マウスで大網に膵島移植法
Summary
大網移植マウスの島のための方法を紹介します。膵島は、ハイドロゲルと混合され、混合物は糖尿病マウスの大網のポーチに配置されます。血糖値を監視し、免疫組織化学的解析を行っています。
Abstract
膵島移植は、1 型糖尿病の潜在的な治療であると提案されています。最近の説得力のある証拠は、理想的な膵島の血管内注入を示しますので、大網は膵島移植の可能性がある貴重なサイトとして再浮上。この実験では、高品質の膵島の分離と糖尿病の受信者に膵島移植を必要があります。大網への移植には、視覚的によりよく示すことができる手術の手順が必要です。ここでは、このプロシージャの詳細な手順が掲載されています。糖尿病マウスの大網のポーチに混合物を配置する前にゲルと膵島の混合の 2 つのメソッドは以下のとおりです。別のゲルは、さまざまな条件に使用されます。大網の同系の島の受信者を糖尿病マウスの血糖値は 35 日間の監視されました。免疫組織化学的解析を実行する 14 日後は、いくつかの動物が犠牲になった。この前臨床移植アプローチは、臨床移植への翻訳に至るまで予備のデータとして使用できます。
Introduction
国際糖尿病連合 (IDF) によると、糖尿病は現在、203515 億 9200 万人に投影された増加との 3 億 8200 万人を影響します。両方の同種および異種膵島移植、全身性の免疫抑制療法が必要です。免疫のない免疫拒絶反応は移植の損失の2の主要な原因です。インスタントの血液を介した炎症反応 (IBMIR)3,4による移植膵島の損失の重大な問題もあります。ただし、同系のような免疫応答の不在でもまたは自動移植モデル、門脈経由で肝臓に移植する膵島細胞が炎症のためおよび/または貧しい人々 の血液などの好ましくない環境条件に失われました。減らされた酸素や栄養素5,6を供給します。その結果、長期的な代謝機能を確保するために小島が多いほど生着7を減らす最初のセル損失を補うために必要です。
膵島の生着を最適化しようとして、いくつかの代替解剖学的サイト実験を行った結果のよう臨床的に有望なまだ決定的でない8。簡単かつ安全なアクセスを提供するいくつかの代替サイトに対し (e.g皮膚、腎被膜、胃粘膜、眼の前房内) またはより大きい島の大衆のためのより広い面 (e.g。、腹腔内)、生存および生理。移植膵島の代謝のパフォーマンスはまだ限られている、懸念9を維持します。膵島の生着のためのより適切なサイトの検索が進行中です。
大網は膵島移植の早い開発の調査を行い, 島10、11,12,13、成功の環境を証明する多くの解剖学的サイト 14。ただし、膵島の門脈内注入になった臨床選択期限一部プロシージャの相対的なシンプルさと動物の初期の成功モデル6。また、一部では、ネガは、これに関連するサイト、特に大規模な早期膵島の損失、フィールドとして実験的膵島移植の初期の頃に以下の理解なり拘束された成熟します。膵島の血管内注入がから遠いことを示す最近の説得力のある証拠と理想的な大網は細胞移植の可能性がある貴重なサイトとして再浮上。
(大網ポーチの形) で大網肝15,16上の相対的な利点を提供しています。血管に富んだ、簡単にアクセス可能です。(必要に応じて) 移植や生検の検索をことができます。小島によって経験される虚血期間は肝臓に比べて減り、大網が不可能である門脈的、門脈圧の上昇、大きなアイレット大衆は合併症を引き起こすことができる比較的受け入れることができます。
20-25 g. 小島受信者がレンダリングされた 250 の線量とストレプトゾトシンの単回投与で糖尿病の体重と生後 6-8 週間の間 c57bl/6 男性マウスを用いた研究でテストされたプロトコルに使用された移植の同系マウス モデルmg/kg の ip。糖尿病の誘導は成功とマウスの血糖値は注射後 24 ミリ モル/L 48 h を超えています、上位 5 日の最低レベルのまま。
同系の小島は、以下のいくつかの変更以前に発行された方法年齢一致ドナーの膵臓から分離しました。簡単に言えば、コラゲナーゼは胆管ではなく胆嚢に注入されました。これは、注入の容易さへの改善として行われていた。コラゲナーゼ注入された培養、組織破壊、密度勾配分離に続いて、純粋な島を取得する手摘み。小島未満 10% 熱不活化の牛胎児血清 (FBS) T175 37 ° C でフラスコを添加した CMRL 1066 培地で一晩培養移植前に 95% の空気-5% CO2 。
Protocol
Representative Results
Discussion
門脈を介して肝膵島移植はヒトでは、最もよく使われる膵島移植の方法がまだ門脈血栓症と肝脂肪変性17など効率と安全性の懸念があります。最近の研究では、大網肝臓臨床翻訳12,14,18,19の前に実施するより多くの研究ニーズに適切な代わりであるかもしれないことを示します。…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
いくつかのこの作品の作家は一部国立キー R & D 中国プログラム (2017YFC1103704)、三明プロジェクト深圳 (SZSM201412020)、高レベル医療分野建設の深セン (2016031638) のための基金で医学部からの補助金によってサポートされていた深セン科学技術 (JCJY20160229204849975、GJHZ20170314171357556、JCYJ20160425110110658)、健康と家族計画委員会 (SZXJ2017021) の深圳財団の基金。
Materials
| Equipment | |||
| 5 inch (12-13 cm) Scissors | RWD Life Science | S12030-11 | |
| Fine Forceps | RWD Life Science | F11010-13 | |
| Small wound clips | RWD Life Science | R33003-01 | |
| Acutenaculum | RWD Life Science | F31044-13 | |
| 2 pair tissue forceps | RWD Life Science | F13023-10 | |
| 4-0 Suture with needle | Chenghe, China | 17094 | |
| 200μl Pipette and tips | Gilson | PN11 | |
| One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system | Johnson & Johnson | 33391713 | |
| razor blade | Philips | HC1099/15 | |
| Material and animals | |||
| Pentobarbital Sodium | Sigmaaldrich.com | P3761 | For anesthesia |
| Hydrogel | bdbiosciences.com | 356234 | Basement Membrane Matrix |
| Fibrin-Thrombin Hydrogel | Baxter.com | 1501250 | Components clot when mixed |
| 70% Ethanol | Yingniu medical, Anhui, China | 23170608 | |
| Iodophor | Lierkang medical technology, Shangdong, China | 170521 | |
| Normal saline | Baxter.com | 2B1324 | |
| Cephalosporin | Lukang medical, Shangdong, China | 150303 | |
| Cefazolin | Baxter.com | 2G3508 | |
| lubricant eye ointment | Major Pharmaceuticals | 203964 | |
| streptozotocin | Sigmaaldrich.com | S0130 | |
| collagenase Type V | Sigmaaldrich.com | C9262 | |
| CMRL-1066 media | celltrans, Wenzhou, China | X018D1 | |
| histopaque | Sigmaaldrich.com | 10771 | density gradient |
| PE50 tubing | Braintreesci.com | PE50 100 FT | Polyethylene .023" x .038 |
| Calcein AM | Sigmaaldrich.com | C1359 | |
| Propidium iodide | Sigmaaldrich.com | P4864 | |
| optimal cutting temperature compound (OCT) | Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL | 4583 | embedding medium |
| insulin antibody | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 8138S | |
| hematoxylin staining media | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 14166S | |
| eosin staining media | Beyotime Biotech, China | C0109 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific Inc. | D1306 | |
| C57Bl/6 Mice | Medical Animal Center of Guangdong Province | / | |
| Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| T175 flasks | Falcon | 353112 | |
| 1.5mL Snap-top tubes | Axygen | MCT-150-C |
Referencias
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