Adacık nakli için Mouse omentumun için bir yöntemi
Summary
Bir mouse adacıkları omental nakli için bir yöntem tanıttı. İzole adacıkları hidrojel ile karıştırılır ve karışımı bir diyabetik fare omental kese yerleştirilir. Daha sonra kan şekeri izlenir ve IMMUNO-histochemical çözümleme yapılır.
Abstract
Adacık nakli tip 1 diyabet için potansiyel bir tedavi olmak için teklif edildi. Son esaslı bir kanıt bulmadığınız intravasküler adacık infüzyon ideal çok uzak olduğunu gösterir ve bu nedenle, omentumun yeniden ortaya çıkan adacık nakli için potansiyel olarak değerli bir site olarak. Bu deney yalıtım kaliteli adacıkları ve diyabetik alıcılara adacıkları implantasyonu gerektirir. Nakli için omentumun daha iyi görsel olarak göstermiş olabilir cerrahi adımları gerektirir. Burada, bu yordam için ayrıntılı adımlar sunulmaktadır. Karışımı diyabetik farelerin kese omental yerleştirmeden önce hidrojel ile izole adacıkları karıştırma için iki yöntem burada açıklanmıştır. Farklı hydrogels farklı koşulları için kullanılır. Kan şekeri düzeyleri diyabetik fare alıcıların omentumun syngeneic adacıklar 35 gün için takip. Bazı hayvanlar IMMUNO-histochemical analizi yapmak için 14 gün sonra kurban edildi. Bu önceden klinik nakli yaklaşım klinik nakli için çeviri kadar önde gelen ön veriler olarak kullanılabilir.
Introduction
Uluslararası Diyabet Federasyonu (IDF) göre diyabet Şu anda 592 milyon kişi 20351tarafından öngörülen bir artış ile 382 milyon insanı etkiliyor. Her iki allojeneik ve xenogeneic adacık nakli sistemik immünsupresif tedavi gereklidir. İmmünosupresyon bağışıklık ret greft kaybı2önemli bir nedenidir. Transplante adacık kaybı nedeniyle anında kan aracılı inflamatuar reaksiyon (IBMIR)3,4önemli bir sorun da vardır. Ancak, syngeneic olduğu gibi böyle bir bağışıklık yanıtı yokluğunda bile veya auto-nakli modelleri, adacık hücreleri karaciğer portal ven yoluyla içine nakledilen iltihap nedeniyle ve/veya zayıf kan gibi olumsuz çevre koşulları için kayıp düşük oksijen ve/veya besin5,6ile sağlayın. Sonuç olarak, uzun vadeli metabolik işlevi sağlamak için adacık numaraları daha büyük engraftment7azaltır ilk hücre kaybı için telafi etmek gereklidir.
Adacık engraftment optimize etmek için bir girişim, birkaç alternatif anatomik sitesi deneysel olarak araştırılması gibi klinik olarak, yapılan umut verici ile henüz değil kesin görüntülenen8. Bazı alternatif siteleri kolay ve güvenli erişim sunan ise (Örneğin., cilt, böbrek kapsülü, gastrik submukoza ve gözün ön odası) veya daha büyük adacık kitleler için daha geniş bir yüzey (e.g., periton boşluğu), hayatta kalma ve fizyolojik transplante adacıklar metabolik performans ve hala sınırlı bir endişe9kalır. Adacık engraftment için daha uygun bir site için arama devam ediyor.
Omentumun adacık nakli erken gelişme araştırıldı ve başarılı bir ortam adacıkları10,11,12,13kanıtlamış birçok anatomik siteler arasında yapıldı, 14. Ancak, intraportal adacık infüzyon klinik seçim nedeniyle kısmen yordamı göreli kolaylığı oldu ve6hayvan erken başarı modelleri. Ayrıca, kısmen, negatifleri ilişkili ile bu site, özellikle büyük erken adacık kaybı vardı daha az anlaşılan ve daha az alan olarak deneysel adacık nakli ilk günlerinde sınırlama olgunlaştı. Damar içi adacık infüzyon uzakta olduğunu belirten daha yeni zorlayıcı kanıtlarla omentumun yeniden ortaya çıkan hücre transplantasyonu için potansiyel olarak değerli bir site olarak idealdir.
Omentumun (omental bir kese şeklinde) karaciğer15,16göreli avantaj sunar. İyi bozukluklarına ve kolayca erişilebilir. Greft (gerekirse) ve/veya biyopsi alınmasını sağlar. Tarafından adacıkları deneyimli iskemik dönem karaciğer ile karşılaştırıldığında azalır ve omentumun nispeten intraportally, bir artış nerede portal basınç mümkün değil büyük adacık kitleler komplikasyonlara neden olabilir kabul edebilir.
Bir syngeneic fare modeli nakli C57BL/6 erkek fareler arasında 6 – 8 haftalık 20-25 g. adacık alıcılar ile streptozotocin tek bir enjeksiyon 250 doz ile diyabetik hale vücut ağırlığı ile istihdam çalışmada test protokolü kullanıldı mg/kg IP. Kan şekeri düzeyini fare enjeksiyon sonra 24 mmol / M 48 h büyüktür ve bu düzeyi en az 5 gün için yukarıda hala diyabet indüksiyon başarılı kabul edilebilir.
Syngeneic adacıkları yaş eşlemeli bağış bazı değişikliklerle daha önce yayımlanmış yöntemleri takip pankreas dan izole edildi. Kısacası, collagenase safra kesesi safra kanalını yerine içine enjekte ettiler. Bu enjeksiyon kolaylığı kolaylaştırmak için bir gelişme yapıldı. Collagenase infüzyon kuluçka, doku bozulması, yoğunluk gradient ayırma tarafından izlenen ve el-toplama saf adacıkları elde etmek için. Adacıkları gecede ile % 10 ısı inaktive fetal Sığır serum (FBS) 37 ° C’de T175 şişeler içinde küçük takıma CMRL-1066 ortamda kültürlü % 95 hava – %5 CO2 nakli önce.
Protocol
Representative Results
Discussion
Portal ven yoluyla karaciğere adacık nakli en yaygın olarak kullanılan yöntem adacık nakli, insanlarda, ama hala portal ven trombozu ve karaciğer yağlanma17gibi verimlilik ve güvenlik endişeleri vardır. Son araştırmalar, omentumun karaciğer ama önce klinik çeviri12,14,18,19yapılacak daha fazla araştırma ihtiyacı için uygun bir alternatif olabilir gö…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bazı yazarlar bu eserin kısmen ulusal anahtar R & D Çin programı (2017YFC1103704), Sanming proje tıp Shenzhen (SZSM201412020), yüksek düzey tıbbi disiplin inşaat, Shenzhen (2016031638) için fon gelen hibe tarafından desteklenen edildi Shenzhen Vakfı Bilim ve teknoloji (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Shenzhen Vakfı Sağlık ve aile planlaması Komisyonu (SZXJ2017021).
Materials
| Equipment | |||
| 5 inch (12-13 cm) Scissors | RWD Life Science | S12030-11 | |
| Fine Forceps | RWD Life Science | F11010-13 | |
| Small wound clips | RWD Life Science | R33003-01 | |
| Acutenaculum | RWD Life Science | F31044-13 | |
| 2 pair tissue forceps | RWD Life Science | F13023-10 | |
| 4-0 Suture with needle | Chenghe, China | 17094 | |
| 200μl Pipette and tips | Gilson | PN11 | |
| One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system | Johnson & Johnson | 33391713 | |
| razor blade | Philips | HC1099/15 | |
| Material and animals | |||
| Pentobarbital Sodium | Sigmaaldrich.com | P3761 | For anesthesia |
| Hydrogel | bdbiosciences.com | 356234 | Basement Membrane Matrix |
| Fibrin-Thrombin Hydrogel | Baxter.com | 1501250 | Components clot when mixed |
| 70% Ethanol | Yingniu medical, Anhui, China | 23170608 | |
| Iodophor | Lierkang medical technology, Shangdong, China | 170521 | |
| Normal saline | Baxter.com | 2B1324 | |
| Cephalosporin | Lukang medical, Shangdong, China | 150303 | |
| Cefazolin | Baxter.com | 2G3508 | |
| lubricant eye ointment | Major Pharmaceuticals | 203964 | |
| streptozotocin | Sigmaaldrich.com | S0130 | |
| collagenase Type V | Sigmaaldrich.com | C9262 | |
| CMRL-1066 media | celltrans, Wenzhou, China | X018D1 | |
| histopaque | Sigmaaldrich.com | 10771 | density gradient |
| PE50 tubing | Braintreesci.com | PE50 100 FT | Polyethylene .023" x .038 |
| Calcein AM | Sigmaaldrich.com | C1359 | |
| Propidium iodide | Sigmaaldrich.com | P4864 | |
| optimal cutting temperature compound (OCT) | Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL | 4583 | embedding medium |
| insulin antibody | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 8138S | |
| hematoxylin staining media | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 14166S | |
| eosin staining media | Beyotime Biotech, China | C0109 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific Inc. | D1306 | |
| C57Bl/6 Mice | Medical Animal Center of Guangdong Province | / | |
| Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| T175 flasks | Falcon | 353112 | |
| 1.5mL Snap-top tubes | Axygen | MCT-150-C |
Referencias
- Guariguata, L., et al. Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035. Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).
- Bellin, M. D., et al. Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes. American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).
- Moberg, L., et al. Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation. The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).
- Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment. Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).
- Bellin, M. D., et al. Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants. Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).
- Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges. Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211 (2014).
- Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. Clinical pancreatic islet transplantation. Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).
- Cantarelli, E., Piemonti, L. Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts. Current diabetes reports. 11 (5), 364 (2011).
- Cantarelli, E., et al. Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes). Islets. 5 (2), 79-86 (2013).
- Beli, E., et al. Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes. J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).
- Hafner, J., et al. Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes. Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).
- Schmidt, C. Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum. Nature Biotechnology. 35 (1), 82017 (2017).
- Voigt, M., et al. Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes. Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).
- Baidal, D. A., et al. Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas. New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).
- Espes, D., et al. Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets. American Journal of Transplantation. , (2016).
- Berman, D. M., et al. Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold. Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).
- Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment. Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).
- Espes, D., et al. Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets. American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).
- Hajizadeh-Saffar, E., et al. Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes. Scientific Reports. 5, (2015).
