هذا البروتوكول وصف العزلة والتوسع اللاحق في خلايا انسجة وخلايا اللحمة المتوسطة مستعمرة البطانية التي تشكل من دون استخدام الحيوان مصل لتوليد أزواج ذاتي لأغراض زراعة تجريبية.
Abstract
الحبل السري مصدرا غنيا للخلايا الاصلية مع إمكانات عالية التكاثري بما في ذلك الخلايا اللحمية الوسيطة (وتسمى أيضا الخلايا الجذعية الوسيطة ، MSCS) والخلايا البطانية التي تشكل مستعمرة السلف (ECFCs). كلا النوعين من الخلايا اللاعبين الرئيسيين في المحافظة على سلامة الأنسجة وربما تشارك أيضا في عمليات التجدد وتشكيل الأورام.
لدراسة البيولوجيا وظيفة بطريقة نسبية من المهم أن يكون كل أنواع الخلايا المتاحة من الجهات المانحة نفسها. قد يكون من المفيد أيضا لأغراض التجدد واللجان الدائمة لاستخلاص ECFCs من النسيج نفسه.
لأن العلاجات الخلوية وينبغي أن تجد طريقها من مقاعد البدلاء إلى جانب السرير أنشأنا طريقة جديدة لعزل وتوسيع الخلايا الاصلية من دون استخدام البروتين الحيواني. استبدال تجمع الصفيحات lysate الإنسان (pHPL) مصل بقري جنيني في جميع خطوات بروتوكول جهدنا لتجنب الاتصال تماما من الخلايا البروتينات لأعضاء غير بشرية.
هذا الفيديو يوضح منهجية لعزل وتوسيع الخلايا الاصلية من الحبل السري واحد.
وسيتم شرح جميع المواد والإجراءات.
Protocol
الجزء 1 : إعداد 1. إعداد مستنبت الخلية قبل البدء في إعداد المتوسطة جمع كل المواد والأدوات التي سوف تحتاج إليها. ذوبان الجليد 2 × 56 مل من aliquots lysate تجميع الصفائح الدموية البشرية (pHPL ، عصامي : مرجع 1 …
Discussion
هناك مجموعة متنوعة من المصادر التي تحصل على اللجان الدائمة أو ECFCs بما نخاع العظام ، والأنسجة الدهنية ، دم الحبل السري ، الخ.
فمن الضروري الحصول على كلا النوعين من الأسلاف من المصدر نفسه للمقارنة مباشرة إشراك أنواع مختلفة من الخلا?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر كاتارينا Schallmoser لتوفير pHPL ، إيفا ورود هوفمان نيكول للتعليقات مفيدة للمخطوطة ، ومارغريتا دانييلا ثالر hwirth الأب للحصول على المساعدة التقنية ، ومونيكا لتحرير فاريل لغوية ، لانج أوفه ، Holzapfel مارجيت وساندرا Eppich في قسم التوليد لتوفير الحبال.
وقد تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة الأبحاث النمساوية (FWF ، منح N211 – NAN إلى DS) ، لتعزيز البحوث النمساوية وكالة (FFG ، ومنحة لN200 DS) والخلايا الجذعية للبالغين ومؤسسة أبحاث (ع). AR وزميل في الطب الجزيئي برنامج الدكتوراه من كلية الطب بجامعة غراتس.
Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs). J. Vis. Exp. (32), e1525, doi:10.3791/1525 (2009).