オヴォで ニワトリ胚における血管内注射
Summary
この論文の全体的な目標は、ニワトリ胚への外因性物質の卵管細胞内注入 において どのように行うかを記述することである。このアプローチは、ニワトリ胚の発生生物学を研究するのに非常に有用である。
Abstract
胚生物学の古典的なモデルシステムとして、ニワトリ胚は胚の発生と分化を調べるために使用されてきた。外因性物質をニワトリ胚に送達することは、胚発生中の遺伝子機能、トランスジェニック育種、およびキメラ調製を研究する上で大きな利点を有する。ここでは、プラスミドベクターや改変始原生殖細胞(PGC)などの外因性物質を発生初期の段階でドナーニワトリ胚に移入することができる in ovo 血管内注射の方法を示す。結果は、背側大動脈および頭部を介した血管内注射が、注入された物質が血液循環系を介して胚全体に拡散することを可能にすることを示している。提示されたプロトコールにおいて、外因性プラスミドおよびレンチウイルスベクター導入の有効性、ならびにレシピエント生殖巣における注射された外因性PGCのコロニー形成を、胚における蛍光を観察することによって決定した。この記事では、この方法の詳細な手順を説明し、それによって遺伝子機能、胚および発生生物学、および生殖腺キメラニワトリ産生を研究するための優れたアプローチを提供する。結論として、この記事は、研究者が大きな成功と再現性でニワトリ胚への外因性物質の 卵管 内注射を行うことを可能にします。
Introduction
ニワトリ胚は、発生学的、免疫学的、病理学的、および他の生物学的用途において何世紀にもわたって広く使用されてきた1,2,3。それらは、毒物学および細胞生物学の研究において、他の動物モデルよりも多くの固有の利点を有する4。ニワトリの胚は簡単にアクセスでき、インビトロで操作し、任意の発生段階で直接観察することができ、便利な胚研究モデルシステムを提供します。
一般に、エレクトロトランスフェクションや胚腔下注射などの現在のニワトリ胚送達方法は、専門機器や設計されたプログラムの要件、卵黄や卵白の存在による非効率性などの制限があります5,6,7。ここでは、外因性物質をニワトリ胚に送達するための簡単で効率的な取り扱い方法を示す。これは、発生生物学の研究に使用される強力なツールとなり得ます。注入された物質は、血液循環を介して胚全体に広がる。ニワトリ胚の初期発生の間、PGCは血液中を移動し、生殖器隆起に定着し、配偶子に発達し、外因性物質8を送達するための貴重な可能な経路を提供する。現在、この方法は、遺伝子機能、胚および発生生物学、ならびにキメラおよびトランスジェニックニワトリ産生の研究において広く使用されている9、10、11。
ニワトリ胚における卵管内注射において、十分に確立され、一般的に使用される方法12、13、14である。この論文では、注射材料、部位、投与量、および代表的な結果を含むこのプロトコルの包括的な説明を示す。
Protocol
Representative Results
Discussion
ニワトリ胚のin ovo血管内注射の方法は、外因性物質(ベクター、ウイルス性、またはPGC)が胚に移植されるように最適化される。この手法に基づき、安定した遺伝子過剰発現または干渉(SpinZ、JUN、UBE2Iなど)を有するニワトリ胚モデルを構築した。17,18,19。これらの確立されたモデルは、このアプローチの実現可能性を?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、中国国家自然科学財団(31972547)の支援を受けた。Jing Wangによるコピーエディットと、米国ワシントン州立大学のMalik Donlicによるナレーションに感謝します。
Materials
| Fluorescence macro-microscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Glass Capillaries | Narishige | G1 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 12566014 | liposome |
| pEGFP-N1 vector | Clontech | #6085-1 | |
| PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit | Sigma | PKH26GL | |
| pLVX-EGFP lentivirus vector | Addgene | 128652 | |
| Pneumatic Microinjector | Narishige | IM-11-2 | |
| Puller | Narishige | PC-100 | |
| Trypan Blue Stain | Gibco | 15250061 |
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