توليد الأجنة اسماك الزرد همي بواسطة زرع
Summary
دليل خطوة بخطوة لتوليد اجنة استهدفت الزرد خيالية بواسطة زرع في المرحلة الأريمة أو المعيدة.
Abstract
واحدة من أقوى الأدوات المستخدمة لاكتساب المعرفة في العمليات التنموية المعقدة هو تحليل للأجنة خيالية. يتم تعريف كائن خرافي كما يحتوي على خلايا من اكثر من حيوان واحد ؛ الفسيفساء هي نوع واحد من الوهم تمتزج فيه خلايا من اكثر من التركيب الوراثي ، وعادة من النوع البري ومتحولة. في الزرد ، ويمكن بسهولة جعل الوهم زرع خلايا من الجنين المانحة الى الجنين المضيف في المرحلة الجنينية المناسبة. يتم إنشاء خلايا المسمى المانحة عن طريق الحقن من علامة النسب ، مثل صبغة الفلورسنت ، في مرحلة الجنين واحد الخلية. تتم إزالة الخلايا من الأجنة المانحة المسمى المانحة والمضيفة التي أدخلت أجنة غير المسماة باستخدام النفط التي تسيطر عليها ماصة الزجاج التي شنت على مجمع أو مجهر تشريح. يمكن في بعض الحالات تكون الخلايا المانحة التي تستهدف منطقة محددة أو أنسجة النامية الأريمة أو المعيدة مرحلة الجنين المضيف عن طريق اختيار موقع الزرع في الجنين المضيف على أساس خرائط مصير راسخة.
Protocol
Discussion
السهولة التي يمكن استخدامها لانتاج زرع الوهم المستهدفة هي واحدة من القوى العظمى في الزرد كنموذج الفقاريات. وتعديل هذا البروتوكول لا الموصوفة أعلاه يتيح تحليل وظيفة الجين لجينات الأم مع أدوار أساسية في التنمية لاقحي. منذ هذه الأسماك متحولة لا يمكن البقاء على قيد الح?…
Acknowledgements
الشكر لأعضاء لمختبر موينز مدخلات مفيدة أثناء كتابة هذا المقال. هونج كونج هو زميل ما بعد الدكتوراه التي تدعمها المعاهد الوطنية للصحة / معاهد الصحة القومية منح # 5R01HD037909 – 08. CBM هو محقق مع معهد هوارد هيوز الطبي.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Injection rig | Applied Scientific Instrumentation | MPPI-3 | Foot pedal can be ordered separately | |
| Pronase | Sigma | P5147 | “protease type XIV” | |
| Pen-Strep | Sigma | P4458 | 100x stock | |
| Methyl cellulose | Sigma | M-0387 | ||
| Fluorescent dextrans | Molecular Probes/ Invitrogen | various | Eg. lysine-fixable rhodamine dextran (D7162) | |
| Injection pipettes (1.2mmx0.94mmx10cm) | Sutter | BF120-94-10 | ||
| Transplant pipette option 1 | World Precision Instruments | TW100-4 | ||
| Transplant pipette option 2 | VWR | #53508-400 | ||
| micromanipulator | Narishige | UMJ-3FC (?) | ||
| Micromanipulator magnetic stand | Narishige | GJ-1 | ||
| Transplant apparatus | Sutter Instrument Co. | MI-10010 | ||
| Fine micromanipulator | Narishige | MMO-203 | ||
| Depression slides | Fisher | 12560A | ||
| Agar molds for injection and transplants | AL-AN Mfg, Inc. |
Reagents: Recipes for many of the reagents used for these procedures are found in The Zebrafish Book, which is available in full online at http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html. Recipes are provided there for preparation of Fish Water, Embryo Medium with and without antibiotics, pronase for dechorionating, fluorescent dextrans, and methyl cellulose.
References
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book. , (2000).
- Kimmel, C. B., Warga, R. M. Cell lineage and developmental potential of cells in the zebrafish embryo. Trends Genet. 4, 68-74 (1988).
- Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. Origin and organization of the zebrafish fate map. Development. 108, 581-594 (1990).
- Woo, K., Fraser, S. E. Order and coherence in the fate map of the zebrafish nervous system. Development. 121, 2595-2609 (1995).
- Raz, E. Primordial germ-cell development: the zebrafish perspective. Nat Rev Genet. 4, 690-700 (2003).
- Yoon, C., Kawakami, K., Hopkins, N. Zebrafish vasa homologue RNA is localized to the cleavage planes of 2- and 4-cell-stage embryos and is expressed in the primordial germ cells. Development. 124, 3157-3165 (1997).
- Koprunner, M., Thisse, C., Thisse, B., Raz, E. A zebrafish nanos-related gene is essential for the development of primordial germ cells. Genes Dev. 15 (21), 2877-2885 (2001).
- Weidinger, G., Wolke, U., Koprunner, M., Klinger, M., Raz, E. Identification of tissues and patterning events required for distinct steps in early migration of zebrafish primordial germ cells. Development. 126 (23), 5295-5307 (1999).
- Weidinger, G. Regulation of zebrafish primordial germ cell migration by attraction towards an intermediate target. Development. 129 (1), 25-36 (2002).
- Ciruna, B. Production of maternal-zygotic mutant zebrafish by germ-line replacement. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 14919-14924 (2002).
- Waskiewicz, A. J., Rikhof, H. A., Moens, C. B. Eliminating zebrafish pbx proteins reveals a hindbrain ground state. Dev Cell. 3, 723-733 (2002).
- Weidinger, G. dead end, a novel vertebrate germ plasm component, is required for zebrafish primordial germ cell migration and survival. Curr Biol. 13, 1429-1434 (2003).
- Blaser, H. Transition from non-motile behaviour to directed migration during early PGC development in zebrafish. J Cell Sci. 118, 4027-4038 (2005).
