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Un protocollo migliorato per purificare e direttamente mono-biotinyare recombinante BDNF in un tubo per gli studi sul traffico cellulare nei neuroni
JoVE 杂志
神经科学
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JoVE 杂志 神经科学
An Improved Protocol to Purify and Directly Mono-Biotinylate Recombinant BDNF in a Tube for Cellular Trafficking Studies in Neurons
DOI:

13:46 min

July 11, 2020

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Chapters

  • 00:00Introdcution
  • 00:48Transfection of HEK293 cells
  • 01:49Media Collection and Storage
  • 03:02Media Concentration and Purification
  • 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
  • 06:01Biotinylation Analysis
  • 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
  • 07:58Represetative Results
  • 13:17Conclusion

Summary

自动翻译

Il BDNF ricombinante contenente una sequenza Avi (BDNFAvi) viene prodotto nelle cellule HEK293 in modo conveniente ed è purificato dalla cromatografia di affinità. BDNFavi viene quindi direttamente mono-biotinylated con l'enzima BirA in un tubo. BDNFavi e BDNFavi monobionlate mantengono la loro attività biologica rispetto al BDNF disponibile in commercio.

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