في التصوير المجراة من الطبقات العميقة القشرية باستخدام Microprism
Summary
الحق الزاوية microprisms إدراجها في القشرة المخية الحديثة الماوس يسمح للتصوير عميق للطبقات قشرية متعددة مع وجهة النظر التي توجد عادة في شريحة. واحد ملليمتر microprisms العرض حقل من رأي واسعة (900 ميكرون ~) والقرارات المكانية كافية لحل شجيري العمود الفقري. نظهر طبقة V التصوير العصبية والأوعية الدموية التصوير باستخدام microprisms القشرة المخية الحديثة.
Abstract
نقدم لبروتوكول في مجال التصوير من الأنسجة الحية القشرية باستخدام مسبار التصوير في أعماق المخ في شكل microprism. Microprisms هي 1 ملم في الحجم ولها طلاء عاكسة على وتر للسماح التأمل الداخلي من الإثارة والخفيفة الانبعاثات. التحقيق microprism الصور في وقت واحد طبقات قشرية متعددة مع منظور ينظر عادة إلا في شريحة الاستعدادات. يتم جمع الصور مع حقل كبير من رأي (~ 900 ميكرون). بالإضافة إلى ذلك ، ونحن نقدم تفاصيل بشأن الإجراء غير الجراحي والإعداد بقاء المجهر. النتائج ممثل تضمين الصور طبقة من الخلايا العصبية الهرمية الخامس من خاصتك – 1 – H YFP الفئران تبين التشعبات التي تمتد من خلال قمية طبقة قشرية سطحية وتمتد إلى خصلات. وكان القرار كافية لصورة العمود الفقري شجيري قرب سوما طبقة من الخلايا العصبية الخامس. إن الحقن الذيل الوريد صبغة الفلورسنت يكشف عن شبكة معقدة من الأوعية الدموية في القشرة. خط المسح الضوئي لخلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) التي تتدفق من خلال الشعيرات الدموية RBC يكشف سرعة ويمكن الحصول على معدلات التدفق. هذا التحقيق microprism الرواية أنيقة ، طريقة جديدة لكنها قوية من تصور الهياكل الخلوية العميق وظيفة القشرية في الجسم الحي.
Protocol
Discussion
باستخدام microprism في تجربة التصوير واضح ومباشر نسبيا وتوفر العديد من المزايا لفي الدراسات المجراة على القشرة المخية الحديثة. أمثلة ممثل باستخدام هذه التقنية تشمل الصور المأخوذة من الفئران المعدلة وراثيا التعبير عن بروتين فلوري الصفراء في الخلايا العصبية الخامس طبقة ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر أنتوني Koleske J. ، دكتوراه عن توفير YFP الفئران.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| With enhanced silver reflective coating-(R77) | OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA) | 055-0010 | With enhanced silver reflective coating-(R77) | |
| Fluorescein-dextran | Sigma-Aldrich | FD70 | 70 kDa | |
| 0.28 NA, 4x air objective | Olympus | XLFLUOR 4x/340 | ||
| 0.60 NA, 40x air objective | Olympus | LUCPLFLN | With 0-2 mm coverglass correction |
Referenzen
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).
- Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).
