在使用微深皮质层的活体成像
Summary
直角microprisms允许插入到小鼠大脑皮层多个皮质层的深成像与通常在切片中发现了一个观点。一毫米microprisms提供了一个广阔的领域的视图（〜900微米）和空间分辨率足以解决树突棘。我们证明V层神经成像和新皮层的血管成像，使用microprisms。
Abstract
我们现在活体成像的皮层组织，使用了深刻的脑成像探头在一个微形的协议。 Microprisms 1毫米大小，有一个斜边的反射涂层，让内部的激发和发射光的反射。微探针同时图像多个角度皮质层通常仅见于片的筹备工作。图片是一个大型的收集领域的视图（〜900微米）。此外，我们提供了生存的非外科手术的细节和显微镜设置。代表性的结果，包括从你的YFP – H – 1小鼠显示他们的顶树突延长通过表面的皮质层，并延伸到塔夫茨V层锥体神经元的图像。决议足以形象V层神经元的胞体附近的树突棘。一个荧光染料的尾静脉注射，揭示了在皮层血管的复杂网络。流经毛细血管的红细胞（红血球）线扫描揭示RBC速度和通量率可以得到。这种新颖的微探针是一个优雅的，但功能强大的可视化深层细胞的结构和在体内的皮质功能的新方法。
Protocol
第1部分：微光学显微镜设置我们使用的microprisms 1毫米，直角棱镜，从Optosigma公司（图1）购买的BK7玻璃制成的。 Microprisms处理尽可能使用镊子。 斜边的微涂有增强银提供大于97％的反射率从400 – 2000纳米。这提供了内部反射的激光激发光下发出荧光。 Microprisms总是在可能时使用产钳处理。手套戴在任何时候都保持棱镜清洁。 我们使用一个定制的双光子显微镜的小动物成…
Discussion
使用微成像实验相对来说比较简单，在大脑皮层的体内研究提供了许多优点。使用这种技术的有代表性的例子包括在V层皮层神经元的表达黄色荧光蛋白的转基因小鼠拍摄的图像。使用microprisms，人们可以看到一个大V层的锥体细胞机构的收集，近1毫米以下皮质表面。也看到了延长塔夫茨大学（图2）前分歧，通过所有的表面层的顶树突。用于这些实验的老鼠是转基因动物表达YFP的，只有在V层神经元…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢安东尼J. Koleske，博士提供YFP的小鼠。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| With enhanced silver reflective coating-(R77) | OptoSigma Corp. (Santa Ana, CA) | 055-0010 | With enhanced silver reflective coating-(R77) | |
| Fluorescein-dextran | Sigma-Aldrich | FD70 | 70 kDa | |
| 0.28 NA, 4x air objective | Olympus | XLFLUOR 4x/340 | ||
| 0.60 NA, 40x air objective | Olympus | LUCPLFLN | With 0-2 mm coverglass correction |
Referenzen
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online. 2, 13-13 (2003).
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-41 (2000).
- Kleinfeld, D., Mitra, P. P., Helmchen, F., Denk, W. Fluctuations and stimulus-induced changes in blood flow observed in individual capillaries in layers 2 through 4 of rat neocortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (26), 15741-15741 (1998).
Tags
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Chia, T. H., Levene, M. J. In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism. J. Vis. Exp. (30), e1509, doi:10.3791/1509 (2009).