Imágenes in vivo de Deep capas corticales con un microprisma
Summary
En ángulo recto microprismas insertado en la corteza cerebral del ratón permite obtener imágenes profundas de múltiples capas corticales con un punto de vista típicamente se encuentran en el segmento. De un milímetro microprismas ofrecen un campo de visión amplio (~ 900 m) y resolución espacial suficiente para resolver las espinas dendríticas. Demostramos capa de imagen V neuronal y vascular mediante imágenes neocortical microprismas.
Abstract
Se presenta un protocolo de imágenes in vivo del tejido cortical mediante una sonda de imagen cerebral profunda en la forma de un microprism. Microprismas son de 1 mm de tamaño y tienen una capa reflectante de la hipotenusa para que la reflexión interna de la excitación y de emisión de luz. La sonda microprism simultáneamente múltiples imágenes de las capas corticales con una perspectiva general, visto sólo en los preparativos de división. Las imágenes se recogieron con un gran campo de visión (~ 900 m). Además, se proporcionan detalles sobre el procedimiento quirúrgico no la supervivencia y la configuración del microscopio. Los resultados representativos incluyen imágenes de la capa V neuronas piramidales de Thy-1-H YFP ratones que muestran sus dendritas apicales se extiende a través de la capa cortical superficial y se extiende a mechones. Resolución fue suficiente para las espinas dendríticas de imágenes cerca de la soma de la capa de neuronas V. Una inyección de cola vena de un colorante fluorescente revela la intrincada red de vasos sanguíneos en la corteza. De exploración lineal de los glóbulos rojos (GR) que fluye a través de los capilares revela la velocidad de glóbulos rojos y las tasas de flujo se pueden obtener. Esta sonda microprism novela es un método elegante, el nuevo y potente de visualizar profundidad las estructuras celulares y la función cortical en vivo.
Protocol
Discussion
El uso de un microprism en un experimento de imágenes es relativamente sencillo y ofrece muchas ventajas para los estudios in vivo en el neocórtex. Ejemplos representativos de esta técnica incluyen imágenes tomadas de ratones transgénicos que expresan la proteína amarilla fluorescente en la capa de neuronas corticales V. Usando microprismas se puede ver una colección de grandes cuerpos de las células piramidales de la capa V, cerca de 1 mm por debajo de la superficie cortical. También se ve son las dendritas ap…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a Anthony J. Koleske, PhD de proporcionar a los ratones YFP.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| With enhanced silver reflective coating-(R77) | OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA) | 055-0010 | With enhanced silver reflective coating-(R77) | |
| Fluorescein-dextran | Sigma-Aldrich | FD70 | 70 kDa | |
| 0.28 NA, 4x air objective | Olympus | XLFLUOR 4x/340 | ||
| 0.60 NA, 40x air objective | Olympus | LUCPLFLN | With 0-2 mm coverglass correction |
Referenzen
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).
- Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).
