В естественных изображений из глубоких слоях коры использованием микропирамид
Summary
Под прямым углом микропризм вставляется в коре головного мозга мыши позволяет производить глубокое изображение нескольких коркового слоя с точки зрения обычно можно найти в срез. Один-миллиметровых микропризм предлагаем широкое поле сектор обзора (~ 900 мкм) и пространственным разрешением достаточно для разрешения дендритных шипиков. Мы показываем слой V нейронов изображений и неокортекса сосудистой визуализации с использованием микропризм.
Abstract
Мы представляем протокол для прижизненного изображения корковой ткани с помощью глубокой сканирование мозга зонд в форме микропирамид. Микропризм являются 1-мм и отражающим покрытием на гипотенузе, чтобы внутреннее отражение возбуждения и испускания света. Микропирамид датчик изображения одновременно несколько слоев коры с перспективой как правило, рассматривается только в часть препаратов. Изображения, собранные с большого поля-обзора (~ 900 мкм). Кроме того, мы предоставляем информацию о не-выживания хирургической процедуры и микроскопа установки. Представитель результаты включают в себя изображения слоя V нейронов пирамидальной от Thy-1-H YFP мышей с указанием их дендритов, проходящий через поверхностный слой коры и расширения в пучки. Резолюция была достаточной для изображения дендритных шипиков возле сомы слоя нейронов V. Хвостовой вены инъекции флуоресцентного красителя показывает сложную сеть кровеносных сосудов в коре головного мозга. Линия сканирования красных кровяных телец (эритроцитов), протекающей через капилляры показывает РБК скорости потока и ставки могут быть получены. Этот роман зонд микропирамид является элегантным, но мощный новый метод визуализации глубоких клеточных структур и корковых функций в естественных условиях.
Protocol
Discussion
Использование микропирамид в визуализации эксперимент относительно проста и имеет много преимуществ для прижизненного исследования коры головного мозга. Типичными примерами использования этого метода включают изображения, полученные из трансгенных мышей, экспрессирующих желтый ф…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Энтони Дж. Koleske, доктор философии за предоставление YFP мышей.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| With enhanced silver reflective coating-(R77) | OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA) | 055-0010 | With enhanced silver reflective coating-(R77) | |
| Fluorescein-dextran | Sigma-Aldrich | FD70 | 70 kDa | |
| 0.28 NA, 4x air objective | Olympus | XLFLUOR 4x/340 | ||
| 0.60 NA, 40x air objective | Olympus | LUCPLFLN | With 0-2 mm coverglass correction |
Referenzen
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).
- Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).
