Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung und anschließende Expansion von mesenchymalen Stromazellen und Endothelzellen Kolonie-bildenden Zellen, ohne die Verwendung von tierischen Serum autologen Paare für experimentelle Zwecke der Transplantation zu generieren.
Abstract
Die Nabelschnur ist eine reiche Quelle für Stammzellen mit hoher proliferative Potenzial, einschließlich mesenchymale Stromazellen (auch als mesenchymale Stammzellen, MSCs) und Endothelzellen koloniebildenden Progenitorzellen (ECFCs). Beide Zelltypen sind wichtige Akteure bei der Aufrechterhaltung der Integrität des Gewebes und sind wahrscheinlich auch in regenerative Prozesse und Tumorbildung beteiligt.
Zur Untersuchung ihrer Biologie und Funktion in einer vergleichenden Weise ist es wichtig, beide Zelltypen Verfügung vom gleichen Spender haben. Es kann auch nützlich sein für regenerative Zwecke abzuleiten MSCs und ECFCs aus dem gleichen Gewebe.
Da zelluläre Therapeutika schließlich finden sollten ihren Weg vom Labor zum Krankenbett haben wir eine neue Methode zur Isolierung und weiter ausbauen Vorläuferzellen ohne die Verwendung von tierischem Eiweiß. Pooled menschlichen Thrombozyten-Lysat (PHPL) ersetzt Rinderfötenserum in alle Schritte unseres Protokolls vollständig vermeiden Sie den Kontakt der Zellen an xenogenen Proteinen.
Dieses Video zeigt eine Methodik für die Isolierung und Expansion von Vorläuferzellen aus einer Nabelschnur.
Alle Materialien und Verfahren beschrieben werden.
Protocol
Teil 1: Einrichten 1. Vorbereitung von Zellkulturmedium Vor dem Start des Mediums Vorbereitung sammeln alle Materialien und Werkzeuge, die Sie benötigen. Thaw 2 x 56 ml Aliquots von gepoolten menschlichen Thrombozyten-Lysat (PHPL, self-made: Referenz 1 & JoVE # 1523), 10 ml einer 100x Penicillin / Streptomycin-Lösung, 2 x 5 ml L-Glutamin (beide Sigma). Auftauen Zytokin-und Wachstumsfaktor Aliquots (VEGF, bFGF, EGF, IGF, Hydroc…
Discussion
Es gibt eine Vielzahl von Quellen, aus denen MSCs oder ECFCs einschließlich Knochenmark, Fettgewebe, Nabelschnurblut, etc. zu bekommen, um
Es ist notwendig, um beide Arten von Vorläuferzellen aus der gleichen Quelle direkt miteinander zu vergleichen die Beteiligung der verschiedenen Zelltypen in Prozesse wie Gewebe-und Gefäß Regeneration oder Beitrag zur Tumorprogression.
Die Leichtigkeit, mit der zu isolieren und anschließend studieren autologen Paare ECFCs…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich Katharina Schallmoser für die Bereitstellung PHPL, Eva Rohde und Nicole Hofmann für hilfreiche Kommentare zum Manuskript, Daniela Thaler und Margaretha Fr hwirth für die technische Unterstützung, Monica Farrell für die sprachliche Bearbeitung, Uwe Lang, Margit Holzapfel und Sandra Eppich am Institut für Geburtshilfe für die Bereitstellung der Leitungen.
Diese Arbeit wurde von der Austrian Research Foundation (FWF, gewähren N211-NAN zu DS), der Österreichischen Forschungsförderungsgesellschaft (FFG, gewähren N200 zum DS) und The Adult Stem Cell Research Foundation (AR) unterstützt worden. AR ist ein Fellow des PhD-Programm Molecular Medicine der Medizinischen Universität Graz.
Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs). J. Vis. Exp. (32), e1525, doi:10.3791/1525 (2009).