Cultuur van myeloïde dendritische cellen uit beenmerg precursors

Summary

Deze video toont de procedure voor de differentiatie van myeloïde dendritische cellen van de muis beenmerg. Isolatie van de muis scheenbeen en dijbeen, en verwerking van het beenmerg worden aangetoond. Foto's tonen celmorfologie voor en na de differentiatie, en figuren afbeelden cel fenotype en IL-12 productie na rijping met behulp van CpG worden weergegeven.

Abstract

Myeloïde dendritische cellen (DC's) worden vaak gebruikt om de interacties tussen de aangeboren en adaptieve immuun mechanismen en het begin van de reactie op de infectie te bestuderen. Omdat dit de meest potente antigeen presenterende cellen, worden DCs steeds meer gebruikt als vaccin vector voor de inductie van antigeen-specifieke immuunrespons te bestuderen. In deze video, tonen we de procedure voor het oogsten dij-en bovenbenen van een donor muis, de verwerking van het beenmerg en differentiëren DC's in vitro. De eigenschappen van DCs te veranderen na stimulatie: onrijpe dendritische cellen zijn krachtige fagocyten, terwijl de rijpe DCs zijn in staat om antigeen presentatie en interactie met CD4 + en CD8 + T-cellen. Deze verandering in functionele activiteit komt overeen met de opregulatie van celoppervlaktemerkers en cytokine productie. Veel agenten kunnen gebruikt worden om te rijpen DC's, zoals cytokines en toll-like receptor liganden. In deze video, tonen we flowcytometrische vergelijkingen van de expressie van twee co-stimulerende moleculen, CD86 en CD40, en de cytokine, IL-12, na 's nachts stimulatie met CpG of modellen behandeling. Na de differentiatie, kan DCs verder worden gemanipuleerd voor gebruik als een vaccin vector of om antigeen-specifieke immuunrespons te genereren door in vitro pulserende met behulp van peptiden of eiwitten, of met behulp van recombinante getransduceerde virale vectoren.

Protocol

Dit protocol is een aangepaste versie van Lutz et al. 1. Oogst en verwerking van het beenmerg Isolatie van het scheenbeen en dijbeen: euthanaseren de donor muis en spuit de benen met 70% ethanol. Stevig vastpakken de eerste enkel met stompe tang en begint weg te snijden van de huid en de onderliggende spieren aan het scheenbeen bloot te leggen. Om te voorkomen dat schade aan het bot, langzaam en parallel gesneden om de tibia, waardoor het kniegewricht i…

Discussion

DC's zijn nuttig voor studies van aangeboren en adaptieve immuunsysteem interacties, en kan worden gebruikt als vaccin vector. In deze video, hebben we aangetoond dat de stappen om beenmerg te isoleren en te differentiëren myeloïde dendritische cellen in vitro. Na de cultuur periode kunnen deze cellen microscopisch gevisualiseerd worden zowel als hechtende cellen, die vaak beschikken over dendrieten, en niet-klevende ronde cellen. De DCS kan verder worden gemanipuleerd voor antigeen presentatie door pulseren met een antigeen of gestim…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
recombinant murine GM-CSF	Reagent	Peptrotech	315-03