切削とフローティング区分のための組織のパラフィン包埋法
Summary
ここでは、パラフィン切片を改善するためのプロトコルを提案する.このメソッドは、切断と従来の方法に必要な転送処理を避けるために簡単な恒温室を使用して浮動小数点を兼ね備えています。その結果、そのままパラフィン切片数と効率が大幅に向上。
Abstract
組織学や病理学のパラフィン包埋組織の断面が使用されています。ただし、それは面倒です。この方法を改善するためにいくつかの民間企業は、液体の水を使用して複雑な部分転送システムを考案しています。この技術を簡素化し、我々 はカットとシンプルな恒温室; 内フローティングを組み合わせた自家製の機器を使用して単純なメソッドを作成したがって、セクションは自動的に水表面における水の風呂を入力します。アダルト ゼブラフィッシュ目マウス萌芽期の脳、成体マウス腎臓成体マウス脳海馬は、比較のため従来のパラフィン切片と提案手法の両方を使用して切られました。統計分析は、我々 の改良法時間を保存したし、高い品質のセクションを示しています。さらに、短時間で全体の標本のパラフィン切片ジュニア演算子の簡単です。
Introduction
形態学的研究は、生物学の研究が重要です。新技術は、全体の組織または生物1,2,3、薄い部分に試料を切断から直接彼らの目標は続いて染色を観察する研究者を許可しているが、プライマリのまま法者は唯一組織形態も組織に直接ターゲット蛋白質。光学顕微鏡を使用して、3 つのセクション タイプ: パラフィン、冷凍、およびグリコールメタクリル。セクショニングは共通組織抗原性を保護するため、試料の準備は簡単です、保有組織形態が悪いと薄い断面4,5には不向き。パラフィン切片は、保存状態の良い形態を展示するため最もよく使用される方法です。標本は完全に脱水し、ワックスに埋め込まれた、パラフィン ブロックに無期限に格納できます。また、パラフィン切片さらに実験の生物学的プローブ アクセスを改善し、Z 方向に細胞層オーバーレイを削減する薄いセクションを生成します。
しかし、従来のパラフィン切片がかかり、オペレーターのスキルを要求します。パラフィン切片を固定、脱水、埋め込み、切り取り、およびフローティング受けます。重要なは、風呂の水にナイフ ホルダーからセクション リボンを転送するは、ジュニアのオペレーターのためには必要なは難しいです。乾いた空気で特にセクション リボン静電気によるねじれが、暖かい水面に展開しにくい。セクションを改善するために品質、氷の水でそれらを浸すことまたはミクロトーム近く加湿器で湿度を上げるワックス ブロックを冷却のミクロトーム刃パス間公開される組織表面を潤し、6、7をお勧めします.ハイブリッド パラフィン包埋、セクショニング8、および商業部門転送システム支援9パラフィン切片を改善するための新しいメソッドが含まれます。これらのメソッドは、部分的にパラフィンを向上させる彼らははるかに厄介な断面を作る、商務部搬送システムは高価なセクショニング速度と品質。
このプロトコルでは、簡単、安価で柔軟な装置ステップバイ ステップ、回転式ミクロトームのナイフ ホルダーに接続することができますを作成する方法を示します。この装置は、温度検出スイッチ付きのヒーター、水風呂セクション チャネルで構成されます。切断した後、セクションの数十はセクション チャネルに流れるし、風呂の水、直接このように自動的に展開を入力します。これはパラフィン切片の効率が向上し、この技術をより便利になります。このメソッドよりアダルト マウス海馬セクション、成体マウス腎臓セクション、胚 15.5 日齢 (E15.5) マウスの脳のセクション、およびセクションを短い時間で収穫し、形態学的によりそのまま残った大人ゼブラフィッシュ眼を使用します。このメソッドは、加速されたパラフィン セクション区別の喪失を回避しながら断面を必要とする他の組織サンプルの使用もできます。
Protocol
Representative Results
Discussion
パラフィン セクション形態を改善し、従来のパラフィン切片中の無駄な時間の問題を解決するには、改良されたパラフィン切片作製法切削と展開を組み合わせたを作成しました。この改良法は、セクション チャネル、水浴と温度検出スイッチとヒーターで構成されるシンプルな機器に依存します。セクション リボン セクション チャネルを介して水の風呂に入るし、自動的に切削しながら?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は中国の国家自然科学基金 (許可番号 31400936、31460260) によって支えられた、自然科学財団の江西省の中国 (20171BAB215020)。我々 はまた、この作業を支援する南昌大学とクイーン クイーンメアリー、ロンドン大学との共同プログラムを感謝します。
Materials
| Incubator | Boekel Scientific | 133000-2 | |
| Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 64-17-5 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 1330-20-7 | |
| Paraplast | Leica | 39601006 | |
| Heated Paraffin Embedding Module | Leica | ||
| Commercial acrylic board | |||
| Trichloromethane | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 67-66-3 | |
| Tubular electric heating element(12V 200W) | |||
| Temperature controller(12v 120w) | Mingsuo | XH-W3002 | |
| Rotary microtome | Leica | ||
| Neutral silicone sealant | Link the water channel with the microtome knife holder | ||
| Voltage transformer | Dearll | S-250-12 | |
| Disposable blade | Accu-Edge | 4689 | |
| Hematoxylin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Eosin | Baso Diagnostics Inc. | BA-4025 | |
| Microslide | Sail Brand | 7105 | |
| Neutral balsam | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Lid | 10004160 | |
| Coverslip | Citoglas | 10212424C | |
| Microscope | Carl Zeiss | ||
| Hydrochloric acid | Xilong Chemical | 7647-01-0 | |
| Water bath for paraffin sections | Leica | ||
| HistoCore Arcadia C - Cold Plate | Leica | ||
| paraffin repellent spray | Thermo Scientific | 9990420 |
References
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