Культура миелоидных дендритных клеток из костного мозга прекурсоров
Summary
Это видео демонстрирует процедуру для дифференциации миелоидных дендритных клеток из костного мозга мыши. Выделение мышью голени и бедра, и обработки костного мозга продемонстрировано. Картинки демонстрируя морфологии клеток до и после дифференциации, и цифры изображением фенотип клетки и Ил-12 производства после созревания использованием CpG показаны.
Abstract
Миелоидного дендритные клетки (ДК), часто используются для изучения взаимодействия врожденных и адаптивных иммунных механизмов и ранний ответ на инфекцию. Потому что это самый мощный антиген представляющих клеток, ЦОДов все чаще используются в качестве вакцины для изучения вектор индукции антиген-специфического иммунного ответа. В этом видео мы продемонстрируем процедуры для уборки большеберцовые кости и бедра от донора мыши, обработки костного мозга и дифференциации контроллеры домена в пробирке. Свойства изменение домена после стимуляции: незрелые дендритные клетки являются мощным фагоцитов, в то время как зрелые РС способны презентации антигена и взаимодействия с CD4 + и CD8 + Т-клеток. Это изменение функциональной активности соответствует регуляция клеточных поверхностных маркеров и продукции цитокинов. Многие агенты могут быть использованы для зрелой контроллеры домена, включая цитокины и звонок, как лиганды рецептора. В этом видео, мы демонстрируем проточной цитометрии сравнения выражения двух костимулирующих молекул CD86 и CD40, и цитокинов, IL-12, после стимуляции ночь с CpG или макет лечения. После дифференциации, контроллеры домена могут быть дополнительно манипулировать для использования в качестве вакцины вектора или генерировать антиген-специфического иммунного ответа в процессе искусственного пульсирующий использованием пептиды или белки, или трансдуцированных с использованием рекомбинантной вирусных векторов.
Protocol
Discussion
Контроллеры домена являются полезными для исследования врожденных и адаптивных иммунных взаимодействий, и может быть использован в качестве вакцины вектор. В этом видео, мы продемонстрировали шагов, чтобы изолировать костного мозга и дифференциации миелоидных дендритных клеток в пробирке. Пос?…
Acknowledgements
JB поддерживается studentships с естественным наукам и инженерным исследованиям Совета (NSERC). Поддержка данного проекта была предоставлена канадского института исследований в области здравоохранения, Грант СС-67066.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| recombinant murine GM-CSF | Reagent | Peptrotech | 315-03 |
Referencias
- Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223, 77-92 (1999).
- Gilboa, E. DC-based cancer vaccines. J. Clin. Invest. 117, 1195-1203 (2007).
