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Um protocolo para múltiplo knockout de genes em ratos Organoids Intestinal Pequeno Usando um CRISPR-concatemer
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A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer

Um protocolo para múltiplo knockout de genes em ratos Organoids Intestinal Pequeno Usando um CRISPR-concatemer

DOI:
10.3791/55916-v

•

11:53 min

•

July 12, 2017

•

, , , , ,
1Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute,University of Cambridge, 2Department of Genetics,University of Cambridge, 3Department of Pathology,Yonsei University College of Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
  • 03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
  • 05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
  • 08:08Electroporation
  • 10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
  • 11:24Conlcusion

Summary

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Este protocolo descreve as etapas para a clonagem de vários RNAs de guia único em um vetor de guia de RNA concatemer, que é de uso particular na criação de knockouts multi-genes usando a tecnologia CRISPR / Cas9. A geração de knockouts duplos em organoides intestinais é mostrada como uma possível aplicação deste método.

Tags

Keywords: CRISPR-concatemerMultiple Gene KnockoutMouse Small Intestinal OrganoidsCRISPRGuide RNAsElectroporationSimultaneous KnockoutLoss Of Function StudiesParallel CompensationCloningBbs1 Shuffling ReactionThree GRNA ConcatemerFour GRNA Concatemer

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