İnsan Göbek kordonu İzolasyon ve Hayvan Serum Genişleme Mezenkimal stromal hücreler (MKH) ve endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler (ECFCs) Türetilmiş
Summary
Bu protokol deneysel nakli amaçlı otolog yaratmanız serum hayvan kullanmadan mezenkimal stromal hücreleri ve endotel koloni oluşturan hücrelerin izolasyonu ve sonraki genişleme açıklamaktadır.
Abstract
Göbek kordonu, mezenkimal stromal hücreler (mezenkimal kök hücreler olarak da adlandırılır, MKH) ve endotel progenitör hücrelerin koloni oluşturan (ECFCs) de dahil olmak üzere yüksek proliferatif potansiyele sahip progenitör hücreler için zengin bir kaynaktır. Her iki hücre tipleri, doku bütünlüğünün korunmasında anahtar oyuncular ve muhtemelen de rejeneratif süreçleri ve tümör oluşumu ilgilidirler.
Biyoloji ve karşılaştırmalı bir şekilde çalışma için aynı vericiden alınan hücreler türleri olması önemlidir. Ayrıca aynı doku MKH ve ECFCs türetmek için rejeneratif amaçlar için faydalı olabilir.
Hücresel terapötikler sonunda Masadan yatağın başucuna kendi yolunu bulmak gerekir çünkü biz, izole etmek için yeni bir yöntem kurulmuş ve daha fazla hayvansal protein kullanmadan progenitör hücrelerin genişletmek. Pooled insan trombosit lizatı (pHPL) fetal sığır serumu tamamen xenogeneic proteinler hücreleri temas önlemek için tüm adımları protokol yerini aldı.
Bu video bir göbek kordonu progenitör hücrelerin izolasyonu ve genişleme için bir metodoloji ortaya koymaktadır.
Tüm malzeme ve usulleri açıklanan olacaktır.
Protocol
Discussion
Kemik iliği, yağ dokusu, kordon kanı, vb de dahil olmak üzere MKH veya ECFCs almak için çeşitli kaynaklardan vardır
Bu doku ve damar yenilenme veya tümör progresyonu katkı gibi süreçlerde farklı hücre tiplerinin doğrudan katılımını karşılaştırmak için aynı kaynaktan atalarıdır iki türlü elde etmek için gereklidir.
Izole etmek ve daha sonra aynı donörden ECFCs ve MKH otolog çiftleri çalışma kolaylığı olan bu yöntem bireysel…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar yazının yararlı yorumlar, Daniela Thaler ve Margaretha Fr hwirth teknik yardım için, dil düzenleme için Monica Farrell, Uwe Lang, Margit Holzapfel ve Kadın Hastalıkları Bölümü Sandra Eppich pHPL, Eva Rohde ve Nicole Hofmann sağlamak için Katharina Schallmoser teşekkür Kabloları sağlamak için.
Bu çalışma, Avusturya Araştırma Vakfı (FWF, DS hibe N211-NAN), Avusturya Araştırma Promosyon Ajansı (FFG, hibe N200 DS) ve Yetişkin Kök Hücre Araştırma Vakfı (AR) tarafından desteklenmiştir. AR doktora programı Graz Üniversitesi Tıp Fakültesi Moleküler Tıp üyesidir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
References
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
