文化髓系树突状细胞从骨髓前体
Summary
这个视频演示的区分从小鼠骨髓髓系树突状细胞的过程。隔离表明小鼠的胫骨和股骨，加工和骨髓。图片展示前和分化后的细胞形态和数字描绘细胞表型和IL – 12的生产以下成熟使用的CpG所示。
Abstract
髓系树突状细胞（DCS）是经常被用来研究先天免疫和适应性免疫机制和感染的早期反应之间的相互作用。因为这些都是最有力的抗原提呈细胞，区议会正越来越多地使用作为疫苗载体的研究抗原特异性免疫应答的诱导。在这段视频中，我们展示了收获来自捐助者鼠标的胫骨和股骨，处理骨髓，在体外鉴别区议会的程序。区议会的变化刺激未成熟树突状细胞后的属性是强有力的吞噬细胞，而成熟DC抗原提呈和+和CD8 + T细胞与CD4的相互作用。这种功能活动的变化对应与上调细胞表面标志和细胞因子的产生。很多代理商可以使用成熟的区议会，包括细胞因子和Toll样受体配体。在这段视频中，我们展示了两个共刺激分子，CD86和CD40分子，细胞因子，IL – 12的表达，流式细胞仪比较，与中央人民政府或模拟处理过夜刺激。分化后，区议会可以进一步操纵使用或作为疫苗载体在体外产生抗原特异性免疫应答脉冲肽或蛋白质，或转用重组病毒载体。
Protocol
此协议已经适应卢茨等。 收获和加工骨髓 胫骨与股骨的隔离 ：安乐死捐助鼠标，喷以70％乙醇的腿。牢牢抓住脚踝，钝钳和开始剪去的皮肤和基础肌肉暴露胫骨。为了避免损坏骨，缓慢切割和并行的胫骨，而使膝关节完好。 清洁股骨，抓钝钳固定膝关节。清洁干净，一双锋利的剪刀，弯钳的肌肉。继续向上，直到髋关节暴露和剪刀，可置于股骨…
Discussion
区议会是有用的先天免疫和适应性免疫的相互作用的研究，可受聘作为疫苗载体。在这个视频中，我们已经证明的步骤来隔离骨髓和髓系树突状细胞在体外分化。文化时期之后，这些细胞可以被可视化微观为贴壁细胞，它往往具有树突，以及非贴壁的圆形细胞。区议会可以进一步操纵抗原提呈抗原脉冲刺激的细胞因子的生产和使用细胞因子和/或Toll样受体配体（检讨，看到吉尔博亚，2008（2））共刺激分子的上调…
Acknowledgements
巴顿是由自然科学和工程研究理事会（NSERC）的奖学金支持。为支持这一项目由加拿大卫生研究院提供，批准“公约”，67066。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| recombinant murine GM-CSF | Reagent | Peptrotech | 315-03 |
Referencias
- Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223, 77-92 (1999).
- Gilboa, E. DC-based cancer vaccines. J. Clin. Invest. 117, 1195-1203 (2007).
Tags
Myeloid Dendritic CellsBone Marrow PrecursorsImmune MechanismsAntigen Presenting CellsVaccine VectorTibias And FemursIn Vitro Differentiation Of DCsFunctional Activity Of DCsCell Surface MarkersCytokine ProductionMaturation Of DCsFlow Cytometric ComparisonsCo-stimulatory MoleculesIL-12 CytokineCpG StimulationMock TreatmentVaccine Vector ManipulationAntigen-specific Immune ResponsesIn Vitro PulsingRecombinant Viral Vectors
Citar este artículo
Boudreau, J., Koshy, S., Cummings, D., Wan, Y. Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors. J. Vis. Exp. (17), e769, doi:10.3791/769 (2008).