תא בודד יניקה הקלטות של photoreceptors קון עכבר
Summary
אנחנו נראה איך להקליט תגובות פלאש מן קונוסים עכבר בודד באמצעות אלקטרודה יניקה.
Abstract
רוד חרוט קולטני האור ברשתית אחראים לגילוי האור. בחושך, מחזורית נוקלאוטיד-מגודרת (CNG) ערוצי בקטע החיצוני פתוחים ולאפשר קטיונים לזרום פנימה בהדרגה על פני קרום, depolarizing התא. חשיפה לאור מעורר את סגירת הערוצים CNG, חוסם את זרימת קטיון פנימה הנוכחי, ולכן התוצאות hyperpolarization התא. בהתבסס על הקוטביות של קולטני האור, שיטת ההקלטה יניקה פותחה בשנות ה -1970, שבניגוד טכניקת התיקון-clamp קלאסי, אינו מחייב לחדור הממברנה הפלסמטית<sup> 1</sup>. ציור קטע החיצוני לתוך פיפטה כוס בחוזקה, הולם מלאים פתרון תאיים מאפשר הקלטה השינויים הנוכחית תאים בודדים בחשיפה מבחן פלאש. עם זאת, ומבוססת "החיצוני פלח-in (OS-in)" הקלטה יניקה אינו מתאים הקלטות חרוט העכבר, בגלל האחוז הנמוך של חרוטים ברשתית העכבר (3%) ואת הקשיים בזיהוי חרוט החיצוני מגזרים. לאחרונה, קטע הפנימית ב-(IS-in) הקלטה תצורה פותחה כדי לצייר את המקטע הפנימי / אזור הגרעין של photoreceptor לתוך פיפטה הקלטה<sup> 2,3</sup>. בסרטון הזה, אנו מראים כיצד להקליט מאדם חרוט photoresponses עכבר באמצעות תא יחיד אלקטרודה יניקה.
Protocol
Discussion
תא בודד הקלטה יניקה מן התאים קולטי האור פותחה 3 עשורים. זה מאפשר לנו להקליט קרום טרנס השינוי הנוכחי המושרה על ידי גירוי האור מבלי לחדור קרום התא. בגלל הידבקות תאים תאים גבוהה, קשה לבודד את מוט יחיד חרוט בריא מן הרשתית כמו עכבר הרשתית דוחי וקשה למצוא קונוסים בודדים בשל א…
Acknowledgements
נתמך על ידי פרס פיתוח קריירה של מחקר כדי למנוע עיוורון, NIH מענק EY 019312, ולהעניק בלתי מוגבל של מחקר כדי למנוע עיוורון ו EY 02,687 (מחלקת עיניים & חזותית למדעים באוניברסיטת וושינגטון).
References
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms. J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).
- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
- Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation. J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).
- Calvert, P. D. Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).
