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CRISPR-concatemer를 이용한 마우스 작은 창자 organoids에서 다중 유전자 녹아웃을위한 프로토콜

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A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer

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CRISPR-concatemer를 이용한 마우스 작은 창자 organoids에서 다중 유전자 녹아웃을위한 프로토콜

DOI:

10.3791/55916-v

•

11:53 min

•

July 12, 2017

•

Alessandra Merenda², Amanda Andersson-Rolf², Roxana C. Mustata, Taibo Li, Hyunki Kim, Bon-Kyoung Koo²

¹Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute,University of Cambridge, ²Department of Genetics,University of Cambridge, ³Department of Pathology,Yonsei University College of Medicine

Chapters

00:05Title
00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
08:08Electroporation
10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
11:24Conlcusion

Summary

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이 프로토콜은 CRISPR / Cas9 기술을 사용하여 다중 유전자 녹아웃을 만드는 데 사용되는 하나의 가이드 RNA concatemer 벡터에 여러 단일 가이드 RNA를 복제하는 단계를 설명합니다. 장 organoids에 이중 knockouts의 생성은이 방법의 가능한 응용 프로그램으로 표시됩니다.

CRISPR-concatemer를 이용한 마우스 작은 창자 organoids에서 다중 유전자 녹아웃을위한 프로토콜

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