Culture de cellules dendritiques myéloïdes à partir de précurseurs de moelle osseuse

Summary

Cette vidéo montre la procédure pour différencier les cellules dendritiques myéloïdes de la moelle osseuse de souris. Isolement du tibia et du fémur de souris, et le traitement de la moelle osseuse sont démontrés. Photos montrant la morphologie des cellules avant et après différenciation, et les chiffres illustrant phénotype cellulaire et la maturation de production d'IL-12 suivantes à l'aide CpG sont affichés.

Abstract

Myéloïde des cellules dendritiques (CD) sont fréquemment utilisés pour étudier les interactions entre innée et adaptative des mécanismes immunitaires et la réponse précoce à l'infection. Parce que ce sont les antigènes les plus puissants des cellules présentatrices, les PED sont de plus en plus utilisé comme un vecteur de vaccin à l'étude de l'induction de l'antigène des réponses immunitaires spécifiques. Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure pour la récolte de tibias et les fémurs d'une souris donneuse, le traitement de la moelle osseuse et de différenciation in vitro de PED. Les propriétés du changement PED après stimulation: les cellules dendritiques immatures sont des phagocytes puissants, alors que les PED matures sont capables de présentation des antigènes et l'interaction avec les cellules CD4 + et CD8 +. Ce changement dans l'activité fonctionnelle correspond à la régulation positive des marqueurs de surface cellulaire et la production de cytokines. De nombreux agents peuvent être utilisés pour les PED matures, y compris les cytokines et les ligands de récepteurs toll-like. Dans cette vidéo, nous démontrons comparaisons de cytométrie en flux de l'expression de deux molécules de co-stimulation, CD86 et CD40, et la cytokine, l'IL-12, suite à une stimulation pendant la nuit avec un traitement CpG ou une maquette. Après différenciation, les PED peut être manipulé pour être utilisé comme vecteur de vaccin ou de générer des antigènes spécifiques par des réponses immunitaires in vitro, pulsant en utilisant des peptides ou des protéines, ou transduites à l'aide de vecteurs viraux recombinants.

Protocol

Ce protocole a été adapté de Lutz et al. 1 Récolte et traitement de la moelle osseuse Isolement du tibia et du fémur: Euthanasier la souris donneuse et pulvériser les jambes avec de l'éthanol à 70%. Saisir la cheville premier fermement avec une pince émoussée et de commencer à couper la peau et la musculature sous-jacente pour exposer le tibia. Pour éviter d'endommager l'os, couper lentement et parallèlement au tibia, laissant i…

Discussion

PED sont utiles pour les études d'innée et adaptative des interactions immunitaires, et peut être utilisé comme un vecteur vaccinal. Dans cette vidéo, nous avons démontré les étapes pour isoler la moelle osseuse et de différencier les cellules dendritiques myéloïdes in vitro. Après la période de culture, ces cellules peuvent être visualisés au microscope deux cellules comme adhérente, qui possèdent souvent des dendrites, et les cellules rondes non-adhérents. Les PED peuvent encore être manipulées pour la présentatio…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
recombinant murine GM-CSF	Reagent	Peptrotech	315-03