성 난소 암 (HGSC)에서 전이는 복강 1로 제한됩니다. 따라서, 효과적인 복막 치료는 잠재적으로 제어하거나 HGSC을 근절 할 수있다. 현재, 표준 치료 방법은 화학 요법 1-3 결합 외과 cytoreduction이다. 불행하게도, 환자의 대부분은 경험과 질병 재발의 합병증에 굴복. 이러한 실력 통계 전이성 콜로니의 이해를 향상에 대한 요구를 표시, 처리되는 암세포는 활용하고, (2) 전이를 형성하는 호스트 조직 내 증식 지역화.
대망는 HGSC 전이 4-7의 바람직한 초기 사이트입니다. 다른 복막 지방 달리, 장간막 지방 조직은 복막 homeos있는 중요한 역할을하는 B, T 및 NK 세포 및 대식 세포를 포함하는 유백색의 반점으로 알려진 특이한 면역 구조를 포함TASIS 8,9. 자신의 생리적 기능에 더하여, 우리는 우유 빛 반점이 난소 암 전이 식민 4에 적극적인 역할을한다는 것을 발견했다. 빠르게 홈 우유 명소 난소 암 세포, 세포가 분비 화성 인자쪽으로 이동하는 것을 제안, 실험 전이 분석, SKOV3ip.1, CaOV3 및 HeyA8 (인간)과 ID8 (C57BL / 6 쥐)에서. 흥미롭게도, 암 세포는 우유 반점 (즉, 성선 및 자궁 지방) 4 부족 복막 지방을 식민지화하지 않습니다.
유백색 스폿 정착 조절 메커니즘을 파악하기 위해, 우리는 전이성 콜로니 4 시간 과정을 통해 세포 및 분자 사건의 심문을 가능 이종 이식 모델을 최적화하고있다. 여기에 기술 된 방법의 구체적인 장점은 완전히 생체 내에서 통합 및 m의 생체 모델에서 사용자가 가설을 테스트 할 수 있습니다 조직의 구조와 기능에 대한 강조이다etastatic 식민지 4,10. 포함 또는 유백색 스폿 부족하거나 복막 지방 저장소에 암세포 지역화 및 성장을 비교함으로써, 연구자들은 숙박과 생리 관련 조직의 난소 암 세포의 점진적인 성장 밀키 스폿 내의 지방 세포와 세포의 상대적 기여도 (들)을 시험 할 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
파종 세포를 표적으로하는 치료법의 개발은 전이성 식민지의 기계론의 이해, 복막 질환의 개발에 중요한 첫 번째 단계가 필요합니다. 우리가 대망의 독특한 조직 조성 및 구조는 난소 암, 전이성 콜로니를 촉진하는 방법을 식별하는 데 사용할 수있는 방법을보고하는 이러한 문제를 해결하기. 우리의 접근 방식의 구별 기능은 다음과 같습니다 식민지화 과정에서 초기 이벤트 1) 초점; 우유 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Materials
| Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
| Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
| 5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
| 26 gauge needle | BD | 329652 | |
| BSA | Sigma | A7906 | |
| Collagenase | Worthington | LS004196 | |
| Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
| Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
| Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
| Cell-Tak | BD | 354240 |
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