오보에서 닭 배아에 혈관 내 주사
Summary
이 논문의 전반적인 목표는 닭 배아에 외인성 물질의 난소 세포 내 주사를 수행하는 방법을 설명하는 것입니다. 이 접근법은 닭 배아의 발달 생물학을 연구하는 데 매우 유용합니다.
Abstract
배아 생물학의 고전적인 모델 시스템으로서, 닭 배아는 배아 발달과 분화를 조사하는 데 사용되었습니다. 외인성 물질을 닭 배아에 전달하는 것은 배아 발달 동안 유전자 기능, 형질전환 육종 및 키메라 준비를 연구하는 데 큰 이점이 있습니다. 여기서 우리는 플라스미드 벡터 또는 변형 된 원발성 생식 세포 (PGCs)와 같은 외인성 물질이 초기 발달 단계에서 공여체 닭 배아로 옮겨 질 수있는 난 소 혈관 내 주사의 방법을 보여줍니다. 결과는 등쪽 대동맥과 머리를 통한 혈관 내 주사가 주입 된 물질이 혈액 순환계를 통해 전체 배아로 확산 될 수 있음을 보여줍니다. 제시된 프로토콜에서, 외인성 플라스미드 및 렌티바이러스 벡터의 효능은 수용자 생식선에 주입된 외인성 PGCs의 도입, 및 콜로니화, 배아에서의 형광을 관찰함으로써 결정되었다. 이 기사는이 방법의 상세한 절차를 설명함으로써 유전자 기능, 배아 및 발달 생물학 및 생식선 키메라 닭 생산을 연구하는 데 탁월한 접근 방식을 제공합니다. 결론적으로,이 기사는 연구자가 큰 성공과 재현성으로 닭 배아에 외인성 물질의 난소 혈관 내 주사를 수행 할 수있게 해줄 것입니다.
Introduction
닭 배아는 발달, 면역학적, 병리학적 및 기타생물학적 응용1,2,3에서 수세기 동안 널리 사용되어 왔다. 그들은 독성학 및 세포 생물학 연구에서 다른 동물 모델에 비해 많은 고유 한 이점을 가지고있습니다 4. 닭 배아는 쉽게 접근 할 수 있으며 시험관 내에서 조작 할 수 있으며 모든 발달 단계에서 직접 관찰 할 수있어 편리한 배아 연구 모델 시스템을 제공합니다.
일반적으로 전기 형질감염 및 아발아강 주입과 같은 현재의 닭 배아 전달 방법은 전문 장비 및 설계 프로그램의 요구 사항, 노른 자 및 알부민 5,6,7의 존재로 인한 비효율과 같은 한계를 가지고 있습니다. 여기서 우리는 외인성 물질을 닭 배아에 전달하기위한 간단하고 효율적인 처리 방법을 보여줍니다. 이것은 발달 생물학 연구에 사용되는 강력한 도구가 될 수 있습니다. 주입 된 물질은 혈액 순환을 통해 배아 전체로 퍼졌습니다. 닭 배아의 초기 발달 동안, PGCs는 혈액을 통해 이동하고, 생식기 능선을 식민지화한 다음, 외인성 물질을 전달할 수 있는 귀중한 가능한 경로를 제공하는 가메테로 발전할 수 있다8. 이제, 이 방법은 유전자 기능, 배아 및 발달 생물학, 키메라 및 형질전환 닭 생산9,10,11의 연구에서 널리 이용되고 있다.
닭 배아에서의 난소 혈관 내 주사는 잘 확립되고 일반적으로 사용되는 방법12,13,14이다. 이 논문에서는 주사 물질, 부위, 복용량 및 대표적인 결과를 포함하여이 프로토콜에 대한 포괄적 인 설명을 보여줍니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
닭 배아의 난자 혈관내 주사의 방법은 외인성 물질(벡터, 바이러스, 또는 PGCs)이 배아 내로 전달되도록 최적화된다. 이 방법을 바탕으로 안정적인 유전자 과발현 또는 간섭 (SpinZ, JUN, UBE2I 등)을 가진 닭 배아 모델을 구축했습니다. 17,18,19. 이러한 잘 정립 된 모델은이 접근법의 실현 가능성을 증명합니다. 또한, 우리는 분?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (31972547)의 지원을 받았다. 우리는 Jing Wang의 카피 편집과 미국 워싱턴 주립 대학의 Malik Donlic의 목소리에 감사드립니다.
Materials
| Fluorescence macro-microscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Glass Capillaries | Narishige | G1 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 12566014 | liposome |
| pEGFP-N1 vector | Clontech | #6085-1 | |
| PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit | Sigma | PKH26GL | |
| pLVX-EGFP lentivirus vector | Addgene | 128652 | |
| Pneumatic Microinjector | Narishige | IM-11-2 | |
| Puller | Narishige | PC-100 | |
| Trypan Blue Stain | Gibco | 15250061 |
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